蜈蚣产品中喹啉类成分的指纹图谱检测方法与流程

本发明涉及中药检测，具体涉及一种蜈蚣产品中喹啉类成分的指纹图谱检测方法，进一步涉及蜈蚣产品中喹啉类成分的指纹图谱检测方法、含量测定方法以及质量控制方法。

背景技术：

1、蜈蚣配方颗粒是由中药蜈蚣经提取、浓缩、制粒所得。中药蜈蚣为蜈蚣科动物少棘巨蜈蚣scolopendra subspinipes mutilans l.koch的干燥体，主要含有喹啉类、氨基酸类和核苷化合物等多种成分，常用于息风镇痉，通络止痛，攻毒散结。

2、《中国药典》2020年版对蜈蚣的质量控制主要包括原药材品种、饮片炮制、饮片性状、理化鉴别等项目，也有部分文献对蜈蚣中的化学成分进行阐述，指出小分子化合物喹啉类成分为蜈蚣的主要活性成分之一。但是，由于饮片与药物制剂在性状等方面的差异，导致适用于蜈蚣饮片的质量检测方法并不能适用于蜈蚣药物制剂的质量检测。

3、相关技术中也存在针对蜈蚣药物制剂的检测方法，但是，这些方法通常仅能检测单一成分，难以从整体上快速地对蜈蚣药物制剂进行质量检测。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明提供了一种蜈蚣产品中喹啉类成分的指纹图谱检测方法、含量测定方法以及质量控制方法，以解决利用相关技术难以从整体上快速地对蜈蚣药物制剂进行质量检测的问题。

2、第一方面，本发明提供了一种蜈蚣产品中喹啉类成分的指纹图谱检测方法，包括如下步骤：

3、取供试品溶液，采用超高效液相色谱法进行检测；其中，所述超高效液相色谱法的色谱条件包括：

4、以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相a，以8mmol/l～12mmol/l的磷酸二氢钾水溶液为流动相b，进行梯度洗脱，梯度洗脱程序包括：

5、0～5min，流动相中甲醇的体积百分比为5％；

6、5～30min，流动相中甲醇的体积百分比为5％→20％；

7、30～35min，流动相中甲醇的体积百分比为20％；

8、35～45min，流动相中甲醇的体积百分比为20％→40％；

9、45～55min，流动相中甲醇的体积百分比为40％。

10、本发明提供的上述蜈蚣产品中喹啉类成分的指纹图谱检测方法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-磷酸二氢钾水溶液为流动相进行梯度洗脱，选用特定的洗脱程序，能够检测得到含有6个共有特征峰的指纹图谱，不仅显著提升了共有特征峰的数量，还实现了这些共有特征峰的良好分离；该指纹图谱检测方法的洗脱程序简单，得到的指纹图谱基线平稳，各特征峰峰形好、各特征峰之间分离度高，且能够准确定位3，8-二羟基喹啉峰的峰位置，有利于蜈蚣产品的全面质量检测和整体质量控制，从而有助于提高该药物使用的安全性和稳定均一性，为蜈蚣产品的质量检测和控制提供依据。

11、采用上述指纹图谱检测方法，能够构建得到蜈蚣产品的指纹图谱，并且，得到的指纹图谱的特征性强、色谱信息丰富，能够充分展示蜈蚣产品的喹啉类化学成分特征；此外，上述检测方法的分离度好、精密度高、稳定性和重复性好，能够全面、快速地检测蜈蚣产品中的喹啉类成分及其含量。

12、在一种可选的实施方式中，所述超高效液相色谱法的色谱条件还包括如下条件中的至少一项：

13、1)检测波长为250nm～254nm；

14、2)柱温为33℃～37℃；

15、3)流速为0.2ml/min～0.4ml/min；

16、4)进样量为2μl～4μl；

17、5)色谱柱为shim-pack gist c18-aq hp色谱柱，内径2.1mm，柱长100mm，粒径1.9μm。

18、在一种可选的实施方式中，所述供试品溶液的制备方法如下：

19、取供试品，加溶剂，经提取、固液分离，取液体，得到所述供试品溶液；

20、可选地，所述溶剂为甲醇水溶液，所述甲醇水溶液中甲醇的体积百分含量为40％～60％；

21、可选地，相对于0.1g所述供试品，所述溶剂的加入量为20ml～30ml；

22、可选地，所述提取为超声提取，超声时间为20min～40min。

23、在一种可选的实施方式中，所述指纹图谱检测方法还包括采用3,8-二羟基喹啉对照品制备对照品溶液的步骤，以及采用所述超高效液相色谱法检测所述对照品溶液得到对照品参照图谱的步骤。

24、在一种可选的实施方式中，所述指纹图谱检测方法还包括采用蜈蚣对照药材制备对照药材溶液的步骤，以及采用所述超高效液相色谱法检测所述对照药材溶液得到对照药材参照图谱的步骤；

25、可选地，所述对照药材溶液的制备过程包括：取蜈蚣对照药材，经加水并加热回流后，固液分离并取液体，蒸干，所得残渣加溶剂，经提取、固液分离后，取液体。

26、在一种可选的实施方式中，所述蜈蚣产品包括蜈蚣药材、蜈蚣饮片和蜈蚣药物制剂中的至少一种；可选地，所述蜈蚣药物制剂包括蜈蚣配方颗粒。

27、第二方面，本发明提供了一种蜈蚣产品中喹啉类成分的含量测定方法，包括如下步骤：

28、取供试品溶液和对照品溶液，分别采用上述的指纹图谱检测方法中的超高效液相色谱法进行检测；

29、其中，对照品包括3,8-二羟基喹啉对照品。

30、第三方面，本发明提供了上述的指纹图谱检测方法和/或含量测定方法在蜈蚣产品中喹啉类成分的质量控制中的应用。

31、第四方面本发明提供了一种蜈蚣产品中喹啉类成分的质量控制方法，包括按照上述的指纹图谱检测方法获得待测蜈蚣产品的指纹图谱，并采用该指纹图谱与对照指纹图谱进行比对的步骤；

32、其中，所述对照指纹图谱为使用至少一批蜈蚣产品的标准品按照上述的指纹图谱检测方法得到的指纹图谱通过平均值或中位数法拟合后得到；

33、和/或，包括按照上述的含量测定方法对待测蜈蚣产品中喹啉类成分进行含量测定的步骤。

34、在一种可选的实施方式中，所述对照指纹图谱包括6个共有特征峰，其中，峰5为3,8-二羟基喹啉峰；

35、以3,8-二羟基喹啉峰为s峰，各特征峰与s峰的相对保留时间在规定值的±10％范围之内，其中，峰1对应的规定值为0.18、峰2对应的规定值为0.26、峰3对应的规定值为0.47、峰4对应的规定值为0.83、峰6对应的规定值为1.45；

36、可选地，所述蜈蚣产品为少棘巨蜈蚣产品，峰6与s峰的相对峰面积在规定值范围以内，规定值范围为0.040～0.19；

37、可选地，所述待测蜈蚣产品的指纹图谱与所述对照指纹图谱的相似度大于0.90。

技术特征：

1.一种蜈蚣产品中喹啉类成分的指纹图谱检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的指纹图谱检测方法，其特征在于，所述超高效液相色谱法的色谱条件还包括如下条件中的至少一项：

3.根据权利要求1所述的指纹图谱检测方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备方法如下：

4.根据权利要求1所述的指纹图谱检测方法，其特征在于，所述指纹图谱检测方法还包括采用3,8-二羟基喹啉对照品制备对照品溶液的步骤，以及采用所述超高效液相色谱法检测所述对照品溶液得到对照品参照图谱的步骤。

5.根据权利要求1所述的指纹图谱检测方法，其特征在于，所述指纹图谱检测方法还包括采用蜈蚣对照药材制备对照药材溶液的步骤，以及采用所述超高效液相色谱法检测所述对照药材溶液得到对照药材参照图谱的步骤；

6.根据权利要求1至5中任一项所述的指纹图谱检测方法，其特征在于，所述蜈蚣产品包括蜈蚣药材、蜈蚣饮片和蜈蚣药物制剂中的至少一种；

7.一种蜈蚣产品中喹啉类成分的含量测定方法，其特征在于，包括如下步骤：

8.权利要求1～6中任一项所述的指纹图谱检测方法和/或权利要求7所述的含量测定方法在蜈蚣产品中喹啉类成分的质量控制中的应用。

9.一种蜈蚣产品中喹啉类成分的质量控制方法，其特征在于，

10.根据权利要求9所述的质量控制方法，其特征在于，所述对照指纹图谱包括6个共有特征峰，其中，峰5为3,8-二羟基喹啉峰；

技术总结
本发明涉及中药检测技术领域，公开了一种蜈蚣产品中喹啉类成分的指纹图谱检测方法。采用上述指纹图谱检测方法，能够构建得到蜈蚣产品的指纹图谱，并且，得到的指纹图谱的特征性强、色谱信息丰富，能够充分展示蜈蚣产品的喹啉类化学成分特征；此外，上述检测方法的分离度好、精密度高、稳定性和重复性好，能够全面、快速地检测蜈蚣产品中的喹啉类成分及其含量。

技术研发人员：江斌,蔡小兵,梁素仪,李璐,张辉,谭沛,郑晓英
受保护的技术使用者：华润三九现代中药制药有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15