一种小儿风热清合剂特征图谱的建立方法及特征图谱与流程

本发明总体地涉及中药成分检测的，具体涉及小儿风热清合剂小儿风热清合剂特征图谱的建立方法及特征图谱。

背景技术：

1、小儿风热清合剂由金银花、连翘、板蓝根、薄荷、柴胡、牛蒡子、荆芥穗、石膏、黄芩、栀子、桔梗、赤芍、芦根、炒苦杏仁、淡竹叶、枳壳、炒六神曲、僵蚕、防风、甘草20味药经煎煮后浓缩，沉淀、过滤，再历经灌装，灭菌等现代化制药先进工艺制成，具有辛凉解表、清热解毒、止咳利咽之功效，适用于发热、咳嗽、咳痰、鼻塞流涕、咽喉红肿疼痛等症状。

2、由于中成药成分复杂，单一的指标难以全面控制产品的质量，中成药是一个多组分、多靶点的体系，强调的是整体性，因此建立全面反映主要成分的特征图谱，能够较全面的反映出中成药的内在质量，从整体性综合控制与评价中成药。

3、中药特征图谱是中成药中所共有的具有特征性的某一类成分的色谱或光谱图谱，具有整体性、模糊性和可量化性，作为一种有效的质量控制模式，其专属性与特征性强，目前已成为中成药质量控制与评价的有效方法，得到行业的认可。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种小儿风热清合剂特征图谱的建立方法及特征图谱，建立方法具有操作简便、快速、检测成本低、重现性好和信息量大等优点，为小儿风热清合剂质量的全面有效控制提供了有力保障；所提供的特征图谱特征峰专属性强、容易识别。

2、本发明的技术方案是，首先提供一种小儿风热清合剂特征图谱的建立方法，包括以下步骤：

3、s1、对照品溶液的制备：取与小儿风热清合剂组成成分对应的化学物质作为对照品，分别配制成溶液，得到对照品溶液；

4、s2、供试品溶液的制备：吸取小儿风热清合剂，用纯化水稀释，摇匀，过滤，即得供试品溶液；

5、s3、色谱条件与系统适应性实验：设置高效液相色谱系统条件，其中色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，流动相为乙腈-0.1vt％磷酸水溶液、乙腈-水、甲醇-0.1vt％磷酸中的一种，采用梯度洗脱，柱温：20～40℃；紫外检测波长190～400nm，时间90min；进样量2-3μl，优选2μl；

6、s4、测定：采用高效液相色谱法分别检测供试品溶液和对照品溶液，获得供试品溶液的特征图谱和对照品溶液的特征图谱，将供试品溶液的特征图谱与对照品溶液的特征图谱比较保留时间进行定性，对供试品溶液特征图谱中的指标成分进行归属定位，从而获得药物制剂的特征图谱。

7、进一步的，上述步骤s1中，所述对照品包括：绿原酸对照品、芍药苷对照品、黄芩苷对照品、连翘苷对照品、牛蒡苷对照品、柚皮苷对照品、新橙皮苷对照品；其配制成溶液的方法为：分别精密称定各对照品，并分别加甲醇制成每1m l含0.1mg的溶液。

8、进一步的，上述步骤s2中，所述稀释是指：吸取1.00m l小儿风热清合剂，用纯化水稀释至10m l摇匀；所述过滤使用0.22μm水系微孔滤膜过滤。

9、进一步的，上述步骤s3中，流动相为乙腈-0.1vt％磷酸水溶液，其中，a相为乙腈，b相为0.1vt％磷酸水溶液；柱温：30℃；紫外检测波长230nm；

10、梯度洗脱中，色谱柱为thermo accucore aq，采用柱长100mm，内径2.1mm，粒度2.6μm的短柱。

11、进一步的，上述步骤s3中，采用以下方式进行梯度洗脱：从0～5min，流动相a的体积百分含量为3％，流动相b的体积百分含量为97％；从5～10min，流动相a的体积百分含量由3％提高至5％，流动相b的体积百分含量由97％降低至95％；从10～20min，流动相a的体积百分含量为7％，流动相b的体积百分含量为93％；从20～35min，流动相a的体积百分含量为15％，流动相b的体积百分含量为85％；从35～55min，流动相a的体积百分含量为20％，流动相b的体积百分含量为80％；从55～70min，流动相a的体积百分含量为50％，流动相b的体积百分含量为50％；从70～80min，流动相a的体积百分含量为100％，流动相b的体积百分含量为0％；从80～90min，流动相a的体积百分含量由100％降低至3％，流动相b的体积百分含量由0％升高至97％。

12、进一步的，上述步骤s4包括以下步骤：

13、步骤a、按照步骤s2制备不同批次的小儿风热清合剂供试品溶液，并进行高效液相色谱检测，获得不同批次的小儿风热清合剂供试品溶液的特征图谱，然后生成共有特征图谱，以图谱中均存在的色谱峰作为共有特征峰，确定共有特征峰的相对保留时间，建立小儿风热清合剂的标准特征图谱；

14、步骤b、测定步骤s1中各对照品的特征图谱，得到对照品溶液的特征图谱；

15、步骤c、将建立的小儿风热清合剂的标准特征图谱与对照品溶液的特征图谱进行比较，定位小儿风热清合剂的标准特征图谱中的各特征峰，具体的定位结果是：所述步骤c定位小儿风热清合剂的标准特征图谱中的各特征峰的结果是：确定所述2号峰为绿原酸的特征峰，所述6号峰为芍药苷的特征峰，所述10号峰为柚皮苷的特征峰，所述13号峰为新橙皮苷的特征峰，所述16号峰为黄芩苷的特征峰，所述17号峰为连翘苷的特征峰，所述18号峰为牛蒡苷的特征峰。

16、进一步的，步骤s3的高效液相色谱系统中，检测器为二极管阵列检测器。

17、本发明还提供了一种小儿风热清合剂特征图谱，它上述小儿风热清合剂特征图谱的建立方法得到，共包括20个共有峰，各共有峰的相对保留时间分别为：1-0.1822、2-0.3425、3-0.4150、4-0.4381、5-0.4670、6-0.5556、7-0.6397、8-0.7359、9-0.8086、10-0.9270、11-0.9503、12-0.9618、13-1.0000、14-1.0363、15-1.0475、16-1.0994、17-1.1410、18-1.1565、19-1.1867、20-1.3430。

18、本发明采用优化条件的前处理及高效液相色谱方法，建立了小儿风热清合剂的特征图谱，能够对小儿风热清合剂中的7个化学成分进行分析，保证小儿风热清合剂成分中有效成分的量相对稳定，从而保证临床用药的安全有效。本发明方法能全面的、准确的评价药物制剂的整体的、内在的质量。

19、本发明相比现有技术的有益性在于：

20、小儿风热清合剂的处方20味药材中，可用液相紫外检测器测定的有：金银花、连翘、板蓝根、柴胡、牛蒡子、荆芥穗、黄芩、栀子、赤芍和炒苦杏仁。而能用本发明液相色谱洗脱程序检测的有金银花、赤芍、黄芩、连翘、牛蒡子和栀子，几种代表性化合物成分为：绿原酸、芍药苷、黄芩苷、连翘苷、牛蒡苷、柚皮苷和新橙皮苷，经分析各成分的光谱图特征明显，在本发明确定的光谱范围内进行识别和筛选，其图谱能够反映大部分药材的信息，且基线平整、干扰少、分离情况较好。

技术特征：

1.一种小儿风热清合剂特征图谱，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的小儿风热清合剂特征图谱的建立方法，其特征在于，

3.如权利要求1所述的小儿风热清合剂特征图谱的建立方法，其特征在于，所述步骤s2中，所述稀释是指：吸取1.00ml小儿风热清合剂，用纯化水稀释至10ml摇匀；所述过滤使用0.22μm水系微孔滤膜过滤。

4.如权利要求1所述的小儿风热清合剂特征图谱的建立方法，其特征在于，所述步骤s3中，

5.如权利要求4所述的小儿风热清合剂特征图谱的建立方法，其特征在于，所述步骤s3中，采用以下方式进行梯度洗脱：从0～5min，流动相a的体积百分含量为3％，流动相b的体积百分含量为97％；从5～10min，流动相a的体积百分含量由3％提高至5％，流动相b的体积百分含量由97％降低至95％；从10～20min，流动相a的体积百分含量为7％，流动相b的体积百分含量为93％；从20～35min，流动相a的体积百分含量为15％，流动相b的体积百分含量为85％；从35～55min，流动相a的体积百分含量为20％，流动相b的体积百分含量为80％；从55～70min，流动相a的体积百分含量为50％，流动相b的体积百分含量为50％；从70～80min，流动相a的体积百分含量为100％，流动相b的体积百分含量为0％；从80～90min，流动相a的体积百分含量由100％降低至3％，流动相b的体积百分含量由0％升高至97％。

6.如权利要求1所述的小儿风热清合剂特征图谱的建立方法，其特征在于，所述步骤s4包括以下步骤：

7.如权利要求6所述的小儿风热清合剂特征图谱的建立方法，其特征在于，所述步骤c定位小儿风热清合剂的标准特征图谱中的各特征峰的结果是：确定所述2号峰为绿原酸的特征峰，所述6号峰为芍药苷的特征峰，所述10号峰为柚皮苷的特征峰，所述13号峰为新橙皮苷的特征峰，所述16号峰为黄芩苷的特征峰，所述17号峰为连翘苷的特征峰，所述18号峰为牛蒡苷的特征峰。

8.如权利要求1所述的小儿风热清合剂特征图谱的建立方法，其特征在于，所述步骤s3的高效液相色谱系统中，检测器为二极管阵列检测器。

9.一种小儿风热清合剂特征图谱，其特征在于，它根据权利要求1-8中任一权利要求所述的小儿风热清合剂特征图谱的建立方法得到，共包括20个共有峰，各共有峰的相对保留时间分别为：1-0.1822、2-0.3425、3-0.4150、4-0.4381、5-0.4670、6-0.5556、7-0.6397、8-0.7359、9-0.8086、10-0.9270、11-0.9503、12-0.9618、13-1.0000、14-1.0363、15-1.0475、16-1.0994、17-1.1410、18-1.1565、19-1.1867、20-1.3430。

技术总结
本发明涉及一种小儿风热清合剂特征图谱的建立方法，包括以下步骤：(1)对照品溶液的制备：取绿原酸对照品、芍药苷对照品、黄芩苷对照品、连翘苷对照品、牛蒡苷对照品、柚皮苷对照品、新橙皮苷对照品适量，制成溶液；(2)供试品溶液的制备：吸取小儿风热清合剂，稀释、摇匀、过滤即得；(3)测定：采用高效液相色谱法分别检测供试品溶液和对照品溶液，获得供试品溶液的特征图谱和对照品溶液的特征图谱，进行比较保留时间定性、指标成分进行归属定位，从而获得药物制剂的特征图谱。

技术研发人员：陈致慜,庞秋超,菅玲玲
受保护的技术使用者：邯郸制药股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15