一种偶氮类化合物与氧化偶氮类化合物的分离分析方法与流程

本发明属于分析化学领域，更具体地，涉及一种偶氮类化合物与氧化偶氮类化合物的分离分析方法。

背景技术：

1、目前，现有的技术或文献中很少有关于偶氮类化合物与其氧化偶氮类化合物的分离分析技术，在常规合成产品中，氧化偶氮类常作为一种常见杂质存在，因为其极性相同，在常规液相分析检测中，其两者的保留时间基本一致，无法有效分离并分析其中杂质含量，故需要针对此问题开发一种分离分析偶氮类化合物与其氧化偶氮化合物测定的方法。

技术实现思路

1、本发明的目的是针对以上不足，提供一种偶氮类化合物与氧化偶氮类化合物的分离分析方法，能够实现偶氮类化合物和氧化偶氮类化合物的完全分离，可以对氧化偶氮类化合物中偶氮类化合物的含量及纯度进行检测分析，更好地控制另一杂质的含量。

2、为实现上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：

3、一种偶氮类化合物与氧化偶氮类化合物的分离分析方法，所述方法包括以下步骤：

4、a.采用甲醇或乙腈溶液配制偶氮类化合物其与氧化偶氮类化合物的混合待测样品溶液；

5、b.将偶氮类化合物与氧化偶氮类化合物的混合待测样品溶液采用高效液相色谱法检测，以磷酸水溶液为水相流动相，甲醇或乙腈为有机相流动相进行梯度洗脱，得到待测品的高效液相色谱图；所述流动相的流速为0.6-1.0ml/min。

6、本发明所述偶氮类化合物结构式为式1，氧化偶氮类化合物的结构式为式2：

7、

8、优选的，所述色谱柱载体为硅胶或经表面处理的硅胶颗粒，键合相含极性基团，或键合相为非极性基团但未封端色谱柱，该色谱柱载体可以提供较强的氢键作用力。

9、优选的，所述色谱柱为waters xbridge shield rp18；规格为3.5um,4.6*150mm。

10、优选的，所述梯度洗脱的程序包括：

11、时间：0→8min→20min→22min→24min→26min→27min，有机相流动相的体积百分数为：5％→10％→10％→80％→80％→5％→5％。

12、优选的，所述磷酸水溶液的浓度为0.01-1.0v/v％，进一步优选浓度为0.05-0.2v/v％，再进一步优选浓度为0.1v/v％。

13、优选的，所述梯度洗脱的进样量为2μl。

14、优选的，所述流动相的流速为0.8ml/min。

15、优选的，所述色谱柱的柱温为25-40℃，进一步优选柱温为25-35℃，再进一步优选柱温为30℃。

16、上述洗脱过程涉及的参数可影响峰型和分离度。

17、优选的，所述高效液相色谱法检测的紫外光波长为200～250nm，进一步优选检测波长为210nm。

18、本发明中，术语“偶氮类化合物”和“氧化偶氮类化合物”在没有明确区分的情况下，可以是纯品、原料药、合成品等产品。本发明的测定方法均适用于上述产品的检测，并且这些产品的测定方法也包含于本发明的保护范围内。

19、与现有技术相比，本发明的有益效果为：

20、本发明中根据检测到的色谱图可以有效显示偶氮类化合物与氧化偶氮类化合物混合待测品溶液的分离效果，在实际应用中可根据色谱图算出偶氮类化合物与氧化偶氮类化合物的分离度，可以对氧化偶氮类化合物与中氧化偶氮类化合物的含量及纯度进行检测分析，更好地控制另一杂质的含量；同时借鉴此方法可以制备相应的偶氮类化合物与氧化偶氮类化合物；

21、本发明所述分离分析方法利用偶氮类化合物与氧化偶氮类化合物结构上的差异以及该差异对应的氢键作用力大小差异，在反相色谱体系中利用氢键作用力的不同，调节流动相组份和构成，能够实现偶氮类化合物和氧化偶氮类化合物的完全分离；具有空白基线无干扰、专属性强、分离度好等特点，是适用于偶氮类化合物与氧化偶氮类化合物的一种分离分析方法。

技术特征：

1.一种偶氮类化合物与氧化偶氮类化合物的分离分析方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的偶氮类化合物与氧化偶氮类化合物的分离分析方法，其特征在于，所述高效液相色谱法采用的色谱柱载体为硅胶或经经表面处理的硅胶颗粒，键合相含极性基团，或键合相为非极性基团但未封端色谱柱。

3.根据权利要求2所述的偶氮类化合物与氧化偶氮类化合物的分离分析方法，其特征在于，所述色谱柱为waters xbridge shield rp18；规格为3.5um,4.6*150mm。

4.根据权利要求1所述的偶氮类化合物与氧化偶氮类化合物的分离分析方法，其特征在于，所述梯度洗脱的程序包括：

5.根据权利要求1所述的偶氮类化合物与氧化偶氮类化合物的分离分析方法，其特征在于，所述磷酸水溶液的浓度为0.01-1.0v/v％。

6.根据权利要求5所述的偶氮类化合物与氧化偶氮类化合物的分离分析方法，其特征在于，所述磷酸水溶液的浓度为0.1v/v％。

7.根据权利要求1所述的偶氮类化合物与氧化偶氮类化合物的分离分析方法，其特征在于，所述梯度洗脱的进样量为2μl。

8.根据权利要求1所述的偶氮类化合物与氧化偶氮类化合物的分离分析方法，其特征在于，所述流动相的流速为0.8ml/min。

9.根据权利要求1所述的偶氮类化合物与氧化偶氮类化合物的分离分析方法，其特征在于，所述色谱柱的柱温为25-40℃。

10.根据权利要求1所述的偶氮类化合物与氧化偶氮类化合物的分离分析方法，其特征在于，所述高效液相色谱法检测的紫外光波长为200～250nm。

技术总结
本发明公开了一种偶氮类化合物与氧化偶氮类化合物的分离分析方法，所述方法包括以下步骤：a.采用甲醇或乙腈溶液配制偶氮类化合物其与氧化偶氮类化合物的混合待测样品溶液；b.将偶氮类化合物与氧化偶氮类化合物的混合待测样品溶液采用高效液相色谱法检测，以磷酸水溶液为水相流动相，以甲醇或乙腈为流动相有机相进行梯度洗脱，得到待测品的高效液相色谱图；所述流动相的流速为0.6‑1.0ml/min。本发明所述分离分析方法具有空白基线无干扰、专属性强、分离度好等特点，是适用于偶氮类化合物与氧化偶氮类化合物的一种分离分析方法。

技术研发人员：茅仲平,刘伟
受保护的技术使用者：常熟泓德生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15