一种测定人血浆中甲酸的浓度的质谱检测方法与流程

本发明属于质谱检测，尤其涉及一种测定人血浆中甲酸的浓度的质谱检测方法。

背景技术：

1、重组草酸脱羧酶能有效在人的胃中降解食物中的草酸，阻止草酸被胃肠道过多吸收，从而治疗继发性高草酸尿症(secondary hyperoxaluria，sh)。草酸的降解产物为甲酸，是一种对人体有害物。评价重组草酸脱羧酶散对sh患者血浆中甲酸(草酸代谢物)浓度的影响，需要测定基质中甲酸的浓度。目前检测甲酸的技术主要为酶法、气相色谱法。酶法特异性高，但其使用的试剂盒成本较高，且重现性较差。气相色谱法应用于甲酸检测时，检测时间较长。因此需要开发了一种基于lc-ms/ms的检测方法，方法简单、快速、准确。

技术实现思路

1、本发明的目的是为了解决上述技术问题，而提供一种测定人血浆中甲酸的浓度的质谱检测方法，从而实现检测方法简单、样品分析快速、检测灵敏度高。为了达到上述目的，本发明技术方案如下：

2、一种测定人血浆中甲酸的浓度的质谱检测方法，包括以下步骤：

3、1)加样，取基质样品200μl，置于1.5ml离心管中，加50.0μl 50.0μg/ml fa-13c溶液，涡流；

4、2)蛋白沉淀，加入400μl的2.5mg/ml 4-(叔丁基)-o-苯二胺溶液，涡流、离心；

5、3)衍生化，取500μl上清液到2ml玻璃瓶中，加入400μl 1m盐酸溶液，涡流，在水浴锅中60℃孵育；

6、4)终止衍生化，加入400μl 1m碳酸钠溶液；

7、5)液液萃取，加入300μl乙酸乙酯，涡流，静置，取200μl上层溶液到孔板中；6)取2μl进行lc-ms/ms分析，色谱条件，采用zobax sb-c18色谱柱，等度洗脱，流速500μl/min，柱温40℃，进样量2μl，流动相a为1mm醋酸铵水溶液，流动相b为甲醇：乙腈(60：30，v/v)；质谱条件，电喷雾电离源，毛细管电压为3000v；脱溶剂气温度为550℃；脱溶剂气流速为1000l/hr，扫描模式为+mrm，监测离子反应分别为：甲酸m/z193.1→m/z165.1，ce为23ev，cv为50v；甲酸-13cm/z194.1→m/z165.1，ce为23ev，cv为50v，扫描时间为163ms。

8、与现有技术相比，本发明一种测定人血浆中甲酸的浓度的质谱检测方法的有益效果主要体现在：

9、预处理方法相对简单，样品分析时间较短，检测灵敏度高，可达到1.00μg/ml的定量限；使用液液萃取法进行药物的富集，操作步骤简便；使用甲酸盐和4-(叔丁基)-o-苯二胺进行的衍生化反应，反应时间较短且特异性强。

技术特征：

1.一种测定人血浆中甲酸的浓度的质谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种测定人血浆中甲酸的浓度的质谱检测方法，其特征在于：步骤1)中，涡流2min。

3.根据权利要求1所述的一种测定人血浆中甲酸的浓度的质谱检测方法，其特征在于：步骤2)中，涡流2min，14000rpm，4℃，离心10min。

4.根据权利要求1所述的一种测定人血浆中甲酸的浓度的质谱检测方法，其特征在于：步骤3)中，涡流2min，在水浴锅中60℃孵育30min。

5.根据权利要求1所述的一种测定人血浆中甲酸的浓度的质谱检测方法，其特征在于：步骤5)中，涡流10min，静置5min。

技术总结
本发明揭示了一种测定人血浆中甲酸的浓度的质谱检测方法，包括以下步骤：加样、蛋白沉淀、衍生化、终止衍生化、液液萃取、进行LC‑MS/MS分析。本发明实现了突破传统的气相色谱检测方式，建立了基于LC‑MS/MS分析的甲酸浓度测定方法，该检测方法简单、样品分析快速、检测灵敏度高。

技术研发人员：邢喜春,段云海,左正龙,邹小芳,宗于健,崔如玉,苏彩娟,占远,沈永惠,袁梦,杨勇
受保护的技术使用者：苏州澄耀生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15