本发明涉及医用检测，尤其涉及一种基于时间分辨免疫荧光层析法的检测试剂盒的制备方法。
背景技术：
1、目前，降钙素原(pct)已经发展成为一种很有前途的早期检测(全身)细菌感染的新型生物标志物；1993年，assicot等人证明了高血清降钙素原水平与细菌感染和脓毒症阳性依据(如血培养阳性)患者之间存在正相关；此外，他们证明降钙素原在病毒感染中不会升高，并且在使用适当的抗生素治疗后血清降钙素原水平会降低；目前的炎症标志物，如c反应蛋白(crp)，缺乏准确诊断细菌和非细菌感染所需的特异性。
2、降钙素原有一个固定的半衰期，为临床医生和研究人员提供了一个粗略的时间表，说明在对全身性感染进行生理控制后，降钙素原水平应在何时开始下降(24小时内下降约50％)；目前的临床实践利用各种降钙素原临界值来决定抗生素治疗的开始和停止；临床方案和背景对于应该采用哪个截止水准起着重要作用；然而，大多数研究表明，当降钙素原水平在0.1至0.5ng/ml的范围内时，它们显示出临床意义；此外，研究表明小于0.1ng/ml的降钙素原水平对于排除细菌感染具有高的阴性预测值(96.3％)。
3、但现有技术中，目前的降钙素原检测试剂盒的灵敏度、准确度和精密度较低，不能达到有效的检测精度，不能根据患者情况准确作出医学决策。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种基于时间分辨免疫荧光层析法的检测试剂盒的制备方法，旨在解决现有技术中的降钙素原检测试剂盒的灵敏度、准确度和精密度较低，不能达到有效的检测精度，不能根据患者情况准确作出医学决策的技术问题。
2、为实现上述目的，本发明采用的一种基于时间分辨免疫荧光层析法的检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
3、通过荧光微球、磷酸盐溶液、nhs溶液、edc溶液、pct单克隆抗体1和bsa制成pct喷金液；
4、使用喷金划膜仪将所述pct喷金液喷涂至独立的结合垫上；
5、以此pct喷金垫制成；
6、采用缓冲液将pct单克隆抗体2稀释至0.5～2.0mg/ml，制成t线划线液；
7、采用缓冲液将质控抗体稀释至0.5～2.0mg/ml，制成c线划线液；
8、采用喷金划膜仪将c线抗体、t线抗体分别包被在固定于底板上的硝酸纤维素膜上；
9、将划好线的大板置于鼓风干燥箱中进行干燥；
10、以此包被抗体的硝酸纤维素膜底板制备完成；
11、将吸水垫、pct喷金垫和样品垫依次固定在包被抗体的硝酸纤维素膜底板上，并切割成试纸条，添加干燥剂于室温下密封保存，以此制成试纸条；
12、将试纸条置于上盖和底壳之间，制成检测卡；
13、最终将所述检测卡、标定卡、样品稀释液、id卡和合格证进行组合，制成所述基于时间分辨免疫荧光层析法的检测试剂盒。
14、其中，制备所述pct喷金液包括如下步骤：
15、离心管加入1％的荧光微球50ul，向荧光微球溶液中加入200ul磷酸盐溶液，再向离心管中加入nhs溶液和edc溶液，并室温静置30min，通过离心机进行离心，并弃上清液，再加入200ul磷酸盐溶液复溶；
16、向上述复溶溶液中加入pct单克隆抗体1，pct单克隆抗体1与荧光微球重量比为1:5～1：20，室温反应120min后，在20rpm～60rpm的旋转混匀仪中均匀混合；
17、加入bsa封闭，bsa与荧光微球的重量比为1:5～1:10，室温反应60min后，在20rpm～60rpm的旋转混匀仪中均匀混合；
18、封闭结束后，以转速为16000rpm的转速离心20min，并去除上清液，向离心管中添加适量的保存液并均匀混合；
19、以此pct喷金液制备完成。
20、其中，在组卡步骤之中：将吸水垫、pct喷金垫和样品垫依次固定在包被抗体的硝酸纤维素膜底板上，并切割成试纸条，添加干燥剂于室温下密封保存。
21、其中，所述pct喷金液的喷涂浓度为2ul/cm～8ul/cm。
22、其中，所述c线抗体和所述t线抗体的划液量为0.5～2.0ul/cm，划膜速度为80mm/s。
23、其中，所述缓冲液为0.01mol/l磷酸缓冲液，ph值为7.0～7.5，含10g/l蔗糖。
24、本发明的一种基于时间分辨免疫荧光层析法的检测试剂盒的制备方法的有益效果为：本发明可报告定量检测结果，具有较高的检测灵敏度，pct灵敏度为0.02ng/ml，同时可以使粘稠的样品更加均一，提高检测的准确度和精密度，采用铕螯合物纳米颗粒可开发出灵敏度更高和定量结果更佳快速免疫侧向层析产品，铕螯合物的荧光寿命比传统的荧光分子更长，因此可在背景荧光熄灭之后对其信号再进行采集，具有灵敏度高、稳定性好、价格低廉的优点，为检测和鉴别pct异常的常见疾病提供了一种有效辅助诊断工具。
1.一种基于时间分辨免疫荧光层析法的检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的基于时间分辨免疫荧光层析法的检测试剂盒的制备方法，其特征在于，
3.如权利要求2所述的基于时间分辨免疫荧光层析法的检测试剂盒的制备方法，其特征在于，
4.如权利要求3所述的基于时间分辨免疫荧光层析法的检测试剂盒的制备方法，其特征在于，
5.如权利要求4所述的基于时间分辨免疫荧光层析法的检测试剂盒的制备方法，其特征在于，
6.如权利要求5所述的基于时间分辨免疫荧光层析法的检测试剂盒的制备方法，其特征在于，