一种猴结核病检测试剂盒和检测方法与流程

本发明涉及生物，尤其是涉及一种猴结核病检测试剂盒和检测方法。

背景技术：

1、欧盟、美国国立卫生研究院(nih)和美国兽医协会(avma)的指导文件或推荐文献，建议平行使用结核菌素皮肤测试(tst)和γ-干扰素释放实验检测，以实现诊断方案的最佳覆盖，及时并高效的发现感染结核分枝杆菌的动物。

2、目前，实验猴感染结核病的检疫结核菌素的方法单一，结核菌素试验敏感性和特异性低；猴结核病血清抗体的检测方法，利用胞浆蛋白，结核菌素作为抗原建立猴结核病血清抗体ehsa检测方法，但其敏感性差，漏检率高；常规结核病γ-干扰素检测方法，检出率高，但有可能出现假阳性，而且进口商品化试剂成本高，操作复杂，检测周期长，无法实现自动化。国内没有猴结核病γ-干扰素释放检测试剂盒。

技术实现思路

1、本发明目的在于提供一种新型的、基于γ-干扰素双抗原夹心法的猴结核病体外检测试剂盒和方法。

2、第一个方面，本发明涉及了一种猴结核病体外检测试剂盒，其包括，

3、384孔酶标板，其预先包被抗γ-干扰素抗体，以捕获样品游离或刺激样品后产生的γ-干扰素；

4、刺激物，其用于体外刺激样品，以能够使样品产生相应的应答；

5、生物素化抗体、链霉亲和素试剂以及显色试剂；

6、和，缓冲溶液和/或稀释溶液，以及96孔培养板耗材。

7、所述刺激物包括阳性刺激物p(佛波酯pma)、阴性刺激物n(磷酸盐溶液pbs)、刺激物a(鸟分枝杆菌抗原)以及刺激物b(牛分枝杆菌抗原)。

8、本发明提供的后结核病体外检测试剂盒，用于检测猴外周血。

9、另一方面地，本发明还涉及一种体外检测猴结核病的方法，其使用上述的猴结核病体外检测试剂盒，其包括：

10、在96孔培养板中分别依次加入刺激物和样品，并且刺激过夜；

11、将96孔培养板培养后上清液转移到预包被预先包被抗γ-干扰素抗体的384孔酶标板；

12、清洗孵育后的酶标板，并且随后加入生物素化抗体孵育；

13、再次清洗后，加入链霉亲和素试剂、显色剂；

14、在加入显色终止试剂后，通过酶标仪读取显色数据，判断其结核病的阳性或阴性结果。

15、本发明所涉及的样品来源于外周血。

16、本发明针对结核病γ-干扰素检测方法进行优化，实现自动化操作，应用于实验猴检测，节省人力时间，减低检测成本，提高检测准确度。

17、技术效果：

18、1.全血分液及自动化刺激过程；

19、2.无需离心分离，直接吸取刺激全血上清进行elisa实验；

20、3.采用384elisa板，提高检测效率；

21、4.试剂大都为工作液且组装为试剂盒，客户使用方便。

技术特征：

1.猴结核病体外检测试剂盒，其包括，

2.根据权利要求1所述的猴结核病体外检测试剂盒，其中，所述刺激物包括阳性刺激物p(佛波酯pma)、阴性刺激物n(磷酸盐溶液pbs)、刺激物a(鸟分枝杆菌抗原)以及刺激物b(牛分枝杆菌抗原)。

3.根据权利要求1或2所述的猴结核病体外检测试剂盒，其用于检测猴外周血。

4.一种体外检测猴结核病的方法，其使用权利要求1-3所述的猴结核病体外检测试剂盒，其包括：

5.根据权利要求4所述的体外检测猴结核病的方法，其中，所述样品来源于外周血刺激后上清液。

技术总结
本发明涉及生物技术领域，更具体地，本发明涉及一种猴结核病体外检测试剂盒和检测方法，其中猴结核病体外检测试剂盒，包括：384孔酶标板，其预先包被抗γ‑干扰素抗体，以捕获样品游离或刺激样品后产生的γ‑干扰素；刺激物，其用于体外刺激样品，以能够使样品产生相应的免疫应答；生物素化抗体、链霉亲和素试剂以及显色试剂；和培养基，缓冲溶液和/或稀释溶液，以及96孔培养板耗材，本发明对结核病γ‑干扰素检测方法进行优化，实现自动化操作，应用于实验猴检测，节省人力时间，减低检测成本，提高检测准确度。

技术研发人员：张文娟,时长军,杭沈露,黄颖娟,陆春华,陈思
受保护的技术使用者：苏州西山生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15