TNS2在制备上皮性卵巢癌早期诊断及治疗试剂盒和药物中的应用

本发明涉及基因工程，具体涉及 tns2在制备上皮性卵巢癌早期诊断及治疗试剂盒和药物中的应用。

背景技术：

1、卵巢癌是妇科临床最为致命的肿瘤之一，严重威胁女性的生命健康。卵巢癌仅占女性癌症的3%，它却是女性癌症死亡的第五大原因。上皮性卵巢癌是最常见的卵巢癌类型，其中约70%的病例是在ⅲ期间或iv期被诊断出来的，导致预后不良。卵巢癌5年后的存活率较低，治愈率和存活率的趋势与目前相比没有明显改变。因此，探究在卵巢癌发生发展中关键调控基因，阐明调节机制，对有效控制卵巢癌的发生发展，提高患者生存率具有重要意义。

2、癌细胞的扩散是导致癌症患者病情恶化、治疗失败以及患者生存率不高的主要原因之一。癌细胞通过两个不同但相似的过程（称为迁移和侵袭）侵入局部组织并扩散到远处部位，细胞迁移(cell migration)也称为细胞爬行、细胞移动或细胞运动，是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动；细胞侵袭（cellinvasion）是指细胞通过细胞外基质从一个区域迁移到另一个区域的能力。因此，研究癌细胞转移机制并提出新的阻止方法对于癌症治疗具有重要意义。

3、tns2（tensin2）属于粘着斑蛋白家族成员之一，定位于整合素介导的局灶性和纤维性粘连，这些粘连在细胞外基质和细胞骨架之间提供了双向连接。tns2有三种亚型：v1、v2和v3。它们的多个结构域有利于细胞外基质和细胞骨架网络之间的分子连接，以及介导或参与多种信号转导途径，进而影响肿瘤恶性进程的多种生理过程，包括细胞黏附、侵袭和迁移。

4、为了及时掌控肿瘤发生发展的情况，特别是对于癌细胞是否扩散进行随时掌握，需要选择合适的药物靶标。tns2具有作为高价值生物标志物及药物靶标的潜力，在人类乳腺癌（clinical utility of tensin 2 levels as a diagnostic and prognosticbiomarker in breast cancer）、胃癌（immunohistochemical analysis of theexpression ofadhesion proteins: tns1, tns2 and tns3 in correlation withclinicopathological parameters in gastric cancer）中有较为优异的表现。但其是否能成为上皮性卵巢癌治疗的靶标，仍要在如下两个方面进行考量：1. 靶标的有效性，即靶标与疾病确实相关，并且通过调节靶标的生理活性能有效地改善疾病症状。2. 靶标的副作用，如果对靶标的生理活性的调节不可避免地产生严重的副作用，那么将其选作药物作用靶标是不合适的。因此，并不是所有在相关部位具有高表达的基因都可以选为靶标，一种疾病可能会和多个靶标有关，一个靶标也可能与多种疾病关联；即使是选为靶标，其作用可能只是监测，并不一定具有治疗的效果。因此， tns2能否作为上皮性卵巢癌治疗的靶标分子仍需要进一步考察。

技术实现思路

1、针对上述现有技术，本发明的目的是提供 tns2在制备上皮性卵巢癌早期诊断及治疗试剂盒和药物中的应用。本发明是基于临床治疗上皮性卵巢癌早期诊断治疗难点及tns2与上皮性卵巢癌之间的密切相关性，通过慢病毒转染构建tns2稳定敲减的上皮性卵巢癌细胞系，通过细胞生物学方法验证了tns2在上皮性卵巢癌迁移和侵袭中的作用，为开发卵巢癌早期诊断治疗新的靶标分子提供了新的思路。

2、为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、本发明的第一方面，提供 tns2基因在制备用于诊断或监测上皮性卵巢癌进展的试剂盒中的应用，所述 tns2基因为如下i）或ii）所示的核酸分子：

4、i）核苷酸序列是ncbi数据库 中gene id: 23371所示的核酸分子；

5、ii）除i）以外的编码seq id no.1所示氨基酸序列的核酸分子。

6、进一步的，其中所述诊断或监测是检测上皮性卵巢癌的发作、进展、稳定、改善和/或缓和。

7、进一步的，其中所述上皮性卵巢癌包括浆液性癌、子宫内膜样癌、透明细胞癌和黏液性癌。

8、本发明的第二方面，提供作为靶标的 tns2基因或 tns2基因编码的蛋白在制备用于治疗上皮性卵巢癌的药物中的应用，所述 tns2基因为如下i）或ii）所示的核酸分子：

9、i）核苷酸序列是ncbi数据库 中gene id: 23371所示的核酸分子；

10、ii）除i）以外的编码seq id no.1所示氨基酸序列的核酸分子；

11、所述 tns2基因编码的蛋白为如下（a1）或（a2）所示的蛋白质：

12、（a1）由序列表中seq id no.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

13、（a2）在（a1）中所限定的蛋白质的n端和/或c端连接蛋白标签后得到的融合蛋白。

14、本发明的第三方面，提供下调 tns2基因表达或抑制tns2蛋白活性在制备治疗上皮性卵巢癌药物中的应用。

15、进一步的，所述下调 tns2基因表达的物质包括：shrna或sirna。

16、进一步的，所述 shrna的序列包括seq id no.3和seq id no.4。

17、本发明的有益效果：

18、在本发明中，我们通过对大量卵巢组织正常样本及肿瘤恶性病理组织样本的研究，发现tns2在卵巢恶性病理组织样本中的表达水平显著高于正常卵巢组织样本。随后成功构建tns2-kd（knock down）慢性毒转染上皮性卵巢癌细胞系（skov3、a2780），通过puromycin筛选出能够显著抑制tns2蛋白表达水平并稳定表达的tns2-kd细胞系。发现tns2被敲减之后，两种卵巢癌细胞系的细胞迁移和侵袭能力减弱。本发明以卵巢上皮细胞癌的治疗为切入点，成功寻找到tns2这一靶标分子，为开展卵巢癌的临床治疗提供作用。

技术特征：

1. tns2基因作为靶标在制备用于诊断或监测上皮性卵巢癌进展的试剂盒中的应用，其特征在于，所述tns2基因为如下i）或ii）所示的核酸分子：

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，其中所述上皮性卵巢癌包括浆液性癌、子宫内膜样癌、透明细胞癌和黏液性癌。

3.作为靶标的tns2基因在制备用于治疗上皮性卵巢癌的药物中的应用，其特征在于，所述tns2基因为如下i）或ii）所示的核酸分子：

4. tns2基因编码的蛋白在制备用于治疗上皮性卵巢癌的药物中的应用，其特征在于，tns2基因编码的蛋白的氨基酸序列如seq id no.1所示。

5.下调tns2基因表达或抑制tns2蛋白活性的物质在制备治疗上皮性卵巢癌药物中的应用。

6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述下调tns2基因表达的物质包括：shrna或sirna。

7.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述 shrna的序列包括seq id no.3和seqid no.4。

技术总结
本发明公开了TNS2在制备上皮性卵巢癌早期诊断及治疗试剂盒和药物中的应用，属于基因工程技术领域。本发明基于临床治疗上皮性卵巢癌早期诊断治疗难点及TNS2与上皮性卵巢癌之间的密切相关性，通过慢病毒转染构建TNS2稳定敲减的上皮性卵巢癌细胞系，通过细胞生物学方法验证了TNS2在上皮性卵巢癌迁移和侵袭中的作用，为开发卵巢癌早期诊断治疗新的靶标分子提供了新的思路。

技术研发人员：韩阳阳,张慧,白岚宁,刘宗艳
受保护的技术使用者：潍坊医学院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15