一种普瑞巴林缓释片的前处理方法以及普瑞巴林和/或有关物质的检测方法与流程

本发明涉及分析检测，具体涉及一种普瑞巴林缓释片的前处理方法以及普瑞巴林和/或有关物质的检测方法。

背景技术：

1、普瑞巴林化学名为(s)-3-氨甲基-5-甲基己酸，分子式为c8h17no2，具有易溶于水、碱性的和酸性的水溶液的特性。普瑞巴林是一种新型γ-氨基丁酸(gaba)受体激动剂，临床主要用于治疗外周神经痛以及辅助治疗局限性部分癫痫发作。

2、药物的研制过程中，杂质检测方法是质量控制以及药品安全的重要评价参数。中国专利cn114740101a公开了一种普瑞巴林药物组合物中杂质的检测方法，包括如下步骤：将样品溶解于水中得到样品溶液，利用液相色谱对样品溶液中的杂质进行检测，其中色谱柱为hypersil bds c18，以流动相a(磷酸盐缓冲液)和流动相b(甲醇)进行梯度洗脱，样品溶液中普瑞巴林的浓度为5～10mg/ml。然而，上述方法对普瑞巴林缓释片中的杂质的检测准确度差。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种普瑞巴林缓释片的前处理方法以及普瑞巴林和/或有关物质的检测方法，本发明提供的前处理方法得到的待测样品液黏度低，流动性好，能够实现对普瑞巴林缓释片中的普瑞巴林以及有关物质的准确检测。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案。

3、本发明提供了一种普瑞巴林缓释片的前处理方法，包括以下步骤：将待测普瑞巴林缓释片样品与提取液混合，进行酶解后离心分离，所得上清液为待测样品液；所述提取液为含有纤维素酶的磷酸盐缓冲液。

4、优选的，所述提取液中纤维素酶的浓度为1000～5000u/l，所述提取液的ph值为1～3。

5、优选的，所述提取液的制备方法包括以下步骤：将磷酸盐溶解于水中，调节ph值至1～3，得到提取液；所述磷酸盐的质量与水的体积之比为6.8g：0.5～1.5l；

6、优选的，所述待测普瑞巴林缓释片的质量与提取液的体积之比为1g：100～200ml。

7、优选的，所述酶解的温度为35～39℃，时间为1～3h。

8、优选的，所述离心分离的转速为8000～15000rpm，时间为5～15min。

9、本发明提供了一种普瑞巴林缓释片中普瑞巴林和/或有关物质的检测方法，包括以下步骤：将上述技术方案所述前处理方法得到的待测样品液进行高效液相色谱检测，得到普瑞巴林和/或有关物质的检测结果。

10、优选的，所述高效液相色谱的检测条件包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；柱温为28～32℃；流动相体系为流动相a和流动相b，所述流动相a为磷酸缓冲盐溶液和甲醇的混合溶剂，所述流动相b为甲醇，所述流动相的流速为0.9～1.1ml/min，洗脱方式为梯度洗脱；检测波长为210nm；进样量为80～120μl；所述梯度洗脱的程序包括：0～10min，所述流动相a的体积分数为95～100％，10～25min，所述流动相a的体积分数由95～100％匀速降至50～60％，25～35min，所述流动相a的体积分数为50～60％，35～40min，所述流动相a的体积分数由50～60％匀速增加至95～100％，40～45min，所述流动相a的体积分数为95～100％。

11、优选的，所述流动相a中磷酸缓冲盐溶液的体积分数为80～90％。

12、优选的，所述磷酸缓冲盐溶液的ph值为5.8～6.2。

13、本发明以含有纤维素酶的磷酸盐缓冲液为提取液对待测普瑞巴林缓释片样品进行提取，本发明利用纤维素酶的特异性降解作用，将普瑞巴林缓释片中最主要的缓释辅料羟丙甲纤维素进行了酶解，降低了其分子量，从而显著降低待测样品液的黏度；缓释辅料酶解后，释放出活性成分，对普瑞巴林缓释片中普瑞巴林的提取率高。利用后续的高效液相色谱能够实现对普瑞巴林缓释片中的普瑞巴林以及有关物质的准确检测；而且，待测样品液的黏度低，流动性好，也能够避免在后续的高效液相色谱检测过程中污染色谱柱，避免对色谱柱的使用寿命造成不利影响。

14、本发明采用高效液相色谱能够实现对待测普瑞巴林缓释片样品中的普瑞巴林以及有关物质的快速定量分析，具有简便、快捷、准确、灵敏度高的优点。

技术特征：

1.一种普瑞巴林缓释片的前处理方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的前处理法方法，其特征在于，所述提取液中纤维素酶的浓度为1000～5000u/l；所述提取液的ph值为1～3。

3.根据权利要求1或2所述的前处理法方法，其特征在于，所述提取液的制备方法包括以下步骤：将磷酸盐溶解于水中，调节ph值至1～3，得到提取液；

4.根据权利要求1所述的前处理法方法，其特征在于，所述待测普瑞巴林缓释片的质量与提取液的体积之比为1g：100～200ml。

5.根据权利要求1、2或4所述的前处理法方法，其特征在于，所述酶解的温度为35～39℃，时间为1～3h。

6.根据权利要求1所述的前处理法方法，其特征在于，所述离心分离的转速为8000～15000rpm，时间为5～15min。

7.一种普瑞巴林缓释片中普瑞巴林和/或有关物质的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱的检测条件包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；柱温为28～32℃；流动相体系为流动相a和流动相b，所述流动相a为磷酸缓冲盐溶液和甲醇的混合溶剂，所述流动相b为甲醇，所述流动相的流速为0.9～1.1ml/min，洗脱方式为梯度洗脱；检测波长为210nm；进样量为80～120μl；

9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述流动相a中磷酸缓冲盐溶液的体积分数为80～90％。

10.根据权利要求8或9所述的检测方法，其特征在于，所述磷酸缓冲盐溶液的ph值为5.8～6.2。

技术总结
本发明提供了一种普瑞巴林缓释片的前处理方法以及普瑞巴林和/或有关物质的检测方法，涉及分析检测技术领域。本发明以含有纤维素酶的磷酸盐缓冲液为提取液对待测普瑞巴林缓释片样品进行提取，将普瑞巴林缓释片中羟丙甲纤维素进行了酶解，降低了其分子量，从而显著降低待测样品液的黏度；本发明提供的前处理方法对普瑞巴林缓释片中普瑞巴林的提取率高。利用后续的高效液相色谱能够实现对普瑞巴林缓释片中的普瑞巴林以及有关物质的简便、快捷、准确以及高灵敏度检测；而且，待测样品液的黏度低，流动性好，也能够避免在后续的高效液相色谱检测过程中污染色谱柱，避免对色谱柱的使用寿命造成不利影响。

技术研发人员：张连浪,李洁,袁于鑫,张艳
受保护的技术使用者：山东则正医药技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15