一种同时衍生和萃取生物胺的分析检测方法与流程

本发明属于分析检测，涉及一种同时衍生和萃取生物胺的分析检测方法。

背景技术：

1、生物胺(bioamines，bas)是一类具有生物活性，含氨基的小分子化合物，主要是由氨基酸通过氨基酸脱羧酶产生，是合成蛋白质、生物碱、激素、核苷酸等化合物的前体药物，在调节核酸与蛋白质的合成与生物膜稳定方面起着重要作用，也是生物活性细胞必不可少的组成部分。bas广泛存在于各类食品中，尤其是富含蛋白质和氨基酸的食品中，包括肉制品、乳制品、海鲜、发酵食品、水果、蔬菜等，食品中的bas主要包括组胺(histamine，his)、酪胺(tyramine，tyr)、腐胺(putrescine，put)、尸胺(cadaverine，cad)、2-苯乙胺(2-phenylethylamine，phe)、精胺(spermidine，spd)、亚精胺(spermine，spm)等。摄入适量的生物胺对人体有调节作用，可以促进生长和新陈代谢活动，但过量摄入人体产生中毒现象，出现头疼、呼吸困难、呕吐等反应。因此，有必要建立高效的分析检测技术来保障食品质量和安全。

2、高效液相色谱法(hplc)是检测bas的常用方法之一，但bas为小分子活性化合物，不具有荧光或紫外色基，因此，通常采用hplc法检测bas需要进行衍生化处理。色谱分析之前，由于样品基质的复杂性和分析物的低浓度，通常需要对样品进行前处理，从基体中去除干扰药物，并从样品中提取或富集目标分析物，对于bas的萃取方法固相萃取、固相微萃取、液液萃取、分散液液微萃取等，传统的液液萃取有机溶剂消耗多、选择性较差，传统的固相萃取通常操作步骤复杂，而且这些萃取技术和衍生化方法一般先萃取后衍生的方式或者是先衍生后萃取的方式分开进行，这些方法使得样品的预处理过程复杂，在一定程度上造成了样品的损失，同时也会导致分析误差。

技术实现思路

1、为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种同时衍生和萃取生物胺的分析检测方法，该分析方法具有操作步骤简单、快速高效、准确可靠的特点。本发明采用磁性的功能化羟基碳纳米管(mwcnts-oh)为萃取材料，将本身无磁性的mwcnts-oh包裹fe3o4使其具有磁性。将样品溶液、萃取材料和衍生化试剂在离心管中一同混合涡旋，同时进行衍生化和萃取，fe3o4/mwcnts-oh主要通过疏水作用和π-π作用选择性识别分析物衍生物，在外加磁场作用通过清洗、解吸步骤分离出衍生物，整个样品前处理过程省去了离心步骤，并将其与高效液相色谱荧光检测器(hplc-fld)相结合，应用于葡萄酒、白酒、啤酒等样品中生物胺的测定。

2、为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

3、一种同时衍生和萃取生物胺的分析检测方法，包括以下步骤：

4、(1)将样品溶液、衍生化试剂、萃取材料、缓冲盐加入同一离心管中混合涡旋，在此过程中同时完成衍生化和萃取，在外加磁场作用下，吸附了生物胺衍生物的萃取材料可与样品溶液分离；

5、(2)加入一定量的纯水，混合涡旋反应一定时间，在外加磁场作用下分离并弃去上清液；

6、(3)加入一定量的解吸溶剂，混合涡旋一定时间，将衍生化产物从材料上解吸下来；

7、(4)将步骤(3)得到的含带有目标分析物的解吸溶液进行检测和分析。

8、进一步地，所述的样品溶液为人体尿液、白酒、葡萄酒、红酒、啤酒、酱油、黄酒。

9、进一步地，所述步骤(1)中样品溶液、衍生化试剂、萃取材料不分先后顺序加入同一离心管中进行反应。

10、进一步地，所述步骤(1)中的衍生化试剂为6-氨基喹啉基-n-羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯(aqc)，衍生化试剂浓度为1–2mg/ml，优选为2mg/ml，衍生试剂体积用量为50–400μl，优选为200μl。

11、进一步地，所述步骤(1)中的萃取材料为磁性羟基化多壁碳纳米管(fe3o4/mwcnts-oh)，所述fe3o4/mwcnts-oh由fe3o4纳米颗粒与mwcnts-oh按照质量比4:1的比例混合，混合的方式可为研磨混合至均匀，fe3o4/mwcnts-oh材料用量为1–10mg，优选为4mg。

12、进一步地，所述步骤(1)中的缓冲盐为硼砂缓冲盐、磷酸缓冲盐或醋酸缓冲盐，缓冲盐的ph为8.0-9.3，优选为9.3。

13、进一步地，其特征在于，所述步骤(1)中萃取和衍生反应可采取混合涡旋、震荡或超声方式任意一种，优选为混合涡旋进行萃取和衍生。

14、进一步地，所述步骤(1)中混合涡旋反应时间为1-10min，优选为1min。

15、进一步地，所述步骤(3)中解吸溶剂可为丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、异丙醇任意一种，优选为丙酮。

16、进一步地，所述步骤(3)中解吸时间为1-10min，优选为1min。

17、进一步地，所述步骤(3)中检测仪器可为高效液相色谱结合荧光检测器或液相色谱质谱。

18、进一步地，所述的生物胺为组胺、酪胺、腐胺、尸胺、2-苯乙胺、精胺、亚精胺任意一种。

19、相比现有技术，本发明的有益效果在于：

20、本发明提供了一种同时衍生和萃取生物胺的分析检测方法，该方法将样品溶液、衍生化试剂溶液、吸附材料及缓冲盐在同一离心管中混合涡旋反应，使衍生和萃取过程同步进行，然后通过清洗和解吸步骤，最终得到含有待测分析物衍生物的解吸液进行检测。该方法具有较好的萃取效果，能满足在一定条件下的快速分析处理，该方法操作简便、快速、高效，灵敏度和选择性较好。

技术特征：

1.一种同时衍生和萃取生物胺的分析检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的同时衍生和萃取生物胺的分析检测方法，其特征在于，所述步骤（1）中的样品溶液包括人体尿液、白酒、葡萄酒、红酒、啤酒、酱油、黄酒。

3.如权利要求1所述的同时衍生和萃取生物胺的分析检测方法，其特征在于，所述步骤（1）中的衍生化试剂为6-氨基喹啉基-n-羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯（aqc），衍生化试剂浓度为1-2 mg/ml，衍生试剂体积用量为50 -400 μl。

4.如权利要求1所述的同时衍生和萃取生物胺的分析检测方法，其特征在于，所述步骤（1）中的萃取材料为磁性羟基化多壁碳纳米管（fe3o4/mwcnts-oh），所述fe3o4/mwcnts-oh由fe3o4纳米颗粒与mwcnts-oh按照质量比4:1研磨混合至均匀得到，fe3o4/mwcnts-oh材料用量为1-10 mg。

5.如权利要求1所述的同时衍生和萃取生物胺的分析检测方法，其特征在于，所述步骤（1）中的缓冲盐为硼砂缓冲盐、磷酸缓冲盐或醋酸缓冲盐，缓冲盐的ph为8.0-9.3。

6.如权利要求1所述的同时衍生和萃取生物胺的分析检测方法，其特征在于，所述步骤（1）中混合涡旋反应时间为1-10 min。

7.如权利要求1所述的同时衍生和萃取生物胺的分析检测方法，其特征在于，所述步骤（3）中解吸溶剂为丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、异丙醇中的任意一种。

8.如权利要求1所述的同时衍生和萃取生物胺的分析检测方法，其特征在于，所述步骤（3）中解吸时间为1-10 min。

9.如权利要求1所述的同时衍生和萃取生物胺的分析检测方法，其特征在于，所述步骤（3）中检测仪器为高效液相色谱结合荧光检测器或液相色谱质谱。

10.如权利要求1所述的同时衍生和萃取生物胺的分析检测方法，其特征在于，所述的生物胺为组胺、酪胺、酪胺、腐胺、尸胺、2-苯乙胺、精胺、亚精胺中的任意一种。

技术总结
本发明公开了一种同时衍生和萃取生物胺的分析检测方法，它包括以下步骤：将样品溶液、衍生化试剂，萃取材料，在同一离心管中混合涡旋反应，在此过程中同时完成衍生萃取，最后采用合适的解吸溶剂将衍生物从吸附材料上解吸下来，含衍生物的解吸溶液可直接用于分析检测，该方法与传统方法中的前处理过程相比，避免了固相萃取中出现的萃取小柱易堵塞问题，有效简化了样品前处理过程，缩短了样品前处理时间，操作步骤更加简便、快速和高效。

技术研发人员：袁利杰,陈迪,张培毅,杨芮,李嘉,赵光升,秦逸飞,刘霞丽,郭立净,蒋静,姚晓洁,耿熠博,刘玉微
受保护的技术使用者：河南省食品检验研究院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15