一种盐酸拉贝洛尔注射液中杂质的分离检测方法与流程

本发明属于医药检测，具体涉及一种盐酸拉贝洛尔注射液中杂质的分离检测方法。

背景技术：

1、盐酸拉贝洛尔，化学名为5-[1-羟基-2-(1-甲基-3-苯丙胺基)-乙基]水杨酰胺盐酸盐，是一种兼具α、β受体阻滞作用的抗高血压药物，主要用于治疗各种类型高血压，其结构式如下所示：

2、

3、盐酸拉贝洛尔注射液用于各种类型的高血压急症，如高血压危象、嗜铬细胞瘤危象、先兆子痫、高血压脑病、大面积烧伤引起高血压，伴有冠状动脉疾病或急性心肌梗塞高血压和手术后高血压，亦可用于麻醉中控制血压。盐酸拉贝洛尔注射液是临床治疗高血压的有效药物，但是盐酸拉贝洛尔分子中含有酚羟基和酰胺基结构，易被氧化和水解，在生产和贮藏过程中亦可能产生降解物，因其作为治疗妊娠高血压的重要药物，对安全性有着更加严格的要求，故有关物质的测定非常必要。健全盐酸拉贝洛尔注射液杂质研究，有助于严格控制产品质量，在临床上有着重要的现实意义。

4、结合中外文献和各国药典标准，盐酸拉贝洛尔注射液需要研究的杂质有：杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质f、杂质g的结构式如下：

5、

6、翁翎等研究了盐酸拉贝洛尔注射液灭菌工艺改变对杂质考察(翁翎,张小燕,梁洁.盐酸拉贝洛尔注射液灭菌工艺改变的杂质考察[j].沈阳药科大学学报,2014,31(11):896-904.)，建立了盐酸拉贝洛尔注射液中杂质a等有关物质和5-hmf的hplc分析法，经方法学验证，所建立的方法专属性强、结果准确。

7、但是现有技术中并未有关于同时分离检测杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质f、杂质g与盐酸拉贝洛尔的方法。为有效提高药物的安全性，结合盐酸拉贝洛尔的工艺合成路线和降解产物，需要对杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质f、杂质g进行研究，因此建立一种灵敏度高、专属性好的高效液相色谱法，实现各杂质的有效分离和准确定量，对有效控制盐酸拉贝洛尔注射液的质量大有裨益。

技术实现思路

1、除非上下文另有明确指示，否则如本文所用的单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括单数和复数指示物。通过端点表述的数值范围包括在对应范围内的所有数值和分数，以及所表述的端点。

2、本发明针对现有技术存在的问题，提供了一种盐酸拉贝洛尔注射液中杂质的分离检测方法，该检测方法专属性强、灵敏度高、准确性好、操作方便，可有效控制药品品质。

3、为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

4、本发明提供了一种盐酸拉贝洛尔注射液中杂质的分离检测方法，所述分离检测方法采用hplc法；所述hplc法的色谱条件为：

5、色谱柱：以丙基硅烷键合硅胶为填料；

6、流动相：流动相a为高氯酸盐缓冲溶液，流动相b为含三氟乙酸的四氢呋喃溶液；

7、洗脱：梯度洗脱，洗脱程序如下所示：

8、0-5分钟，流动相a用量为60-85％，流动相b用量为15-40％；

9、5-15分钟，流动相a用量为30-65％，流动相b用量为35-70％；

10、15-45分钟，流动相a用量为25-45％，流动相b用量为55-75％；

11、45-55分钟，流动相a用量为60-85％，流动相b用量为15-40％。

12、优选地，所述杂质包括杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质f和杂质g中的至少一种。

13、优选地，所述流动相a为高氯酸盐缓冲溶液，高氯酸盐缓冲溶液的浓度为10-50mmol/l，高氯酸盐缓冲溶液的ph为3.5-5.5；流动相b为含三氟乙酸的四氢呋喃溶液。

14、优选地，所述流动相a选自高氯酸钾缓冲溶液、高氯酸钠缓冲溶液、高氯酸铵缓冲溶液中的任一种或多种；流动相b为含0.05％-0.2％三氟乙酸的四氢呋喃溶液。

15、优选地，所述流动相a为高氯酸钠缓冲溶液，高氯酸钠缓冲溶液的浓度为10-50mmol/l，高氯酸钠缓冲溶液的ph为3.5-5.5；所述流动相b为含0.1％三氟乙酸的四氢呋喃溶液，v/v。

16、进一步优选地，所述流动相a为高氯酸钠缓冲溶液，高氯酸钠缓冲溶液的浓度为30mmol/l，高氯酸钠缓冲溶液的ph为5.0；所述流动相b为含0.1％三氟乙酸的四氢呋喃溶液，v/v。

17、优选地，所述流动相的流速为0.5-1.5ml/min。

18、进一步优选地，所述流动相的流速为1.2ml/min。

19、优选地，所述hplc法中进样量为5-50μl，检测器的检测波长为220-265nm，色谱柱的柱温为25-45℃。

20、进一步优选地，所述hplc法中进样量为20μl，检测器的检测波长为230nm，色谱柱的柱温为30℃。

21、优选地，所述的分离检测方法包括以下步骤：

22、(1)样品配制：取对照品、供试品溶于稀释剂，分别制得对照品溶液和供试品溶液；

23、(2)采用hplc法的色谱条件，对对照品溶液和供试品溶液进行高效液相分析。

24、优选地，所述稀释剂为磷酸水溶液。

25、优选地，所述洗脱程序如下所示：

26、0分钟，流动相a用量为75％，流动相b用量为25％；

27、5分钟，流动相a用量为55％，流动相b用量为45％；

28、15分钟，流动相a用量为35％，流动相b用量为65％；

29、45分钟，流动相a用量为30％，流动相b用量为70％；

30、55分钟，流动相a用量为75％，流动相b用量为25％。

31、本发明还提供了一种上述的分离检测方法在盐酸拉贝洛尔注射液质量检测中的应用。

32、相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

33、(1)本发明提供的hplc法能有效分离测定盐酸拉贝洛尔注射液中杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质f、杂质g的含量，且灵敏度高、专属性强，检查结果可靠准确，对盐酸拉贝洛尔注射液中杂质的检出提供利于的技术手段，从而对其进行质量控制。

34、(2)本发明通过筛选色谱条件，使杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质f、杂质g之间及与主成分之间的分离度均大于1.5，与目前已公布的盐酸拉贝洛尔注射液的各参考文献比较，确定为新方法；

35、(3)本发明发现的新的检测方法可以为盐酸拉贝洛尔注射液的质量控制和临床安全用药的安全性检测提供参考标准，从而保证临床用药的安全性和可靠性。

技术特征：

1.一种盐酸拉贝洛尔注射液中杂质的分离检测方法，其特征在于：所述分离检测方法采用hplc法；所述hplc法的色谱条件为：

2.根据权利要求1所述的分离检测方法，其特征在于：所述杂质包括杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质f和杂质g中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的分离检测方法，其特征在于：所述流动相a为高氯酸盐缓冲溶液，高氯酸盐缓冲溶液的浓度为10-50mmol/l，高氯酸盐缓冲溶液的ph为3.5-5.5；流动相b为含三氟乙酸的四氢呋喃溶液。

4.根据权利要求3所述的分离检测方法，其特征在于：所述流动相a选自高氯酸钾缓冲溶液、高氯酸钠缓冲溶液、高氯酸铵缓冲溶液中的任一种或多种；流动相b为含0.05％-0.2％三氟乙酸的四氢呋喃溶液。

5.根据权利要求4所述的分离检测方法，其特征在于：所述流动相a为高氯酸钠缓冲溶液，高氯酸钠缓冲溶液的浓度为10-50mmol/l，高氯酸钠缓冲溶液的ph为3.5-5.5；所述流动相b为含0.1％三氟乙酸的四氢呋喃溶液，v/v。

6.根据权利要求1所述的分离检测方法，其特征在于：所述流动相的流速为0.5-1.5ml/min。

7.根据权利要求1所述的分离检测方法，其特征在于：所述hplc法中进样量为5-50μl，检测器的检测波长为220-265nm，色谱柱的柱温为25-45℃。

8.根据权利要求1所述的分离检测方法，其特征在于：所述的分离检测方法包括以下步骤：

9.根据权利要求1所述的分离检测方法，其特征在于：所述洗脱程序如下所示：

10.权利要求1-9任一项所述的分离检测方法在盐酸拉贝洛尔注射液质量检测中的应用。

技术总结
本发明涉及医药检测技术领域，具体公开一种盐酸拉贝洛尔注射液中杂质的分离检测方法，采用HPLC法，以丙基硅烷键合硅胶为填料，采用流动相A和流动相B进行梯度洗脱，进入检测器进行检测，流动相A为高氯酸盐缓冲溶液，流动相B为含三氟乙酸的四氢呋喃溶液，所述杂质包括杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质F和杂质G中的至少一种。该检测方法专属性强、灵敏度高、主峰与杂质的分离度高，准确性好、操作方便，可有效控制药品品质。

技术研发人员：韦海英,吕宽宪
受保护的技术使用者：浙江同伍生物医药有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16