一种复方药物的指纹图谱的建立方法与流程

本发明属于药物技术分析，具体涉及一种复方药物的指纹图谱的建立方法。

背景技术：

1、中药复方是我国传统医药宝库的重要组成部分，有着悠久的使用历史和明确的疗效。当前，对中药制剂的质量控制内容主要包括外观性状、鉴别检查及单个或几种指标成分的定量分析等。而中药复方含有多味药材，其发挥疗效的药效物质基础比较复杂，作用机制常为多靶点协调作用，单靠单个或几种成分的含量作为质量控制指标难以全面反映中药制剂的质量。

2、作为一种综合及可量化的质量控制方法，中药指纹图谱能够全面、有效地反应中药材及其制剂的质量，这与中药多靶点与整体性的作用特点是相符合的。近年来，结合计算机软件分析建立的现代中药指纹图谱分析技术广泛应用于中药学研究的各个领域，是目前国际上公认的中药质量控制模式。指纹图谱建立的方法包括各种色谱法、光谱法、波谱法等，色谱法是其中最常用的一种。

3、加味青娥丸是以盐补骨脂、核桃仁、炙巴戟天、酒肉苁蓉、杜仲炭、醋乳香、醋没药为原料制成的中药复方丸剂。其主要功效为补肾，散寒，止痛。用于肾经虚寒引起的腰腿酸痛，阳痿遗精，小便频数，小腹冷痛，临床疗效显著。现有的加味青蛾丸质量控制方法主要通过显微鉴别和薄层鉴别对补骨脂、核桃仁进行定性鉴别，难以全面反应药品的质量。以中药色谱指纹图谱作为加味青蛾丸的质量控制方法，目前尚未见报道。因此，建立加味青蛾丸指纹图谱对其产品质量进行全面控制具有重要意义。

技术实现思路

1、因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术对于加味青蛾丸质量控制不足，难以全面反应药品的质量等问题，从而提供了一种复方药物的指纹图谱的建立方法。

2、为此，本发明提供了以下技术方案。

3、本发明提供的一种复方药物的指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：

4、(1)供试品溶液的制备；

5、(2)对照品溶液的制备；

6、(3)分别吸取供试品溶液和对照品溶液，采用高效液相色谱法测定；其中，色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相a，以磷酸水溶液为流动相b，梯度洗脱，梯度洗脱的程序：0～5min，3％a，97％b；5～15min，3％→9％a，97％→91％b；15～25min，9％→13％a，91％→87％b；25～45min，13％→15％a，87％→85％b；45～65min，15％→35％a，85％→65％b；65～75min，35％a，65％b；75～80min，35％→95％a，65％→5％b；

7、所述复方药物的原料药包括补骨脂、核桃仁、巴戟天、肉苁蓉、杜仲、乳香和没药。

8、所述复方药物的原料药包括补骨脂、核桃仁、巴戟天、肉苁蓉、杜仲、乳香和没药。其中，原料药可以是其炮制品，例如补骨脂可以是盐补骨脂，肉苁蓉可以为酒肉苁蓉，杜仲可以为杜仲炭，乳香可以为醋乳香，没药可以为醋没药。进一步地，本发明复方药物可以是不同剂型的加味青蛾复方药物，例如加味青蛾丸。

9、所述色谱条件中：柱温为25-40℃；和/或，

10、流速为0.8-1.2ml/min；和/或，

11、磷酸水溶液中的磷酸的浓度为0.05-0.2％；和/或，

12、检测波长为230-250nm；和/或，

13、进样量为5-20μl。

14、所述色谱条件中：柱温为30℃；流速为1.0ml/min；磷酸水溶液中的磷酸的浓度为0.1％；检测波长为240nm；进样量为10μl。

15、所述建立方法中，在供试品中加入溶剂，超声，滤过，取续滤液，得到供试品溶液。

16、所述溶剂为甲醇、乙醇和水中的至少一种；

17、优选地，所述溶剂为50-100％甲醇和/或50-100％乙醇；

18、优选地，所述供试品的质量与溶剂的体积比为(2.5-15):(25-100)；其中，供试品质量的单位为g，溶剂体积的单位为ml；

19、优选地，所述超声的功率为200-500w，时间为20-90min。

20、所述供试品溶液的制备方法还包括加入硅藻土的步骤；

21、优选地，在制备所述供试品溶液时，所述硅藻土的加入量为供试品质量的0.2-2倍。在制备供试品溶液，当供试品为蜜丸时，由于蜜丸粘性大，提取溶剂不容易渗入到蜜丸内，需要因此加入硅藻土作为分散剂，提高溶剂和供试品的混合均匀性。

22、所述建立方法中，以水晶兰苷、京尼平苷酸、松果菊苷、毛蕊花糖苷、补骨脂素和异补骨脂素中的至少一种作为对照品。

23、优选地，每1ml所述对照品溶液中含水晶兰苷60～180μg；和/或，

24、每1ml所述对照品溶液中含京尼平苷酸20～60μg；和/或，

25、每1ml所述对照品溶液中含松果菊苷120～360μg；和/或，

26、每1ml所述对照品溶液中含毛蕊花糖苷40～120μg；和/或，

27、每1ml所述对照品溶液中含补骨脂素55～165μg；和/或，

28、每1ml所述对照品溶液中含异补骨脂素50～150μg。

29、所述建立方法得到的复方药物的指纹图谱包括11个特征峰，包括1号峰、2号峰、3号峰、4号峰、5号峰、6号峰、7号峰、8号峰、9号峰、10号峰和11号峰；

30、以1号峰为参照物峰1，2号峰、3号峰、4号峰、5号峰和6号峰的相对保留时间的规定值分别为1.19、3.19、3.74、6.96、7.44；

31、以7号峰为参照物峰2，8号峰、9号峰、10号峰和11号峰的相对保留时间的规定值分别为1.39、1.45、1.80和1.85；

32、其中，特征峰的相对保留时间在规定值的±10％。

33、所述1号峰为水晶兰苷、3号峰为京尼平苷酸、7号峰为松果菊苷、8号峰为毛蕊花糖苷、10号峰为补骨脂素、11号峰为异补骨脂素。

34、本发明技术方案，具有如下优点：

35、1.本发明提供的复方药物的指纹图谱的建立方法，该建立方法包括供试品溶液的制备、对照品溶液的制备，并采用特定的梯度洗脱程序。该建立方法简便、稳定性和重复性好，精密度高，可以完善含有补骨脂、核桃仁、巴戟天、酒肉苁蓉、杜仲炭、醋乳香和醋没药的复方药物的质量控制方法，保证复方药物的质量可靠稳定，能从整体、全面有效地对含有补骨脂、核桃仁、巴戟天、酒肉苁蓉、杜仲炭、醋乳香和醋没药的复方药物，如加味青蛾丸的质量进行控制，从而保证产品的稳定性、可靠性与安全性。

技术特征：

1.一种复方药物的指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，所述色谱条件中：柱温为25-40℃；和/或，

3.根据权利要求1或2所述的建立方法，其特征在于，所述色谱条件中：柱温为30℃；流速为1.0ml/min；磷酸水溶液中的磷酸的浓度为0.1％；检测波长为240nm；进样量为10μl。

4.根据权利要求1-3任一项所述的建立方法，其特征在于，在供试品中加入溶剂，超声，滤过，取续滤液，得到供试品溶液。

5.根据权利要求4所述的建立方法，其特征在于，所述溶剂为甲醇、乙醇和水中的至少一种；

6.根据权利要求4或5所述的建立方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备方法还包括加入硅藻土的步骤；

7.根据权利要求1-6任一项所述的建立方法，其特征在于，以水晶兰苷、京尼平苷酸、松果菊苷、毛蕊花糖苷、补骨脂素和异补骨脂素中的至少一种作为对照品。

8.根据权利要求7所述的建立方法，其特征在于，每1ml所述对照品溶液中含水晶兰苷60～180μg；和/或，

9.根据权利要求1-8任一项所述的建立方法，其特征在于，所述建立方法得到的复方药物的指纹图谱包括11个特征峰，包括1号峰、2号峰、3号峰、4号峰、5号峰、6号峰、7号峰、8号峰、9号峰、10号峰和11号峰；

10.根据权利要求9所述的建立方法，其特征在于，所述1号峰为水晶兰苷、3号峰为京尼平苷酸、7号峰为松果菊苷、8号峰为毛蕊花糖苷、10号峰为补骨脂素、11号峰为异补骨脂素。

技术总结
本发明属于药物技术分析技术领域，具体涉及一种复方药物的指纹图谱的建立方法。该建立方法包括供试品溶液的制备、对照品溶液的制备，并采用特定的梯度洗脱程序。该建立方法简便、稳定性和重复性好，精密度高，可以完善含有补骨脂、核桃仁、巴戟天、酒肉苁蓉、杜仲炭、醋乳香和醋没药的复方药物的质量控制方法，保证复方药物的质量可靠稳定，能从整体、全面有效地对含有补骨脂、核桃仁、巴戟天、酒肉苁蓉、杜仲炭、醋乳香和醋没药的复方药物，如加味青蛾丸的质量进行控制，从而保证产品的稳定性、可靠性与安全性。

技术研发人员：邱琳,李红凯,肖婷婷,王钰文,张朝华,牛楠
受保护的技术使用者：北京同仁堂股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/5