一种干椒中辣椒素含量的精准快速低成本测定方法与流程

本发明涉及组分鉴定和测定，更具体的说是涉及一种干椒中辣椒素含量的精准快速低成本测定方法。

背景技术：

1、辣椒(capsicum l.)起源于中南美洲的热带和亚热带地区，为茄科辣椒属。辣椒中的“辣味”，是食用辣椒时辣椒中的辣椒碱类物质与疼痛感受系统中的辣椒素受体(trpv1)相结合，产生灼热感和疼痛感，进而产生辛辣感(seungill et al.，2014；wahyuni et al.，1982；fujiwake et al.，2011)。辣椒素类物质其实本质是一种生物碱，是由香草基胺与支链脂肪酸二者酰氨化合成的。辣椒素作为辣椒中的活性成分在医学、农药、化工、食品等领域得到广泛应用，不但能够刺激味觉、制作催泪弹等，还具有杀虫、镇痛等作用。

2、斯科维尔指数(scoville heatunit，shu)是辣椒的辣度单位，该指数评价辣椒素的含量及辣度的高低，也是评价辣椒品质及其制品质量的重要依据。目前测定shu的主要方法包括高效液相色谱(hplc)、液相色谱-质谱(lc-ms)、液相色谱-串联质谱(lc-ms-ms)、固相微萃取-气质联用(spme-gc-ms)法、竞争性酶联免疫吸附法等。但是难以满足快速精确且低成本测定的需求，因此，如何提供一种精确、快速、成本低、易操作的测定shu的方法是本领域技术人员亟待解决的问题。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明提供了一种干椒中辣椒素含量的精准快速低成本测定方法，采用优化的竞争性酶联免疫吸附法进行测定，具有优异效果。

2、为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、一种干椒中辣椒素含量的精准快速低成本测定方法，包括以下步骤：

4、(1)将辣椒于55℃环境中烘干，去籽去梗，研磨后过筛得辣椒粉；

5、(2)将萃取液和辣椒粉混匀后超声萃取，萃取后静置3min，取上清液；

6、(3)将上清液使用萃取液稀释100倍，稀释两次，配制为样品母液，用1×pbs溶液稀释样品母液10倍，得待测辣椒素样品；

7、(4)取酶标板条加入辣椒素标准品和待测辣椒素样品，然后加入hrp标记的辣椒素抗原，轻微震荡后室温孵育30min，倒掉微孔内溶液后，注满洗涤剂洗板，重复多次后吸干，得到预包被抗辣椒素抗体的微孔酶标板；

8、(5)在预包被抗辣椒素抗体的微孔酶标板中加入底物溶液，室温下孵育10min后加入终止液，酶标仪450nm读取od值。

9、优选的，步骤(1)中烘干温度50-60℃，更优选为55℃。

10、优选的，步骤(1)中过40-80目筛。

11、优选的，步骤(2)中所述萃取液为体积分数95％的乙醇溶液。

12、优选的，步骤(2)中萃取液与辣椒粉的料液比为1：10(g:ml)。

13、优选的，步骤(2)中萃取时间15-30min，更优选为15min。

14、优选的，所述辣椒素标准品、待测辣椒素样品、hrp标记的辣椒素抗原、底物和终止液的体积比为1：1：1：1：1。

15、优选的，步骤(4)中所述洗涤剂为体积比0.05wt％tween20：ddh2o＝1:20的混合液。

16、优选的，步骤(5)中所述底物为体积比0.01wt％过氧化氢：0.1wt％tmb＝1:1的混合液。

17、优选的，步骤(5)中所述终止液为1mol/l的hcl。

18、经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种干椒中辣椒素含量的精准快速低成本测定方法，具有如下有益效果：

19、通过测定工艺的优化，使辣椒素含量测定操作简单、测定速度快、结果精准且成本低，尤其适合批量样品的测定。

技术特征：

1.一种干椒中辣椒素含量的精准快速低成本测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种干椒中辣椒素含量的精准快速低成本测定方法，其特征在于，步骤(1)中烘干温度50-60℃。

3.根据权利要求1所述的一种干椒中辣椒素含量的精准快速低成本测定方法，其特征在于，步骤(1)中过40-80目筛。

4.根据权利要求1所述的一种干椒中辣椒素含量的精准快速低成本测定方法，其特征在于，步骤(2)中所述萃取液为体积分数95％的乙醇溶液。

5.根据权利要求1所述的一种干椒中辣椒素含量的精准快速低成本测定方法，其特征在于，步骤(2)中萃取液与辣椒粉的料液比为1：10(g:ml)。

6.根据权利要求1所述的一种干椒中辣椒素含量的精准快速低成本测定方法，其特征在于，步骤(2)中萃取时间15min。

7.根据权利要求1所述的一种干椒中辣椒素含量的精准快速低成本测定方法，其特征在于，所述辣椒素标准品、待测辣椒素样品、hrp标记的辣椒素抗原、底物和终止液的体积比为1：1：1：1：1。

8.根据权利要求1所述的一种干椒中辣椒素含量的精准快速低成本测定方法，其特征在于，步骤(4)中所述洗涤剂为体积比0.05wt％tween20：ddh2o＝1:20的混合液。

9.根据权利要求1所述的一种干椒中辣椒素含量的精准快速低成本测定方法，其特征在于，步骤(5)中所述底物为体积比0.01wt％过氧化氢：0.1wt％tmb＝1:1的混合液。

10.根据权利要求1所述的一种干椒中辣椒素含量的精准快速低成本测定方法，其特征在于，步骤(5)中所述终止液为1mol/l的hcl。

技术总结
本发明公开了一种干椒中辣椒素含量的精准快速低成本测定方法，首先对干辣椒研磨针对不同辣度辣椒过不同细度(40‑80目)筛得辣椒粉，然后以体积分数95％的乙醇水溶液萃取辣椒素15min，萃取的辣椒素稀释后再用1×PBS溶液稀释，得待测辣椒素样品；取酶标板条加入辣椒素标准品和待测辣椒素样品，然后加入HRP标记的辣椒素抗原，室温孵育后倒掉微孔内溶液洗板后吸干，得到预包被抗辣椒素抗体的微孔酶标板；在预包被抗辣椒素抗体的微孔酶标板中加入底物溶液，室温下孵育后加入终止液，酶标仪450nm读取OD值。本发明通过对测定工艺的优化，使辣椒素含量测定操作简单、测定速度快、结果精准，尤其适合批量样品的测定。

技术研发人员：郑井元,彭月,戴雄泽,周书栋,李雪峰,朱春晖,李洁
受保护的技术使用者：湖南省蔬菜研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15