一种二叔丁基氯甲基磷酸酯的核磁定量检测方法与流程

本发明属于检测，尤其是涉及一种二叔丁基氯甲基磷酸酯的核磁定量检测方法。

背景技术：

1、二叔丁基氯甲基磷酸酯属于基因毒性杂质中的一种。基因毒性杂质是指能直接或者间接损害dna，导致基因突变或具有致癌倾向的位置。二叔丁基氯甲基磷酸酯是brl-186616合成过程中使用到的原料之一，很容易残留在brl-186616产物中，不利于brl-186616药物安全性。

2、近年来，emea、fda、ich等相继发布了针对基因毒性杂质的指导原则。基因毒性杂质限度要求很低，其分析检测的难度较大。高效液相色谱法是药物分子中最常用的分离分析手段，但是由于二叔丁基氯甲基磷酸酯紫外吸收弱，沸点高的特点，hplc方法不能满足基因毒性杂质限度低的要求。lc-ms/ms法是常用的基因毒性杂质检测方法，但二叔丁基氯甲基磷酸酯无明显质谱信号，无法达到检测要求。

技术实现思路

1、为解决上述技术问题，本发明提供一种二叔丁基氯甲基磷酸酯的核磁定量检测方法。

2、本发明采用的技术方案是：一种二叔丁基氯甲基磷酸酯的核磁定量检测方法，以1,3,5-三甲氧基苯为内标，通过核磁方法检测二叔丁基氯甲基磷酸酯。

3、优选地，具体检测步骤为：

4、步骤一：配置内标储备液，取1,3,5-三甲氧基苯，加dmso溶解制备得到内标储备液；

5、步骤二：配制二叔丁基氯甲基磷酸酯对照品溶液，取二叔丁基氯甲基磷酸酯，加入dmso溶解，用dmso和内标储备液适量稀释得到对照品溶液；

6、步骤三：配制样品溶液，取供试品，加入内标储备溶液和dmso，加热溶解，制备得到样品溶液；

7、步骤四：将步骤二和三制备得到的溶液在核磁中进样检测；

8、步骤五：定内标峰面积为100，对二叔丁基氯甲基磷酸酯峰进行标峰，按外标法以峰面积计算二叔丁基氯甲基磷酸酯的含量。

9、优选地，步骤一中内标储备液浓度为0.5mg/ml；步骤二中对照品溶液浓度为28μg/ml。

10、优选地，步骤四中核磁检测条件为检测序列zg，扫描次数8次，延迟时间15秒。

11、优选地，步骤三中，取供试品约17.5mg，精密加入内标储备溶液100μl，dmso 400μl加热溶解。

12、二叔丁基氯甲基磷酸酯的核磁定量检测方法在评价brl-186616安全性方法中的应用。

13、本发明具有的优点和积极效果是：利用核磁定量法即可完成低浓度二叔丁基氯甲基磷酸酯的检测，该检测方法操作简单，检测速度快、分析时间短、检测结果准确性高，克服了现有技术不能用色谱和质谱等方法检测药物中二叔丁基氯甲基磷酸酯含量的难题；本检测方法的准确性经专属性、定量限与检出限、精密度等试验验证，准确可靠。

技术特征：

1.一种二叔丁基氯甲基磷酸酯的核磁定量检测方法，其特征在于：以1,3,5-三甲氧基苯为内标，通过核磁方法检测二叔丁基氯甲基磷酸酯。

2.根据权利要求1所述的二叔丁基氯甲基磷酸酯的核磁定量检测方法，其特征在于：具体检测步骤为：

3.根据权利要求2所述的二叔丁基氯甲基磷酸酯的核磁定量检测方法，其特征在于：步骤一中内标储备液浓度为0.5mg/ml；步骤二中对照品溶液浓度为28μg/ml。

4.根据权利要求2所述的二叔丁基氯甲基磷酸酯的核磁定量检测方法，其特征在于：步骤四中核磁检测条件为检测序列zg，扫描次数8次，延迟时间15秒。

5.根据权利要求2所述的二叔丁基氯甲基磷酸酯的核磁定量检测方法，其特征在于：步骤三中，取供试品约17.5mg，精密加入内标储备溶液100μl，dmso 400μl加热溶解。

6.权利要求1-5中任一所述的二叔丁基氯甲基磷酸酯的核磁定量检测方法在评价brl-186616安全性方法中的应用。

技术总结
本发明公开一种二叔丁基氯甲基磷酸酯的核磁定量检测方法，通过核磁方法检测二叔丁基氯甲基磷酸酯；配置含有1,3,5‑三甲氧基苯内标储备液，将其加入到样品溶液中，加热溶解后，用于核磁检测。本发明的有意效果是：利用核磁定量法即可完成低浓度二叔丁基氯甲基磷酸酯的检测，该检测方法操作简单，检测速度快、分析时间短、检测结果准确性高，克服了现有技术不能用色谱和质谱等方法检测药物中二叔丁基氯甲基磷酸酯含量的难题；本检测方法的准确性经专属性、定量限与检出限、精密度等试验验证，准确可靠。

技术研发人员：靳晓博,张娜,梁信芳,李安平,柏旭
受保护的技术使用者：瀚盟测试科技（天津）有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16