一种E.coliHCPELISA检测试剂盒及使用方法、应用与流程

本发明涉及生物检测领域，尤其涉及一种e.coli hcp elisa检测试剂盒及使用方法、应用。

背景技术：

1、宿主细胞蛋白，简称hcp，是一种与过程相关的杂质，由用于生产生物药物蛋白的宿主细胞进行表达。而在纯化的过程中，绝大多数的hcp都被去除了，之后极少部分的hcp残留在产品当中，这会对产品质量产生一定的影响。

2、现有技术中的hcp检测的检测周期长，准备时间长并且准备工作较为复杂，且受环境影响较大，因此对于检测环境具有一定程度的要求。专利cn115877013a提供了一种elisa检测试剂盒，其主要在试剂盒中提供已包含包被好的板子，配置好的试剂，进而改善现有实验检测操作中存在的复杂操作，出错率高等不足，解决前期准备工作繁琐的技术问题，但是对于检测的准确度以及稳定性的问题并未解决。

3、因此，为了解决上述问题，本申请中提供了一种elisa检测试剂盒及其使用方法。

技术实现思路

1、为了解决上述问题，本发明第一方面提供了一种e.coli hcp elisa检测试剂盒，所述试剂盒用料包括：包被酶标板，封板膜，检测抗体，酶结合物，标准品，功能液和说明书。

2、作为一种优选的方案，所述包被酶标板为e.coli hcp包被酶标板。

3、作为一种优选的方案，所述功能液至少包括稀释液，清洗液，显色液以及终止液。

4、作为一种优选的方案，所述检测抗体为1～5wt％的hcp抗体稀释溶液。

5、作为一种优选的方案，所述检测抗体为1wt％的hcp抗体稀释溶液。

6、作为一种优选的方案，所述酶结合物为高活性重组hrp链酶亲和素中的任一种。

7、作为一种优选的方案，所述酶结合物为2～4wt％高活性重组hrp链酶亲和素。

8、作为一种优选的方案，所述酶结合物为2.5wt％高活性重组hrp链酶亲和素。

9、作为一种优选的方案，所述标准品为e.coli hcp的标准稀释液。

10、作为一种优选的方案，所述e.coli hcp的标准稀释液的稀释比例为1:100～1000。

11、作为一种优选的方案，所述e.coli hcp的标准稀释液的稀释比例为1:300～800。

12、作为一种优选的方案，所述样品稀释液为0.5wt％casein-na和/或3wt％bsa-pbs。

13、作为一种优选的方案，所述样品稀释液为3wt％bsa-pbs。

14、作为一种优选的方案，所述清洗液为10×pbs-t洗液。

15、作为一种优选的方案，所述清洗液为10wt％的10×pbs-t洗液。

16、本发明第二方面提供了一种上述e.coli hcp elisa检测试剂盒的使用方法，步骤包括以下几步：(1)待用试剂摇匀，避免气泡产生；(2)包被酶标板加样，之后封板膜密封室温下反应1～2h；(3)洗涤，弃去各孔内液体，用清洗液注满微孔，200～300μl/孔，静置20～40s，去除孔内液体，重复3～5次，纸巾拍干；(4)加入检测抗体，每孔加生物素检测抗体工作液100～150μl,用封板膜封板后室温下反应30～50分钟；(5)二次洗涤；(6)加酶结合物工作液，每孔加酶结合物工作液100～150μl,用封板膜封板后室温下反应10～40分钟；(7)三次洗涤；(8)每孔分别加底物显色液100～125μl,轻微振荡混匀后用封板膜封板置25℃显色10～15min；(9)每孔加终止液100～125μl,轻微混匀，选择酶标仪主波长450nm,测定各孔吸光值，标准曲线的计算浓度。

17、本申请人意外发现，当采用2.5wt％高活性重组hrp链酶亲和素与1wt％的hcp抗体稀释溶液组合时，不仅能够实现试剂盒的hcp含量快速检测，还能在此基础上大幅提高检测准确性以及加快结果获取时间。本申请人认为：当2.5wt％高活性重组hrp链酶亲和素与1wt％的hcp抗体稀释溶液组合时，两者的共同作用不仅能够共同促进所有目标物质与相应的特异性抗体结合的速度，并且能够配合本申请中采用的单组分显色液降低背景复杂程度，避免背景因为非特异性相互作用增加而增加，从而显色后影响最终数据准确性。

18、本发明第二方面提供了一种上述e.coli hcp elisa检测试剂盒的应用，包括该e.coli hcp elisa检测试剂盒在快速以及简易e.coli hcp含量检测方法中的应用。

19、有益效果：

20、1、本申请中提供的一种e.coli hcp elisa检测试剂盒及其使用方法，其检测准确度高，检测步骤简便，且具有固定的浓度计算规格，出错率低，能够有效解决前提繁琐的准备工作，便于实验的展开。

21、2、本申请中提供的一种e.coli hcp elisa检测试剂盒及其使用方法，当采用2.5wt％高活性重组hrp链酶亲和素与1wt％的hcp抗体稀释溶液组合方案时，两者的共同作用不仅能够共同促进所有目标物质与相应的特异性抗体结合的速度，并且能够配合本申请中采用的单组分显色液降低背景复杂程度，避免背景因为非特异性相互作用增加而增加，从而显色后影响最终数据准确性。

22、3、本申请中提供的一种e.coli hcp elisa检测试剂盒及其使用方法，采用的双抗夹心法检测e.coli hcp的含量，能够有效降低背景噪音，从而大幅提高检测的准确度。

23、4、本申请中提供的一种e.coli hcp elisa检测试剂盒及其使用方法，其可改善现有实验检测操作中存在的复杂操作，出错率高等不足，解决前期准备工作繁琐的技术问题，便于实验的顺利开展，得到更可靠、准确的数据。

24、5、本申请中提供的一种e.coli hcp elisa检测试剂盒及其使用方法，同样可以去掉提前一天进行板子包被，以及其他检验试剂的配制操作步骤，试剂盒中有配置好的试剂，可直接用于实验，减少操作者的工作量，节约整个操作时间，只需要3小时即可完成检验。且若是用于连续性检测，可使检测结果更具比较性。

技术特征：

1.一种e.coli hcp elisa检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒用料包括：包被酶标板，封板膜，检测抗体，酶结合物，标准品，功能液和说明书；

2.根据权利要求1所述的e.coli hcp elisa检测试剂盒，其特征在于：所述功能液至少包括稀释液，清洗液，显色液以及终止液。

3.根据权利要求2所述的e.coli hcp elisa检测试剂盒，其特征在于：所述检测抗体为1～5wt％的hcp抗体稀释溶液。

4.根据权利要求3所述的e.coli hcp elisa检测试剂盒，其特征在于：所述酶结合物为高活性重组hrp链酶亲和素中的任一种。

5.根据权利要求4所述的e.coli hcp elisa检测试剂盒，其特征在于：所述标准品为e.coli hcp的标准稀释液。

6.根据权利要求5所述的e.coli hcp elisa检测试剂盒，其特征在于：所述e.coli hcp的标准稀释液的稀释比例为1:100～1000。

7.根据权利要求6所述的e.coli hcp elisa检测试剂盒，其特征在于：所述样品稀释液为0.5wt％casein-na和/或3wt％bsa-pbs。

8.根据权利要求7所述的e.coli hcp elisa检测试剂盒，其特征在于：所述清洗液为10×pbs-t洗液。

9.一种根据权利要求2～8任一项所述的e.coli hcp elisa检测试剂盒的使用方法，其特征在于：步骤包括以下几步：(1)待用试剂摇匀，避免气泡产生；(2)包被酶标板加样，之后封板膜密封室温下反应1～2h；(3)洗涤，弃去各孔内液体，用清洗液注满微孔，200～300μl/孔，静置20～40s，去除孔内液体，重复3～5次，纸巾拍干；(4)加入检测抗体，每孔加生物素检测抗体工作液100～150μl,用封板膜封板后室温下反应30～50分钟；(5)二次洗涤；(6)加酶结合物工作液，每孔加酶结合物工作液100～150μl,用封板膜封板后室温下反应10～40分钟；(7)三次洗涤；(8)每孔分别加底物显色液100～125μl,轻微振荡混匀后用封板膜封板置25℃显色10～15min；(9)每孔加终止液100～125μl,轻微混匀，选择酶标仪主波长450nm,测定各孔吸光值，标准曲线的计算浓度。

10.一种根据权利要求2～8任一项所述的e.coli hcp elisa检测试剂盒的应用，其特征在于：包括该e.coli hcp elisa检测试剂盒在快速以及简易e.coli hcp含量检测方法中的应用。

技术总结
本发明涉及生物检测领域，尤其涉及一种E.coli HCP ELISA检测试剂盒及使用方法、应用。E.coli HCP ELISA检测试剂盒，所述试剂盒用料包括：包被酶标板，封板膜，检测抗体，酶结合物，标准品，功能液和说明书，包被酶标板为E.coli HCP包被酶标板。本申请中提供的一种E.coli HCP ELISA检测试剂盒及其使用方法，其检测准确度高，检测步骤简便，且具有固定的浓度计算规格，出错率低，能够有效解决前提繁琐的准备工作，便于实验的展开。

技术研发人员：许金超,栗红建,张丹,李永锋,刘丽美,张伟男,蔡宇卿,郭彬彬
受保护的技术使用者：江苏谱新生物医药有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/5