一种基于超高效液相色谱串联质谱法检测茶叶和茶汤中氯氟醚菌唑对映体的方法与流程

本发明属于茶叶农药残留检测，具体涉及一种基于超高效液相色谱串联质谱法检测茶叶和茶汤中氯氟醚菌唑对映体的方法。

背景技术：

1、茶叶作为重要经济作物，对我国广大茶区的经济发展具有重要意义。茶叶是一种绿色健康饮料，与咖啡和可可并称三大世界饮料，其品质及质量安全关系着茶产业的长期可持续发展。茶叶生长喜湿热环境，病虫害相对容易发生，而喷施化学农药是目前防治茶树病虫害最快、最有效的方法。目前我国使用农药类型众多，其中登记使用的手性农药约270种，占比近40％，茶园上登记允许的农药约2/3具有手性结构。而市面上的手性农药大多以外消旋体的形式售卖，可手性农药以外消旋体的形式使用进入环境中以后，各个对映体在生物活性、毒性毒理、环境行等方面可能会有差异。所以，从对映体水平上对农药进行安全性评价具有重要意义。

2、氯氟醚菌唑是新型三唑类杀菌剂，因其独特的异丙醇结构，优异的抗病菌活性被广泛用于防治许多作物病害、提高作物活力及产量。据报道，氯氟醚菌唑对茶叶种传病原菌立枯丝核菌(rhizoctonia solani)具有优异的抑制活性，在控制茶园病害、提高茶叶产量等方面有很大的应用潜力。此外，氯氟醚菌唑具备的手性结构，使其对映体在环境中的行为可能不同。已有研究报道，氯氟醚菌唑对映体的生物活性以及对非靶标生物的毒性具有立体选择性差异。目前，关于氯氟醚菌唑的残留研究，主要集中在其外消旋体的检测方法、对映体选择性毒性效应研究及其药效评价。然而，氯氟醚菌唑在我国尚未登记在茶叶上使用，有关其在茶叶中的立体选择性行为也尚未见相关报道。

3、因此，本发明针对氯氟醚菌唑的对映选择性，建立了鲜叶、绿茶、红茶、绿茶茶汤和红茶茶汤中的uhplc-ms/ms对映体检测方法，为以后研究氯氟醚菌唑对映体在茶叶生长加工冲泡过程中的残留降解及在其它农产品中的残留分析提供分析方法，保障质量安全。

技术实现思路

1、针对上述现有技术中存在的缺陷，本发明的目的在于设计提供一种基于超高效液相色谱串联质谱法检测茶叶和茶汤中氯氟醚菌唑对映体的方法。通过比较不同酸碱度的提取溶剂和不同种类、不同质量净化剂的效果，建立了茶鲜叶、绿茶、红茶、绿茶汤和红茶汤中氯氟醚菌唑对映体的检测方法。

2、一种基于超高效液相色谱串联质谱法检测茶叶和茶汤中氯氟醚菌唑对映体的方法，包括以下步骤：

3、1)样品提取净化：对鲜叶和茶汤样品，采用1％氨水乙腈提取，多壁碳纳米管净化；

4、或1)样品提取净化：对绿茶和红茶样品，采用1％乙酸乙腈提取，多壁碳纳米管净化；

5、2)采用chiral mx(2)-rh色谱柱进行超高效液相色谱串联质谱法检测茶叶和茶汤中氯氟醚菌唑对映体；

6、3)配制氯氟醚菌唑标准储备液，用乙腈稀释成标准溶液1mg/l，然后将步骤1)处理后的鲜叶、茶叶或茶汤基质用乙腈分别配制成1.0、0.50、0.25、0.05、0.025、0.0050、0.0025和0.0005mg/l的标准溶液，对映单体浓度为一半，uhplc-ms/ms进样分析，以浓度为横坐标x，峰面积平均值为纵坐标y，制作标准曲线；

7、4)计算添加回收率、相对标准偏差、方法的检测限和定量限，满足残留分析要求。

8、进一步地，步骤1)中鲜叶的具体提取净化为：经磨碎后称取5g鲜叶，至离心管中加入10ml纯净水和10ml1％的氨水乙腈，振荡10min，加入2g氯化钠和4g无水硫酸镁后振荡5min后离心，吸取上层有机相溶液1.5ml加入装有150mg无水硫酸镁和50mg mwcnts的2ml离心管中，涡旋震荡净化2min后离心，过0.22μm滤膜至进样瓶中，uhplc-ms/ms待测。

9、进一步地，步骤1)中茶叶样品的具体提取净化为：经磨碎后称取5g茶叶，至离心管中加入10ml纯净水和10ml1％的乙酸乙腈，振荡10min，加入2g氯化钠和4g无水硫酸镁后振荡5min后离心，吸取上层有机相溶液1.5ml加入装有150mg无水硫酸镁和80mg mwcnts的2ml离心管中，涡旋震荡净化2min后离心，过0.22μm滤膜至进样瓶中，uhplc-ms/ms待测。

10、进一步地，步骤1)中茶汤样品具体提取净化为：吸取10ml茶汤，至离心管中加入10ml1％氨水乙腈，振荡10min，加入5g氯化钠后振荡5min后离心，吸取上层有机相溶液1.5ml加入装有5mg多壁碳纳米管的2ml离心管中，涡旋震荡净化2min后离心，过0.22μm滤膜至进样瓶中，uhplc-ms/ms待测。

11、进一步地，步骤2)中色谱条件为：3μm×150mm×2.1mm chiral mx(2)-rh色谱柱；柱温40℃；进样量5μl；流速0.25ml/min；流动相a为0.1％甲酸水，b为乙腈；梯度洗脱程序为：保持60％b 6min。

12、进一步地，步骤2)中质谱条件为：电离源模式：电喷雾离子化(esi)；离子源极性：esi+；雾化气：氮气；鞘气流速4.58l/min，辅助气流速7.97l/min；碰撞气：氩气；喷雾电压：3500v；毛细管温度：350℃；离子传输管温度：300℃。；

13、本发明方法不同基质中氯氟醚菌唑对映体的标准曲线线性相关系数均在0.9996以上，平均添加回收率在76％-107％，相对标准偏差小于13.0％，方法定量限为0.005mg/k。本发明方法满足残留分析要求，能够为茶鲜叶、茶叶和茶汤中氯氟醚菌唑对映体的检测提供方法。

技术特征：

1.一种基于超高效液相色谱串联质谱法检测茶叶和茶汤中氯氟醚菌唑对映体的方法，其特征在于包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的一种基于超高效液相色谱串联质谱法检测茶叶和茶汤中氯氟醚菌唑对映体的方法，其特征在于步骤1）中鲜叶的具体提取净化为：经磨碎后称取5 g鲜叶，至离心管中加入10 ml纯净水和10 ml1%的氨水乙腈，振荡10 min，加入2 g氯化钠和4 g无水硫酸镁后振荡5 min后离心，吸取上层有机相溶液1.5 ml加入装有150 mg 无水硫酸镁和50 mg mwcnts的2 ml离心管中，涡旋震荡净化2 min后离心，过0.22 μm滤膜至进样瓶中，uhplc-ms/ms待测。

3.如权利要求1所述的一种基于超高效液相色谱串联质谱法检测茶叶和茶汤中氯氟醚菌唑对映体的方法，其特征在于步骤1）中茶叶样品的具体提取净化为：经磨碎后称取5 g茶叶，至离心管中加入10 ml纯净水和10 ml1%的乙酸乙腈，振荡10 min，加入2 g氯化钠和4 g无水硫酸镁后振荡5 min后离心，吸取上层有机相溶液1.5 ml加入装有150 mg 无水硫酸镁和80 mg mwcnts的2 ml离心管中，涡旋震荡净化2 min后离心，过0.22 μm滤膜至进样瓶中，uhplc-ms/ms待测。

4. 如权利要求1所述的一种基于超高效液相色谱串联质谱法检测茶叶和茶汤中氯氟醚菌唑对映体方法，其特征在于步骤1）中茶汤样品具体提取净化为：吸取10 ml茶汤，至离心管中加入10 ml1%氨水乙腈，振荡10min，加入5 g氯化钠后振荡5 min后离心，吸取上层有机相溶液1.5 ml加入装有5 mg多壁碳纳米管的2 ml离心管中，涡旋震荡净化2 min后离心，过0.22μm滤膜至进样瓶中，uhplc-ms/ms待测。

5. 如权利要求1所述的一种基于超高效液相色谱串联质谱法检测茶叶和茶汤中氯氟醚菌唑的方法，其特征在于步骤2）中色谱条件为：3 μm×150 mm×2.1 mm chiral mx(2)-rh色谱柱；柱温40 ℃；进样量5 μl；流速0.25 ml/min；流动相a为0.1%甲酸水，b为乙腈；梯度洗脱程序为：保持60%b 6 min。

6. 如权利要求1所述的一种基于超高效液相色谱串联质谱法检测茶叶和茶汤中氯氟醚菌唑对映体的方法，其特征在于步骤2）中质谱条件为：电离源模式：电喷雾离子化（esi）；离子源极性：esi＋；雾化气：氮气；鞘气流速4.58 l/min，辅助气流速7.97 l/min；碰撞气：氩气；喷雾电压：3500 v；毛细管温度：350 ℃；离子传输管温度：300 ℃。

技术总结
本发明一种基于超高效液相色谱串联质谱法检测茶叶和茶汤中氯氟醚菌唑对映体的方法，属于茶叶农药残留检测技术领域。本发明包括：1）样品提取净化：对鲜叶、茶叶和茶汤样品，乙酸乙腈或氨水乙腈/水提取，无水硫酸镁和MWCNTs净化；2）采用Chiral MX(2)‑RH色谱柱进行超高效液相色谱串联质谱法检测茶叶和茶汤中氯氟醚菌唑对映体；3）计算氯氟醚菌唑对映体标准曲线和线性相关系数；4）计算添加回收率、相对标准偏差、方法的检测限和定量限。本发明方法满足残留分析要求，能够为茶鲜叶、茶叶和茶汤中氯氟醚菌唑对映体的检测研究提供分析方法。

技术研发人员：张盈,王芳,陈秀,黄文源,段婷婷,张新忠
受保护的技术使用者：贵州省植物保护研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/2/8