一种无标记检测细胞表面生物分子的方法

本发明涉及检测领域，涉及一种细胞表面生物分子的检测方法，具体涉及无标记检测细胞表面生物分子的方法。

背景技术：

1、细胞是各种生命体中的基本结构单元。在细胞膜上存在各种受体分子，它们能和各自的目标分子如蛋白质、寡糖、核酸、多肽和小分子物质发生亲和反应，这一亲和反应是细胞通讯、免疫反应等生命过程中的重要一环。因此，直接检测目标分子和细胞之间的亲和反应，对认识复杂生命过程、药物筛选、临床诊疗等具有重要意义。

2、目前，研究细胞受体与目标分子相互作用的方法基本都建立在标记技术的基础上，即采用荧光等标记分子对目标分子进行标记，在和细胞反应后再采用荧光显微镜、流式细胞仪等进行信号读取。这一方法灵敏度好，广泛应用于各种生命科学和医学研究中，但其缺点是对目标分子的标记容易造成其识别活性的改变(损害)，同时标记过程也造成高成本。因此，非标记检测技术亟待发展。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种无标记检测细胞表面生物分子的方法。

2、为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、一种无标记检测细胞表面生物分子的方法，将细胞培养于表面荷正电的载玻片表面并安装于斜入射光反射差装置测试平台上，然后加入含识别细胞表面生物分子的捕获剂溶液，记录反应过程光学实时信号，若光学信号上升表示抗体与细胞膜表面上发生了亲和反应，则细胞表面含有目标生物分子。

4、本发明优选的，所述反应的时间为1-2h。

5、本发明优选的，所述目标分子为糖蛋白、脂蛋白、寡糖链或多糖链。

6、本发明优选的，所述捕获剂为亲和探针分子。

7、本发明优选的，所述亲和探针分子为抗体、凝集素或核酸/多肽适配体。

8、本发明优选的，所述载玻片为微阵列芯片，由载玻片表面先用紫外光和光掩模辐照，在用引发原子转移自由基聚合技术在表面生长poegma聚合物刷。

9、本发明优选的，所述检测的光源波长为632.8nm，出射p-线偏振光的he-ne激光器，功率为3mw。

10、本发明优选的，所述细胞为hla class i类抗原阳性细胞，所述抗体为抗hlaclass i抗体。

11、本发明优选的，所述hla class i类抗原阳性细胞为mda-mb-231细胞或huvec细胞。

12、本发明的有益效果在于：本发明公开了一种无标记检测细胞表面生物分子的方法，该方法利用斜入射光反射差装置检测贴壁细胞表面生物分子的方法，本发明利用光学探测技术斜入射光反射差(oird)，实现了实时、无标记、定量检测抗体在贴壁细胞膜表面的亲和反应；结合我们发展的细胞微阵列构建技术，将为生命科学和医学药学研究提供了一种可靠的无标记、高通量检测技术。

技术特征：

1.一种无标记检测细胞表面生物分子的方法，其特征在于：将细胞培养于表面荷正电的载玻片表面并安装于斜入射光反射差装置测试平台上，然后加入含识别细胞表面生物分子的捕获剂溶液，记录反应过程光学实时信号，若光学信号上升表示抗体与细胞膜表面上发生了亲和反应，则细胞表面含有目标生物分子。

2.根据权利要求1所述无标记检测细胞表面生物分子的方法，其特征在于：所述反应的时间为1-2h。

3.根据权利要求1所述无标记检测细胞表面生物分子的方法，其特征在于：所述目标分子为糖蛋白、脂蛋白、寡糖链或多糖链。

4.根据权利要求1所述无标记检测细胞表面生物分子的方法，其特征在于：所述捕获剂为亲和探针分子。

5.根据权利要求4所述无标记检测细胞表面生物分子的方法，其特征在于：所述亲和探针分子为抗体、凝集素或核酸/多肽适配体。

6.根据权利要求1所述无标记检测细胞表面生物分子的方法，其特征在于：所述载玻片为微阵列芯片，由载玻片表面先用紫外光和光掩模辐照，在用引发原子转移自由基聚合技术在表面生长poegma聚合物刷。

7.根据权利要求1所述无标记检测细胞表面生物分子的方法，其特征在于：所述检测的光源波长为632.8nm，出射p-线偏振光的he-ne激光器，功率为3mw。

8.根据权利要求1所述无标记检测细胞表面生物分子的方法，其特征在于：所述细胞为hla class i类抗原阳性细胞，所述抗体为抗hla class i抗体。

9.根据权利要求8所述无标记检测细胞表面生物分子的方法，其特征在于：所述hlaclass i类抗原阳性细胞为mda-mb-231细胞或huvec细胞。

技术总结
本发明公开了一种无标记检测细胞表面生物分子的方法，该方法利用斜入射光反射差装置检测贴壁细胞表面生物分子，具体是将细胞培养于表面荷正电的载玻片表面并安装于斜入射光反射差装置测试平台上，然后加入识别细胞表面生物分子的抗体溶液，记录反应过程光学实时信号，若光学信号上升表示抗体与细胞膜表面上发生了亲和反应，则细胞表面含有目标生物分子。本发明的方法具有实时、无标记的优点，还能结合细胞微阵列构建技术，为生命科学和医学药学研究提供了一种可靠的无标记、高通量检测技术。

技术研发人员：胡卫华,李潇熠
受保护的技术使用者：西南大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/22