一种转膜缓冲液及其制备方法和应用

本发明涉及生物检测，特别是涉及一种转膜缓冲液及其制备方法和应用。

背景技术：

1、蛋白质免疫印迹(western blot)是用于检测目标蛋白质的实验方法，通过蛋白电泳分离、转膜和抗体检测实现。在蛋白免疫印迹实验中，转膜是指将蛋白从凝胶基质移动到合成膜支持物上，并与膜相结合，形成印迹。常见的转印技术包括虹吸印迹法、电泳转印法和真空负压吸引转印法。其中，电泳转印技术自1979年harry towbin创造性的发明以来，就成了40余年来最经典的蛋白印迹技术，即使用电场力驱动蛋白从凝胶中洗脱转移到膜上。而转膜缓冲液可以给电场提供介质，让蛋白在电场力的作用下从负极凝胶端向正极膜端泳动，进而与膜结合固定。传统湿转法通常使用towbin缓冲液配方，该配方包含25mm tris、192mm glycine、20％甲醇，ph值为8.3。但是，该缓冲液存在以下缺点：第一、转膜的速度较低，通常需要耗费90分钟以上的转膜时间；第二、该转膜液转移蛋白时，缓冲液温度会随时间延长显著增加且转膜电流(电压)越大，温度上升越高，高温会降低转膜的效果，还会使得凝胶和膜发现位移，蛋白条带发生变形等情况，因此常需要在低温条件下进行，降低转膜时产生的高温，这加大了实验成本并且增加了整个免疫蛋白印记时间；第三、该转膜液对高分子蛋白的转膜效果较低，只能让部分大分子蛋白从凝胶转移到膜上；第四、该体系中含有20％甲醇，高浓度的甲醇会对人体造成伤害。

技术实现思路

1、基于此，有必要针对传统转膜液转膜速度慢、缓冲能力差、发热效率低、含有甲醇等问题，提供一种转膜缓冲液及其制备方法和应用。

2、一种转膜缓冲液，其有效成分包含浓度为40～60mm的2-(n-吗啉)乙磺酸、浓度为40～60mm的三羟甲基氨基甲烷、浓度为1～3mm的络合剂、体积百分比为10～30％的乙醇或异丙醇、质量百分比为0.05～0.2％的十二烷基硫酸钠。

3、上述转膜缓冲液中，2-(n-吗啉)乙磺酸与三羟甲基氨基甲烷构成缓冲对，具有强大的缓冲能力，使本发明的转膜缓冲液能在较大的电流(电压)条件下，维持较低的发热效率；十二烷基硫酸钠可以促进蛋白质从凝胶中洗脱，特别是难以从凝胶中洗脱的大分子量蛋白质；乙醇或异丙醇能够从十二烷基硫酸钠-蛋白质复合物中除去十二烷基硫酸钠，并改善蛋白质与膜的结合，且相比甲醇毒性更低，使本发明的转膜缓冲液具有更好的安全性；乙二胺四乙酸二钠，作为络合剂，可以消除如钙离子、钾离子等杂质金属离子对转膜的干扰。

4、在其中一个实施例中，所述络合剂包含乙二胺四乙酸二钠。

5、在其中一个实施例中，其有效成分包含浓度为45～55mm的2-(n-吗啉)乙磺酸、浓度为45～55mm的三羟甲基氨基甲烷、浓度为1.5～2.5mm的乙二胺四乙酸二钠、体积百分比为15～25％的乙醇或异丙醇、质量百分比为0.05～0.15％的十二烷基硫酸钠。

6、在其中一个实施例中，其有效成分包含浓度为48～52mm的2-(n-吗啉)乙磺酸、浓度为48～52mm的三羟甲基氨基甲烷、浓度为1.8～2.2mm的乙二胺四乙酸二钠、体积百分比为18～22％的乙醇、质量百分比为0.08～0.12％的十二烷基硫酸钠。

7、在其中一个实施例中，所述转膜缓冲液的ph值为7.1～7.3。

8、在其中一个实施例中，所述转膜缓冲液的转膜条件为恒流400ma～500ma。

9、本发明还提供了一种所述的转膜缓冲液的制备方法，包括以下步骤：按配比称取原料；将三羟甲基氨基甲烷、2-(n-吗啉)乙磺酸、络合剂和十二烷基硫酸钠溶解于水；加入乙醇，即得。

10、在其中一个实施例中，包括以下步骤：按配比称取原料；将三羟甲基氨基甲烷、2-(n-吗啉)乙磺酸、乙二胺四乙酸二钠和十二烷基硫酸钠溶解于水；加入乙醇，搅拌；用水定容，即得。

11、本发明还提供了一种所述的转膜缓冲液在半干法电泳转膜中的应用。

12、本发明还提供了一种所述的转膜缓冲液在蛋白印迹检测中的应用。

13、本发明还提供了一种所述的转膜缓冲液在鉴定蛋白中的应用。

14、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

15、本发明的一种转膜缓冲液及其制备方法和应用，2-(n-吗啉)乙磺酸与三羟甲基氨基甲烷构成缓冲对，具有强大的缓冲能力，使本发明的转膜缓冲液能在较大的电流(电压)条件下，维持较低的发热效率；十二烷基硫酸钠可以促进蛋白质从凝胶中洗脱，特别是难以从凝胶中洗脱的大分子量蛋白质；乙醇或异丙醇能够从十二烷基硫酸钠-蛋白质复合物中除去十二烷基硫酸钠，并改善蛋白质与膜的结合，且相比甲醇毒性更低，使本发明的转膜缓冲液具有更好的安全性；乙二胺四乙酸二钠，作为络合剂，可以消除如钙离子、钾离子等杂质金属离子对转膜的干扰。本发明的转膜缓冲液转膜速度快，在免冰浴恒流500ma的条件下30分钟即可完成转膜，具有优异的缓冲能力，能在较大的电流(电压)条件下维持较低的发热效率，同时不含对人体有害的挥发性溶液甲醇。

技术特征：

1.一种转膜缓冲液，其特征在于，其有效成分包含浓度为40～60mm的2-(n-吗啉)乙磺酸、浓度为40～60mm的三羟甲基氨基甲烷、浓度为1～3mm的络合剂、体积百分比为10～30％的乙醇或异丙醇、质量百分比为0.05～0.2％的十二烷基硫酸钠。

2.根据权利要求1所述的转膜缓冲液，其特征在于，所述络合剂包含乙二胺四乙酸二钠。

3.根据权利要求2所述的转膜缓冲液，其特征在于，其有效成分包含浓度为45～55mm的2-(n-吗啉)乙磺酸、浓度为45～55mm的三羟甲基氨基甲烷、浓度为1.5～2.5mm的乙二胺四乙酸二钠、体积百分比为15～25％的乙醇或异丙醇、质量百分比为0.05～0.15％的十二烷基硫酸钠。

4.根据权利要求3所述的转膜缓冲液，其特征在于，其有效成分包含浓度为48～52mm的2-(n-吗啉)乙磺酸、浓度为48～52mm的三羟甲基氨基甲烷、浓度为1.8～2.2mm的乙二胺四乙酸二钠、体积百分比为18～22％的乙醇、质量百分比为0.08～0.12％的十二烷基硫酸钠。

5.根据权利要求1所述的转膜缓冲液，其特征在于，所述转膜缓冲液的ph值为7.1～7.3。

6.根据权利要求1所述的转膜缓冲液，其特征在于，所述转膜缓冲液的转膜条件为恒流400ma～500ma。

7.如权利要求1～6任一项所述的转膜缓冲液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：按配比称取原料；将三羟甲基氨基甲烷、2-(n-吗啉)乙磺酸、络合剂和十二烷基硫酸钠溶解于水；加入乙醇，即得。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：按配比称取原料；将三羟甲基氨基甲烷、2-(n-吗啉)乙磺酸、乙二胺四乙酸二钠和十二烷基硫酸钠溶解于水；加入乙醇，搅拌；用水定容，即得。

9.如权利要求1～6任一项所述的转膜缓冲液在蛋白印迹检测中的应用。

10.如权利要求1～6任一项所述的转膜缓冲液在鉴定蛋白中的应用。

技术总结
本发明涉及一种转膜缓冲液及其制备方法和应用。一种转膜缓冲液，其有效成分包含浓度为40～60mM的2‑(N‑吗啉)乙磺酸、浓度为40～60mM的三羟甲基氨基甲烷、浓度为1～3mM的络合剂、体积百分比为10～30％的乙醇或异丙醇、质量百分比为0.05～0.2％的十二烷基硫酸钠。本发明的转膜缓冲液中，2‑(N‑吗啉)乙磺酸与三羟甲基氨基甲烷构成缓冲对，具有强大的缓冲能力，使本发明的转膜缓冲液能在较大的电流(电压)条件下，维持较低的发热效率；十二烷基硫酸钠可以促进蛋白质从凝胶中洗脱，特别是难以从凝胶中洗脱的大分子量蛋白质；乙醇或异丙醇能够从十二烷基硫酸钠‑蛋白质复合物中除去十二烷基硫酸钠，并改善蛋白质与膜的结合，且相比甲醇毒性更低，具有更好的安全性。

技术研发人员：周迎春,胡昌磊,庞明杰,刘彬,张国勇,华玥,许红琳,韩新,许桐,张嘉怡
受保护的技术使用者：南方医科大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/25