一种检测磷酸奥司他韦干混悬剂有关物质的液相色谱方法与流程

本发明属于药物分析，具体涉及一种分析测定磷酸奥司他韦干混悬剂有关物质的液相色谱方法。

背景技术：

1、磷酸奥司他韦，是一种治疗和预防成人及小儿（具体年龄因国家而异，有的包括新生儿）甲、乙型流感病毒感染的药物，它是口服神经氨酸酶抑制剂类药物，它能通过人体代谢为神经氨酸酶抑制剂(ni)，从而抑制新的病毒颗粒形成，减少其在人体内的传播，缓解流感症状。磷酸奥司他韦被我国推荐为治疗h1n1和h7n9流感的首选药物。目前已在美国、日本、欧洲、中国等多个国家和地区上市，上市剂型有胶囊、干混悬剂及糖浆剂等。

2、磷酸奥司他韦化学名为（3r，4r，5s）-4-乙酰氨基-5-氨基-3-（1-乙基丙氧基）-1-环己烯-1-羧酸乙酯磷酸盐，结构式如下：

3、。

4、磷酸奥司他韦干混悬剂除印度药典（ip）收载外，未被其他药典收载。目前各国药典收载的主要是磷酸奥司他韦原料、磷酸奥司他韦胶囊及磷酸奥司他韦小儿口服液，各药典标准中有关物质检测方法均为等度洗脱，流动相组成基本一致，仅比例略有差异。

5、磷酸奥司他韦干混悬剂中可见的杂质包括杂质i、杂质ii、杂质iii、杂质iv、杂质v、杂质vii，其结构如下所示。除此之外，磷酸奥司他韦干混悬剂辅料中还含有苯甲酸钠，在以上药典方法中苯甲酸钠与杂质ⅲ依次出峰，苯甲酸钠峰与杂质ⅲ峰无法达到有效的分离，且磷酸奥司他韦干混悬剂原料与辅料山梨醇中的残存的还原糖发生美拉德反应可以产生杂质v与杂质ⅶ，其中的杂质v与主峰分离差，即现有技术均无法实现磷酸奥司他韦干混悬剂中多种杂质的有效同时分离。

6、。

7、因此，目前各国药典方法均不适用于磷酸奥司他韦干混悬剂有关物质的检查，也未检索到其他适用的公开的方法，所以研发一种适用于磷酸奥司他韦干混悬剂的有关物质检查方法非常有必要，以实现对磷酸奥司他韦干混悬剂的质量控制。

技术实现思路

1、为了解决目前技术问题，本发明提供了一种可同时分离样品中多种杂质的分析方法，该方法也可同时有效分离磷酸奥司他韦干混悬剂辅料中苯甲酸钠峰与杂质ⅲ峰，并提高磷酸奥司他韦与杂质v分离度的方法，整体操作简便易行，普遍适用性较高，并能达到较高灵敏度，能更好地控制磷酸奥司他韦干混悬剂的产品质量。

2、本发明提供了一种检测磷酸奥司他韦干混悬剂中有关物质的液相色谱方法，包括以下步骤：

3、(1)系统适用性溶液的配制：取磷酸奥司他韦对照品及杂质ⅰ对照品、杂质ⅱ对照品、杂质ⅲ对照品、杂质ⅳ对照品、杂质ⅴ对照品与杂质ⅶ对照品各适量，加溶剂溶解并稀释制成系统适用性溶液；

4、(2) 供试品溶液的配制：取磷酸奥司他韦干混悬剂适量，用溶剂溶解并稀释制成供试品溶液；

5、(3)空白辅料溶液的配制：取磷酸奥司他韦干混悬剂空白辅料适量，用溶剂溶解并稀释制成空白辅料溶液；

6、(4)色谱试验：取系统适用性溶液、供试品溶液和空白辅料溶液各适量，注入液相色谱仪，记录色谱图；

7、其中，步骤(1)~(3)中所述溶剂为0.003mol/l磷酸溶液-甲醇-乙腈（620∶245∶135），步骤(4)中的色谱条件具体为：

8、检测器：紫外检测器；

9、色谱柱：辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，inertsil c8 4.6mm×250mm 5μm或效能相当的色谱柱；

10、流动相：流动相a：磷酸二氢钾溶液，其浓度为0.02~0.07mol/l，优选0.05mol/l，用碱性试剂调节ph值至7.0~7.4，优选7.2，所述碱性试剂为氢氧化钾溶液，浓度为2mol/l~7mol/l，优选5mol/l；流动相b：甲醇：乙腈=345~145: 35~235，优选比例245:135；梯度洗脱，具体程序为：

11、；

12、流速：0.8～1.5ml/min，优选1.2ml/min；

13、柱温：40~50℃，优选45℃；

14、检测波长：200～220nm，优选207nm；

15、进样体积：75µl。

16、本发明进一步提供了一种检测磷酸奥司他韦干混悬剂中有关物质的相色谱方法，包括以下步骤：

17、(1)系统适用性溶液的配制：取杂质ⅰ对照品、杂质ⅱ对照品、杂质ⅲ对照品、杂质ⅳ对照品、杂质ⅴ对照品、杂质ⅶ对照品与磷酸奥司他韦对照品各适量，加溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含各杂质0.75μg与奥司他韦0.15mg的混合溶液；

18、(2) 供试品溶液的配制：取磷酸奥司他韦干混悬剂混悬液，精密称取适量（约相当于奥司他韦15mg；按测定每毫升重量，用于称样折算），置100ml量瓶中，加溶剂适量，超声振摇5分钟使磷酸奥司他韦溶解，放冷，用溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

19、(3)空白辅料溶液的配制：取空白辅料混悬液约1.3g（或空白辅料细粉约0.25g），置50ml量瓶中，加溶剂约25ml，超声振摇5分钟使溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为空白辅料溶液；

20、(4)色谱试验：取系统适用性溶液、供试品溶液和空白辅料溶液各适量，注入液相色谱仪，记录色谱图；

21、其中，步骤(1)~(3)中所述溶剂为0.003mol/l磷酸溶液-甲醇-乙腈（620∶245∶135），步骤(4)中的色谱条件具体为：

22、色谱柱：辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂（inertsil c8 4.6mm×250mm 5μm或效能相当的色谱柱）；

23、流动相：流动相 a：0.05mol/l磷酸二氢钾溶液（用5mol/l氢氧化钾溶液调节ph值至7.2）；流动相 b：甲醇-乙腈（245:135）；

24、梯度洗脱程序：

25、；

26、流速：1.2ml/min；

27、柱温：45℃；

28、检测波长：207nm；

29、进样体积：75µl。

30、本发明的有益技术效果为：

31、（1）本发明能同时分离杂质i、ii、iii、iv、v、vii多种杂质且分离度均良好，同时实现了磷酸奥司他韦干混悬剂中辅料峰苯甲酸钠峰与杂质ⅲ峰的有效分离，并提高了磷酸奥司他韦峰与杂质ⅴ峰的分离度。本发明所使用的检测方法，分离能力强，操作过程简单，专属性强，辅料峰不干扰检测，操作更方便，能够更有效地实现对产品生产过程环节的质量控制，提高最终产品品质，保证临床用药的安全有效。

32、（2）本发明具有很高的灵敏度，而且准确度高、重复性好、检测时间短，为产品研发和生产过程提供了更加简便、稳定、可靠的分析检测方法。

技术特征：

1.一种检测磷酸奥司他韦干混悬剂中有关物质的液相色谱方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的检测磷酸奥司他韦干混悬剂中有关物质的液相色谱方法，其特征在于，色谱条件还包括：

3.根据权利要求1所述的检测磷酸奥司他韦干混悬剂中有关物质的液相色谱方法，其特征在于，步骤（1）~（3）中所述溶剂为0.003mol/l磷酸溶液：甲醇：乙腈=620∶245∶135。

4.根据权利要求1所述的检测磷酸奥司他韦干混悬剂中有关物质的液相色谱方法，其特征在于，所述色谱柱为inertsil c8 4.6mm×250mm 5μm或效能相当的色谱柱。

5.根据权利要求1所述的检测磷酸奥司他韦干混悬剂中有关物质的液相色谱方法，其特征在于，所述流动相a的浓度为0.05mol/l。

6.根据权利要求1所述的检测磷酸奥司他韦干混悬剂中有关物质的液相色谱方法，其特征在于，所述流动相a用碱性试剂调节ph值至7.0~7.4。

7.根据权利要求6所述的检测磷酸奥司他韦干混悬剂中有关物质的液相色谱方法，其特征在于，所述ph值为7.2。

8.根据权利要求6所述的检测磷酸奥司他韦干混悬剂中有关物质的液相色谱方法，其特征在于，所述碱性试剂为5mol/l氢氧化钾溶液。

9.根据权利要求1所述的检测磷酸奥司他韦干混悬剂中有关物质的液相色谱方法，其特征在于，所述流动相b中甲醇：乙腈=245:135。

10.根据权利要求2所述的检测磷酸奥司他韦干混悬剂中有关物质的液相色谱方法，其特征在于，所述柱温为45℃。

技术总结
本发明属于药物分析技术领域，提供了一种检测磷酸奥司他韦干混悬剂有关物质的液相色谱方法，该方法可同时分离样品中多种杂质，同时也可有效分离磷酸奥司他韦干混悬剂辅料中苯甲酸钠峰与杂质Ⅲ峰，并提高磷酸奥司他韦与杂质V分离度的方法，整体操作简便易行，普遍适用性较高，并能达到较高灵敏度，能更好地控制磷酸奥司他韦干混悬剂的产品质量。

技术研发人员：刘风云,明兰玉,马敏
受保护的技术使用者：山东百诺医药股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15