4-[(氨基羰基)氨基]-N-[芴甲氧羰基]-D-苯丙氨酸手性纯度检测方法与流程

本发明涉及 4-[(氨基羰基)氨基]-n-[芴甲氧羰基]-d-苯丙氨酸手性纯度检测方法。

背景技术：

1、 4-[(氨基羰基)氨基]-n-[芴甲氧羰基]-d-苯丙氨酸手性检测通常采用等度方法，主要是手性色谱柱的填料多以硅胶表面涂敷纤维素-三（4-甲基苯甲酸酯），对柱压有一定的敏感性，柱压过高了会使硅胶表面涂敷的纤维素流失，柱头塌陷；常规多以恒压、恒流来使用手性色谱柱，而 4-[(氨基羰基)氨基]-n-[芴甲氧羰基]-d-苯丙氨酸手性检测使用等度时，因流动相的pka值无法达到分离效果。

技术实现思路

1、本发明提供了一种 4-[(氨基羰基)氨基]-n-[芴甲氧羰基]-d-苯丙氨酸手性纯度检测方法，主要解决等度方法无法达到基线级分离等技术问题。

2、本发明采用了以下技术方案：4-[(氨基羰基)氨基]-n-[芴甲氧羰基]-d-苯丙氨酸手性纯度检测方法，包括以下步骤：

3、步骤一：准备测量的试剂，测量的试剂包括正乙腈-色谱纯，蒸馏水-屈臣氏、三氟乙酸-色谱级；

4、步骤二：称取产品试样置于反应容器中，加入乙腈和水，室温条件下采用超声波溶解，最后试样用聚丙烯有机滤膜过滤后进行hplc分析；

5、 步骤三，进行高效液相色谱测定：色谱测定的过程为：色谱条件为样品室温度为常温，自动进样器，色谱柱为：大赛璐的手性色谱柱，柱温：40 ℃，流速：0.6ml/min，流动相a为质量百分浓度0.1%tfa水溶液；流动相b相为质量百分浓度0.1%tfa/乙腈溶液，采用梯度洗脱程序。

6、所述的梯度洗脱程序为：0～30min，v(b)从20%到30%所用时间为15min，v(b)30%保持5min，v(b)再从30%到40%所用时间为10min，30.1～40 min，v(b)从20% 平衡系统。

7、所述的液相色谱测定时采用的色谱仪为安捷伦 1260色谱仪，该色谱仪采用紫外检测器。

8、本发明具有以下有益效果：本发明测定4-[(氨基羰基)氨基]-n-[芴甲氧羰基]-d-苯丙氨酸手性纯度，该方法可靠、准确，稳定性好，手性化合物峰对称度好；本发明主要利用梯度洗脱方式达到基线级分离同分异构体，在低流速状态下利用梯度洗脱方法，即控制了手性色谱柱的柱压，又使流动相的pka值变化从而达到同分异构体的基线分离效果。同时利用大赛璐反相手性柱chiralpakr oj-rh多糖衍生物反相涂敷型手性色谱柱，硅胶表面涂敷纤维素-三（4-甲基苯甲酸酯），适合分析水溶性样品等特性，同时利用流动相的ph值，更好的匹配pka来实现基线分离，为4-[(氨基羰基)氨基]-n-[芴甲氧羰基]-d-苯丙氨酸手性纯度检测提供了依据。

技术特征：

1.4-[(氨基羰基)氨基]-n-[芴甲氧羰基]-d-苯丙氨酸手性纯度检测方法；其特征是：包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的 4-[(氨基羰基)氨基]-n-[芴甲氧羰基]-d-苯丙氨酸手性纯度检测方法，其特征是：所述的液相色谱测定时采用的色谱仪为agilent 1260 液相色谱仪，该色谱仪采用二极管列阵检测器。

3. 根据权利要求1所述的 4-[(氨基羰基)氨基]-n-[芴甲氧羰基]-d-苯丙氨酸手性纯度检测方法，其特征是：所述大赛璐手性色谱柱为 chiralpakr oj-rh，色谱柱尺寸为4.6mm×150mm, 5.0μm。

4. 根据权利要求1所述的 4-[(氨基羰基)氨基]-n-[芴甲氧羰基]-d-苯丙氨酸手性纯度检测方法，其特征是：所述的梯度洗脱程序为：0～30min，v(b)从20%到30%所用时间为15min，v(b)30%保持5min，v(b)再从30%到40%所用时间为10min，30.1～40 min，v(b)从20%平衡系统。

技术总结
本发明公开了4‑[(氨基羰基)氨基]‑N‑[芴甲氧羰基]‑D‑苯丙氨酸手性纯度检测方法，主要解决等度方法无法达到基线级分离等技术问题。本发明测定方法包括以下步骤：一，测试试剂准备，二，样品制备，三，进行高效液相色谱手性检测，主要利用液相色谱仪‑二极管列阵检测器（DAD）高分辨率，利用二步梯度及大赛璐手性柱来检测、分离同分异构体，本发明实现了待测样品不受干扰的同步检测，为4‑[(氨基羰基)氨基]‑N‑[芴甲氧羰基]‑D‑苯丙氨酸手性检测提供了可靠便捷的检测手段。

技术研发人员：徐红岩,夏伟冬,虞伟,李省
受保护的技术使用者：上海吉奉生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/19