一种肝细胞癌鉴别诊断和分化程度检测方法

本发明涉及一种疾病检测，特别是涉及一种肝细胞癌鉴别诊断和分化程度检测方法，属于肝细胞癌检测。

背景技术：

1、肝细胞癌是临床常见的恶性肿瘤，也是重要的致死肿瘤之一。

2、目前临床肝细胞癌的主要血清学诊断标志物是甲胎蛋白，依据中国临床肿瘤学会发布的《原发性肝癌诊疗指南2020》，肝癌诊断标准中血清afp应大于等于400纳克每毫升(ng/ml)，但血清afp在胃癌、胰腺癌等其他肿瘤中也可能会升高，而且有约30％左右的肝癌为afp阴性。

3、afp在正常人血清中含量小于20ng/ml。

4、另外肝细胞癌的分化程度不同，相应的临床治疗也会有所不同，目前没有血液标志物用于临床判断肝细胞癌的分化程度。

5、为此设计一种肝细胞癌鉴别诊断和分化程度检测方法来解决上述问题。

技术实现思路

1、本发明的主要目的是为了提供一种肝细胞癌鉴别诊断和分化程度检测方法，可以用于制备试剂或试剂盒产品，通过免疫相关方法检测患者血清akr1b10的表达水平，而作为肝细胞癌尤其afp阴性肝细胞癌临床诊断、鉴别诊断和肝细胞癌分化程度检测的试剂盒。

2、基于检测结果，高水平akr1b10提示高分化肝细胞癌，可以简易快速对肝细胞癌的分化程度做出一定判断，有利于临床制定诊疗决策。

3、基于检测结果，可以与afp检测结果相结合，进一步提高临床肝细胞癌血液学鉴别诊断的敏感度和特异度。

4、本发明的目的可以通过采用如下技术方案达到：

5、一种肝细胞癌鉴别诊断和分化程度检测方法，预处理

6、使用血清分离管收集5ml全血标本，在室温下放置40min；

7、然1500xg于4℃离心20min，收取上清待检测；

8、afp检测

9、选取上清液以临床采用的化学发光法检测afp；

10、以akr1b10检测

11、步骤1：预先取出肝细胞癌akr1b10诊断试剂盒，平衡至室温；

12、步骤2：铝箔袋平衡至室温60min后，取出所需板条，剩余板条用自封袋密封，放回4℃；

13、步骤3：设置空白孔，标准品孔和样本孔，空白孔加样本稀释液50μl，标准品孔各加不同浓度的标准品50μl，样本孔加待测样本50μl；

14、步骤4：空白孔、标准品孔和样本孔中每孔加入可检测信号分子标记的检测抗体100μl，用封板膜封住反应孔，37℃恒温箱孵育60min；

15、步骤5：弃去液体，在吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液(350μl)，静置1min，甩去洗涤液，在吸水纸上拍干，反复洗板5次；

16、步骤6：每孔加入底物a、b各50μl，37℃避光孵育15min；

17、步骤7：每孔加入终止液50μl，15min内，酶标仪上在450nm波长处测定各孔的od值；

18、步骤8：在excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应od值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按照曲线方程计算各样本浓度值；

19、建立曲线

20、同时将肝细胞癌akr1b10诊断试剂的检测结果与afp检测结果联合使用，并依据两者建立roc曲线，并建立阳性标准。

21、优选的，可检测信号分子为辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、β-d-半乳糖苷酶、脲酶、钌复合物、过氧化氢酶或葡萄糖淀粉酶中的任意一种。

22、优选的，底物为显色底物或发光底物；

23、其中显色底物为四甲基联苯胺或邻苯二胺任意一种；

24、其中发光底物为吖啶酯、鲁米诺或三丙胺自由基任意一种。

25、优选的，在预处理中将获取的上清液于-80℃保存箱内进行保存。

26、优选的，肝细胞癌akr1b10诊断试剂检测应用于鉴别诊断肝细胞癌与其他相关肿瘤以及应用于临床判断肝细胞癌分化程度。

27、优选的，肝细胞癌akr1b10诊断试剂包括单克隆抗体或多克隆抗体、包被抗体的固相载体以及能结合可检测信号分子的检测抗体。

28、本发明的有益技术效果：

29、本发明提供的一种肝细胞癌鉴别诊断和分化程度检测方法，可以用于制备试剂或试剂盒产品，通过免疫相关方法检测患者血清akr1b10的表达水平，而作为肝细胞癌尤其afp阴性肝细胞癌临床诊断、鉴别诊断和肝细胞癌分化程度检测的试剂盒。

30、基于检测结果，高水平akr1b10提示高分化肝细胞癌，可以简易快速对肝细胞癌的分化程度做出一定判断，有利于临床制定诊疗决策。

31、基于检测结果，可以与afp检测结果相结合，进一步提高临床肝细胞癌血液学鉴别诊断的敏感度和特异度。

技术特征：

1.一种肝细胞癌鉴别诊断和分化程度检测方法，其特征在于：包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种肝细胞癌鉴别诊断和分化程度检测方法，其特征在于：可检测信号分子为辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、β-d-半乳糖苷酶、脲酶、钌复合物、过氧化氢酶或葡萄糖淀粉酶中的任意一种。

3.根据权利要求2所述的一种肝细胞癌鉴别诊断和分化程度检测方法，其特征在于：底物为显色底物或发光底物；

4.根据权利要求3所述的一种肝细胞癌鉴别诊断和分化程度检测方法，其特征在于：在预处理中将获取的上清液于-80℃保存箱内进行保存。

5.根据权利要求4所述的一种肝细胞癌鉴别诊断和分化程度检测方法，其特征在于：肝细胞癌akr1b10诊断试剂检测应用于鉴别诊断肝细胞癌与其他相关肿瘤以及应用于临床判断肝细胞癌分化程度。

6.根据权利要求5所述的一种肝细胞癌鉴别诊断和分化程度检测方法，其特征在于：肝细胞癌akr1b10诊断试剂包括单克隆抗体或多克隆抗体、包被抗体的固相载体以及能结合可检测信号分子的检测抗体。

7.根据权利要求6所述的一种肝细胞癌鉴别诊断和分化程度检测方法，其特征在于：在步骤一前采用的样品选取包括68例肝细胞癌患者和63例健康人。

8.根据权利要求7所述的一种肝细胞癌鉴别诊断和分化程度检测方法，其特征在于：在步骤一前采用的样品选取包括364例肝细胞癌患者、319例非肝细胞癌肿瘤患者以及735例健康人；

9.根据权利要求1所述的一种肝细胞癌鉴别诊断和分化程度检测方法，其特征在于：在预处理中使用血清分离管收集5ml全血标本，在室温下放置40min；

10.根据权利要求1所述的一种肝细胞癌鉴别诊断和分化程度检测方法，其特征在于：在预处理中使用血清分离管收集5ml全血标本，在室温下放置50min；

技术总结
本发明公开了一种肝细胞癌鉴别诊断和分化程度检测方法，属于肝细胞癌检测技术领域，使用血清分离管收集5mL全血标本，在室温下放置40min，然1500xg于4℃离心20min，收取上清待检测，高水平AKR1B10提示高分化肝细胞癌，可以简易快速对肝细胞癌的分化程度做出一定判断，有利于临床制定诊疗决策，可以与AFP检测结果相结合，进一步提高临床肝细胞癌血液学鉴别诊断的敏感度和特异度。

技术研发人员：姬峻芳,蔡秀军,严嘉宁
受保护的技术使用者：浙江大学
技术研发日：
技术公布日：2024/2/29