可溶性生长刺激表达基因2蛋白测定试剂盒及制备方法与流程

本发明涉及st2检测，尤其涉及一种可溶性生长刺激表达基因2蛋白测定试剂盒及制备方法。

背景技术：

1、生长刺激表达基因2蛋白(st2)是白细胞介素-1受体超家族的成员之一，包括四种亚型，即可溶性st2(sst2)、跨模型st2(st2l)、多变型st2(st2v)及跨膜多变型st2(st2lv)，其中sst2、st2l是心力衰竭的重要研究对象。可溶性st2是心脏疾病或损伤时所分泌的物质，如果其在血液中浓度较低时，其il-33会结合，可达到心脏保护效果维持心脏功能。相反，血液中浓度较高时，st2会竞争性地与il-33结合，il-33的心脏防御信号传达体系无法运行，从而诱发心肌细胞的炎症反应、细胞自然死、纤维化、心肌功能下降等，也会加快心力衰竭。st2检验与目前心力衰竭标志物(bnp,nt-probnp)不同，可提供预后信息。不受年龄、体质指数、肾功能异常等的影响可用于连续检测，为心衰患者提供独立的预后信息。

2、目前临床检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sst2)的方法主要有化学发光法、酶联免疫吸附实验法(elisa)、荧光免疫层析法方法学试剂，酶联免疫吸附实验法(elisa)需要一天才可以出结果，化学发光需要40分钟左右，荧光免疫层析法方法学试剂需要15分钟左右，对于一个心梗患者来说一分钟都可以造成不可挽回的后果，因此st2检测结果时间较长，不便于临床使用。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种可溶性生长刺激表达基因2蛋白测定试剂盒及制备方法，解决现有技术中st2检测结果时间较长，不便于临床使用的问题。

2、为实现上述目的，本发明提供了一种可溶性生长刺激表达基因2蛋白测定试剂盒，包括15g/l的nacl、10g/l的peg35000、1g/l的proclin-300、5g/l的海藻糖、ph7.8的50mmol/l的缓冲液；

3、st2抗体、1g/l的proclin-300、5g/l海藻糖、胶乳微球、50mmol/l的缓冲液、10mg/ml的n-羟基琥珀酰亚胺nhs、10mg/ml的edc溶液和封闭剂溶液。

4、其中，所述缓冲液的ph值为7.8，所述edc为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺edc溶液。

5、其中，所述胶乳微球为0.1％w/v的带有羧基的聚苯乙烯微球。

6、其中，所述缓冲液为pb缓冲液、mes缓冲液或hepes缓冲液中的一种。

7、本发明还提供一种可溶性生长刺激表达基因2蛋白测定试剂盒制备方法，用于制备上述所述的可溶性生长刺激表达基因2蛋白测定试剂盒，包括如下步骤：

8、将50mmol/l的pb缓冲液的ph值调至7.8，然后依次加入15g/l的nacl、10g/l的peg35000、1g/l的proclin-300和5g/l的海藻糖，均匀搅拌，得到试剂r1；

9、取50mmol/l的mes缓冲液，将胶乳微球加入到缓冲液中，使其胶乳微球中浓度为1％；

10、分别加入适量的10mg/ml的n-羟基琥珀酰亚胺nhs和10mg/ml的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺edc溶液重悬分散，然后进行活化20分钟；

11、进行离心后加入50mmol/l的hepes缓冲液重悬分散；

12、加入st2抗体，再进行孵育2小时，与胶乳微球进行偶联，形成抗体胶乳复合物；

13、加入的封闭剂溶液在37℃条件下封闭，再离心20分钟，去除上清，所得沉淀加入含50mmol/l的pb缓冲液重悬分散即得鼠抗人可溶性生长刺激表达基因2蛋白抗体包被胶乳微球，得到试剂r2；

14、移取样本加入到装有试剂r1的反应杯中，轻摇混匀10s，再加入试剂r2混匀5s，将反应杯放入型号为hp-083/4-ii的特定蛋白分析仪的测试孔内，仪器自动测试并5min后显示结果。

15、其中，在分别加入适量的10mg/ml的n-羟基琥珀酰亚胺nhs和10mg/ml的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺edc溶液重悬分散，然后进行活化20分钟的步骤中：

16、活化温度为37℃。

17、其中，在加入st2抗体，再进行孵育2小时，与胶乳微球进行偶联，形成抗体胶乳复合物的步骤中：

18、孵育温度为37℃。

19、其中，在加入的封闭剂溶液在37℃条件下封闭，再离心20分钟，去除上清，所得沉淀加入含50mmol/l的pb缓冲液重悬分散即得鼠抗人可溶性生长刺激表达基因2蛋白抗体包被胶乳微球的步骤中：

20、封闭时间为1小时，离心转速为16000rpm/min。

21、本发明的一种可溶性生长刺激表达基因2蛋白测定试剂盒及制备方法，将50mmol/l的pb缓冲液的ph值调至7.8，然后依次加入15g/l的nacl、10g/l的peg35000、1g/l的proclin-300和5g/l的海藻糖，均匀搅拌，得到试剂r1；取50mmol/l的mes缓冲液，将胶乳微球加入到缓冲液中，使其胶乳微球中浓度为1％；分别加入适量的10mg/ml的n-羟基琥珀酰亚胺nhs和10mg/ml的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺edc溶液重悬分散，然后进行活化20分钟；进行离心后加入50mmol/l的hepes缓冲液重悬分散；加入st2抗体，再进行孵育2小时，与胶乳微球进行偶联，形成抗体胶乳复合物；加入的封闭剂溶液在37℃条件下封闭，再离心20分钟，去除上清，所得沉淀加入含50mmol/l的pb缓冲液重悬分散即得鼠抗人可溶性生长刺激表达基因2蛋白抗体包被胶乳微球，得到试剂r2；移取样本加入到装有试剂r1的反应杯中，轻摇混匀10s，再加入试剂r2混匀5s，将反应杯放入型号为hp-083/4-ii的特定蛋白分析仪的测试孔内，仪器自动测试并5min后显示结果，由此从加样到出结果只需要5分钟，大大缩短了st2测试时间，为心脏病患者赢得宝贵的时间，避免造成不可以挽救的结果。

技术特征：

1.一种可溶性生长刺激表达基因2蛋白测定试剂盒，其特征在于，

2.如权利要求1所述的可溶性生长刺激表达基因2蛋白测定试剂盒，其特征在于，

3.如权利要求2所述的可溶性生长刺激表达基因2蛋白测定试剂盒，其特征在于，

4.如权利要求3所述的可溶性生长刺激表达基因2蛋白测定试剂盒，其特征在于，

5.一种可溶性生长刺激表达基因2蛋白测定试剂盒制备方法，用于制备如权利要求4所述的可溶性生长刺激表达基因2蛋白测定试剂盒，其特征在于，包括如下步骤：

6.如权利要求5所述的可溶性生长刺激表达基因2蛋白测定试剂盒制备方法，其特征在于，

7.如权利要求6所述的可溶性生长刺激表达基因2蛋白测定试剂盒制备方法，其特征在于，

8.如权利要求7所述的可溶性生长刺激表达基因2蛋白测定试剂盒制备方法，其特征在于，

技术总结
本发明涉及ST2检测技术领域，具体涉及一种可溶性生长刺激表达基因2蛋白测定试剂盒及制备方法，将50mmol/L的PB缓冲液的ph值调至7.8，然后依次加入15g/L的Nacl、10g/L的PEG35000、1g/L的Proclin‑300和5g/L的海藻糖，均匀搅拌，得到试剂R1；加入的封闭剂溶液在37℃条件下封闭，再离心20分钟，去除上清，所得沉淀加入含50mmol/L的PB缓冲液重悬分散即得鼠抗人可溶性生长刺激表达基因2蛋白抗体包被胶乳微球，得到试剂R2；移取样本加入到装有试剂R1的反应杯中，轻摇混匀10S，再加入试剂R2混匀5S，将反应杯放入特定蛋白分析仪的测试孔内，仪器自动测试并5min后显示结果，由此从加样到出结果只需要5分钟，大大缩短了ST2测试时间，为心脏病患者赢得宝贵的时间，避免造成不可以挽救的结果。

技术研发人员：郝书顺,马晶
受保护的技术使用者：禾柏（南京）医学科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/31