兴安独活中香豆素类化合物的快速定性定量检测方法

本发明涉及一种兴安独活中多种香豆素类化合物的检测方法。

背景技术：

1、兴安独活(heracleum dissectum ledeb.)为伞形科、独活属多年生草本植物，俗称老山芹。其幼嫩茎叶可食用，是深受国内外尤其东北大兴安岭地区人们喜食的山野菜；并且兴安独活作为一种民间草药，可用于降“三高”、祛风除湿和止痛等，作为东北林区特色食药用植物资源具有重要开发利用价值。香豆素类化合物是兴安独活中重要的生物活性物质，适量食用或药用具有一定保健功能，但过量食用或药用存在中毒风险。对兴安独活食药用产品的品质检测及食药用安全性分析、或开展兴安独活香豆素类化合物的相关研究工作，都需要对兴安独活中香豆素类化合物进行定性或定量检测分析。

2、兴安独活中含有7-羟基香豆素、东莨菪内脂、补骨脂素、花椒毒素、佛手柑内脂、欧前胡素、异补骨脂素、异茴芹内脂、香豆素等多种香豆素类化合物，并且不同植物器官和发育时期兴安独活中香豆素类化合物的种类、含量存在较大差异。目前国内外缺乏能同时对兴安独活中这些香豆素类化合物进行快速定性、定量的检测方法，影响了兴安独活及其加工产品中香豆素类化合物的分析检测。

技术实现思路

1、本发明的目的是为了现有香豆素类化合物检测方法难于同时定性和定量检测兴安独活中香豆素类化合物的技术问题，提供了一种兴安独活中香豆素类化合物的快速定性定量检测方法。

2、兴安独活中香豆素类化合物的快速定性定量检测方法如下：

3、一、兴安独活中香豆素类化合物的提取：

4、将干燥粉碎或新鲜破碎后的兴安独活样品用体积分数为50％～100％的甲醇水溶液提取，兴安独活样品与甲醇水溶液的比例为1g:(15～25)ml，在28℃～38℃震荡或超声提取20～40min，以8500～11000rpm的离心速度离心，收集上清液，离心后沉淀与甲醇水溶液按照1g:(15～25)ml的比例，在28℃～38℃震荡或超声提取20～40min，以8500～11000rpm的离心速度离心并收集上清液，采用震荡或超声提取2～4次，合并上清液，过滤上清液并离心抽真空浓缩成固体，得到提取物；

5、二、兴安独活中香豆素类化合物的纯化：

6、分别用1～3倍柱体积的甲醇和去离子水处理hc-c18 spe小柱，hc-c18 spe小柱干燥后备用；

7、将步骤一得到的提取物溶解于体积分数为50％～100％的甲醇水溶液，得到提取物溶液，取提取物溶液过hc-c18 spe柱，提取物溶液中香豆素类化合物总量不超过纯化柱填料量5％，过柱10～15min后用体积分数80％的甲醇水溶液洗脱hc-c18 spe柱，并收集洗脱液，将洗脱液真空离心浓缩，再用体积分数50％～100％甲醇溶液溶解，得到兴安独活香豆素类化合物提取物溶液；

8、三、兴安独活中香豆素类化合物的检测：

9、利用配备光电二级阵列管作为液相检测器的高效液相系统进行高效液相色谱和紫外光谱检测，色谱柱为以十八烷基键合硅胶为填充剂的c18色谱柱，样品进样量为10～20μl，流动相a为甲醇，流动相b为水；

10、流动相梯度洗脱程序:

11、0min，40％～60％a；5min，50～70％a；25min，70～90％a；30min，80～100％a；流速为0.8～1ml/min，色谱柱温度为20～25℃，压力为100～180bar，定量检测波长为250～320nm；紫外光谱检测波长为210～400nm；洗脱过程中的任意时刻流动相a与流动相b的体积百分数之和为100％；流动相流速为：0.8～1.2ml/min；

12、对不同浓度的7-羟基香豆素、东莨菪内脂、补骨脂素、花椒毒素、佛手柑内脂、欧前胡素、异补骨脂素、异茴芹内脂、香豆素标准品溶液和兴安独活香豆素类化合物提取物溶液进行检测分析；

13、四、检测数据分析与计算：

14、(1)兴安独活中香豆素类化合物的定性分析

15、通过标准品高效液相色谱保留时间和紫外光谱图确定兴安独活样品中香豆素类化合物的种类；

16、(2)兴安独活样品中香豆素类化合物的定量计算

17、测定各种标准品的保留时间及标准品不同浓度对应的峰面积，并分别绘制各标准品浓度与峰面积之间的标准曲线、测定样品中不同保留时间香豆素类化合物的峰面积，根据标准曲线计算样品浓度，根据样品浓度计算兴安独活样品中香豆素类化合物的含量，完成定量分析；

18、所述香豆素类化合物为7-羟基香豆素、东莨菪内脂、补骨脂素、花椒毒素、佛手柑内脂、欧前胡素、异补骨脂素、异茴芹内脂或香豆素。

19、步骤一所述超声提取的超声频率为30khz～50khz。

20、步骤三中所述甲醇为光谱纯。

21、步骤三中所述以十八烷基键合硅胶为填充剂的c18色谱柱填料为hypersil bdsc18，尺寸为4.6mm×250mm。

22、本方法可在12min内完成兴安独活中9种香豆素类化合物的定性、定量检测分析，为兴安独活中多种香豆素类化合物的检测分析提供了有效方法。

23、本发明解决了现有方法难于同时定性和定量检测兴安独活中7-羟基香豆素、东莨菪内脂、补骨脂素、花椒毒素、佛手柑内脂、欧前胡素、异补骨脂素、异茴芹内脂、香豆素等多种香豆素类化合物的问题。本
技术实现要素：
包括兴安独活中香豆素类化合物的提取、纯化、色谱及光谱检测以及数据分析与计算。该方法对检测设备要求较低，易于实现和操作、并且用时短(小于12min)、检测线性范围宽(0.122mg/l～500mg/l)，灵敏度较高(检出限小于0.17mg/l、定量限小于0.2mg/l)，重现性好(保留时间日内和日间相对标椎偏差小于0.004％，峰面积的日内和日间相对标椎偏差小于0.026％)、准确性较高(加标回收率均值97％～125％，加标回收率相对标椎偏差小于4.6％)。

技术特征：

1.兴安独活中香豆素类化合物的快速定性定量检测方法，其特征在于所述兴安独活中香豆素类化合物的快速定性定量检测方法如下：

2.根据权利要求1所述兴安独活中香豆素类化合物的快速定性定量检测方法，其特征在于步骤一所述超声提取的超声频率为30khz～50khz。

3.根据权利要求1所述兴安独活中香豆素类化合物的快速定性定量检测方法，其特征在于步骤三中所述甲醇为光谱纯。

4.根据权利要求1所述兴安独活中香豆素类化合物的快速定性定量检测方法，其特征在于步骤三中所述的定量检测波长为254nm。

5.根据权利要求1所述兴安独活中香豆素类化合物的快速定性定量检测方法，其特征在于步骤三中所述的定量检测波长为280nm。

6.根据权利要求1所述兴安独活中香豆素类化合物的快速定性定量检测方法，其特征在于步骤三中所述的定量检测波长为320nm。

7.根据权利要求1所述兴安独活中香豆素类化合物的快速定性定量检测方法，其特征在于步骤三中所述以十八烷基键合硅胶为填充剂的c18色谱柱填料为hypersil bds c18，尺寸为4.6mm×250mm。

技术总结
兴安独活中香豆素类化合物的快速定性定量检测方法，本发明涉及兴安独活中香豆素类化合物的检测方法。本发明是要解决现有香豆素类化合物检测方法难于同时定性和定量检测兴安独活中香豆素类化合物的问题。本方法：一、兴安独活中香豆素类化合物的提取；二、兴安独活中香豆素类化合物的纯化；三、兴安独活中香豆素类化合物的检测；四、检测数据分析与计算，完成定量分析。本发明的方法可在12分钟内完成兴安独活中香豆素类化合物检测，具有高效、灵敏、准确对设备要求较低的特点，可用于兴安独活食品或药品检测领域。本发明属于兴安独活中香豆素类化合物定性定量检测领域。

技术研发人员：范丽莉,孙海霞,孙阎,潘妍,庄悦
受保护的技术使用者：中国科学院东北地理与农业生态研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/2/1