检测马凡综合征的引物、基因突变体、突变体蛋白、试剂及应用的制作方法

本发明涉及医学诊断，尤其涉及一种检测马凡综合征的引物、基因突变体、突变体蛋白、试剂及应用。

背景技术：

1、marfan综合征(mim 154700)，又称马凡综合征(marfan′s syndrome，mfs)，是一种常染色体显性遗传病，发病率为1/5000，发病无性别倾向。30％为散发病例，外显率高，表现度差异大。临床上病变范围广泛，包括心血管、骨骼、眼睛、皮肤、肺脏、硬脊膜等器官。mfs是一种常染色体显性遗传性结缔组织疾病，主要累及骨骼、眼和心血管三大系统，主要临床表现包括蜘蛛脚样指(趾)、胸壁畸形(漏斗胸或鸡胸)、脊柱侧凸、晶状体异位、高度近视、主动脉进行性扩张导致主动脉关闭不全及主动脉夹层，二尖瓣脱垂等。其中主动脉夹层和或破裂是mfs患者最严重的并发症，常导致青壮年mfs患者死亡。mfs主要的致病原因是编码细胞外基质蛋白原纤维蛋白-1(fbn1)的基因发生突变引起。1991年，dietz等首先提出fbn1基因突变是mfs的致病原因。1996年，ghent诊断标准把fbn1基因突变作为mfs诊断的主要指标。2010年新修订的ghent诊断标准强调了fbn1突变作为mfs诊断指标的重要性。

2、marfan综合征致病基因fbn1(mim 134797)定位于染色体15q21.1，基因全长23.7kb，包含66个外显子和65个内含子，编码2871个氨基酸组成的分子量为320kda的fbn1蛋白(fbn1)。fbn1蛋白是由平滑肌细胞和成纤维细胞合成的一种糖蛋白，含有三种富含半胱氨酸的重复基序，分别为类表皮生长因子(epidermal growth factor，egf)基序、潜在的转化生长因子β1结合蛋白(latent transformation growth factor-β1binding protein，ltbp)基序、egf和ltbp基序融合而成的杂合基序。fbn1中egf基序总共有47个，其中43个含有钙结合共有序列，可与钙离子结合，被称为钙结合表皮生长因子基序(calcium bindingepidermal growth factor，cbegf)。fbn1蛋白含有7个类ltbp基序。以上这三种基序在维持fbn1蛋白结构与功能方面具有重要作用。fbn1基因突变将导致富含弹性纤维的组织器官如主动脉、晶状体悬韧带等出现病变而致病。至今，已报道数百多种fbn1突变，分布于整个fbn1基因的各外显子，没有明显的突变热点。

3、基因突变是导致marfan综合征发生发展的重要遗传基础，基因诊断是确诊marfan综合征的金标准。临床上需要针对不同突变建立相应的检测技术并用于明确病因和疾病诊断，研发检测方法，确定突变位点，助力marfan综合征基因突变的筛查和诊断，并为其药物筛选、药效评价及靶向治疗，具有重要意义。

技术实现思路

1、本发明的主要目的是提供一种检测马凡综合征的引物、基因突变体、突变体蛋白、试剂及应用，以解决马凡综合征的筛查和诊断的技术问题。

2、为实现上述目的，本发明提供一种fbn1基因突变体，fbn1基因突变体相较于野生型fbn1基因，在野生型fbn1基因的第一位点和/或第二位点发生突变。

3、其中，第一位点为在野生型fbn1基因的第42号外显子紧邻的第41号内含子中，倒数第2位碱基从a突变为g，第二位点为野生型fbn1基因的第13号外显子的第1546位碱基从c突变为t。

4、本发明还提供一种fbn1突变体蛋白，fbn1突变体蛋白相较于野生型fbn1基因编码的蛋白，第516位氨基酸由精氨酸突变为终止密码子。

5、本发明还提供一种上述的fbn1基因突变体或上述的fbn1突变体蛋白作为检测靶点在制备马凡综合征检测试剂和/或制备马凡综合征检测试剂盒中的应用。

6、本发明还提供一种检测马凡综合征的扩增引物，扩增引物包括第一扩增引物和/或第二扩增引物。

7、第一扩增引物包括上游引物fbn1-1f和下游引物fbn1-1r。上游引物fbn1-1f包括如seq id no.1所示的核苷酸序列，下游引物fbn1-1r包括如seq id no.2所示的核苷酸序列。

8、第二扩增引物包括上游引物fbn1-2f和下游引物fbn1-2r。上游引物fbn1-2f包括如seq id no.3所示的核苷酸序列，下游引物fbn1-2r包括如seq id no.4所示的核苷酸序列。

9、本发明还提供一种检测马凡综合征的测序引物，其特征在于，测序引物包括第一测序引物和/或第二测序引物。

10、第一测序引物包括上游引物fbn1-seq1f和下游引物fbn1-seq1r。fbn1-seq1f包括如seq id no.5所示的核苷酸序列。fbn1-seq1r包括如seq id no.6所示的核苷酸序列。

11、第二测序引物包括上游引物fbn1-seq2f和下游引物fbn1-seq2r。fbn1-seq2f包括如seq id no.7所示的核苷酸序列。fbn1-seq2r包括如seq id no.8所示的核苷酸序列。

12、本发明还提供一种检测马凡综合征的引物组合，包括上述的扩增引物和/或如上述的测序引物。

13、本发明还提供一种上述的引物组合在制备马凡综合征检测试剂中的应用。

14、根据本申请的实施方式，马凡综合征的检测靶点包括fbn1基因突变体。fbn1基因突变体相较于野生型fbn1基因，在野生型fbn1基因的第一位点和/或第二位点发生突变。

15、其中，第一位点为在野生型fbn1基因的第42号外显子紧邻的第41号内含子中，倒数第2位碱基从a突变为g，第二位点为野生型fbn1基因的第13号外显子的第1546位碱基从c突变为t。

16、本发明还提供一种马凡综合征检测试剂，马凡综合征检测试剂包括上述的引物组合。

17、本发明还提供一种上述的马凡综合征检测试剂在马凡综合征检测试剂盒及其制备中的应用。

18、本发明的有益效果至少包括：

19、本发明提供了一种fbn1基因突变体，其相较于野生型fbn1基因，所述野生型fbn1基因的第13号外显子的第2393位碱基c缺失。并且，本发明发现该fbn1基因突变体可以导致马凡综合征。

20、本发明提供的fbn1基因突变体丰富了马凡综合征的致病突变谱，通过检测受试者是否携带有上述fbn1基因突变体，能够筛查或诊断马凡综合征的致病基因突变携带者或患者，用于马凡综合征的遗传学诊断，以提供产前诊断、优生优育和治疗干预指导，为马凡综合征患者的治疗提供全新的理论依据，为治疗马凡综合征提供可能的药物靶点。

技术特征：

1.一种fbn1基因突变体，其特征在于，所述fbn1基因突变体相较于野生型fbn1基因，在所述野生型fbn1基因的第一位点和/或第二位点发生突变；

2.一种fbn1突变体蛋白，其特征在于，所述fbn1突变体蛋白相较于野生型fbn1基因编码的蛋白，第516位氨基酸由精氨酸突变为终止密码子。

3.一种如权利要求1所述的fbn1基因突变体或如权利要求2所述的fbn1突变体蛋白作为检测靶点在制备马凡综合征检测试剂和/或制备马凡综合征检测试剂盒中的应用。

4.一种检测马凡综合征的扩增引物，其特征在于，所述扩增引物包括第一扩增引物和/或第二扩增引物；

5.一种检测马凡综合征的测序引物，其特征在于，所述测序引物包括第一测序引物和/或第二测序引物；

6.一种检测马凡综合征的引物组合，其特征在于，包括如权利要求4所述的扩增引物和/或如权利要求5所述的测序引物。

7.一种如权利要求6所述的引物组合在制备马凡综合征检测试剂中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述马凡综合征的检测靶点包括fbn1基因突变体；所述fbn1基因突变体相较于野生型fbn1基因，在所述野生型fbn1基因的第一位点和/或第二位点发生突变；

9.一种马凡综合征检测试剂，其特征在于，所述马凡综合征检测试剂包括如权利要求6所述的引物组合。

10.一种如权利要求9所述的马凡综合征检测试剂在马凡综合征检测试剂盒及其制备中的应用。

技术总结
本发明提供了一种检测马凡综合征的引物、基因突变体、突变体蛋白、试剂及应用；其中，所述FBN1基因突变体相较于野生型FBN1基因，在所述野生型FBN1基因的第一位点和/或第二位点发生突变；其中，所述第一位点为在所述野生型FBN1基因的第42号外显子紧邻的第41号内含子中，倒数第2位碱基从A突变为G，所述第二位点为所述野生型FBN1基因的第13号外显子的第1546位碱基从C突变为T。本发明提供的基因突变体能够用于筛查或诊断马凡综合征的致病基因突变携带者或患者，以提供产前诊断、优生优育和治疗干预指导，为马凡综合征患者的治疗提供全新的理论依据。

技术研发人员：曾桥,范园,何亮波,刘鑫林,罗娇娇
受保护的技术使用者：湖南家辉生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/4/24