一种糖化白蛋白测定试剂盒及测定方法与流程

本发明属于体外诊断，具体涉及一种糖化白蛋白测定试剂盒及测定方法。

背景技术：

1、糖化白蛋白是反映过去2-3周平均血糖水平的一项指标，是血糖控制水平监控的重要参数之一。因此，在需要对血糖进行短期控制评价时，有显著的临床应用价值。

2、目前，通常利用过氧化物酶法进行糖化白蛋白的测定，该方法首先使用蛋白酶分解糖化白蛋白，生成糖化氨基酸；糖化氨基酸在特异性果糖氨基酸氧化酶（faod）的作用下变成葡萄糖醛酮、氨基酸和过氧化氢；在过氧化物酶的作用下，过氧化氢与4aap（4-氨基安替比啉）和toos（n-乙基-n-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐）发生trinder反应，生成红色醌亚胺，测定其吸光度变化，确定样本中糖化白蛋白的浓度。

3、本申请的发明人在研究过程中发现，蛋白酶分解糖化白蛋白的过程中，血液中的白蛋白结合了胆红素或脂肪等各种物质，为了获得能够在果糖氨基酸氧化酶的作用下分解的糖化氨基酸，需要大量的蛋白酶提高反应速率，但加入大量的蛋白酶来提高反应不仅会提高成本，还有可能导致试剂本身中其他酶的失活，例如：过氧化物酶等；另外，由于大量的蛋白酶可能会混存在其他测试试剂中，导致其他试剂中的酶或抗体失活，从而影响其他试剂测值的准确性。

技术实现思路

1、本发明提供一种糖化白蛋白测定试剂盒及测定方法，以解决现有技术中由于加入大量蛋白酶导致的成本提高、测值不准确的问题。

2、本申请的第一方面，提供一种糖化白蛋白测定试剂盒，包括：r1试剂和r2试剂，r1试剂和r2试剂的体积比为4:1；所述r1试剂包括：第一缓冲液50～200mmol/l；蛋白酶0.01～3000ku/l；4-氨基安替比林0.1～10g/l；表面活性剂1～5g/l；所述r2试剂包括：第二缓冲液50～200mmol/l；果糖氨基酸氧化酶0.1～100ku/l；过氧化物酶0.1～100ku/l；显色剂0.1～10g/l；其中，所述表面活性剂含有至少1个oh基团的亲水侧。

3、可选的，所述表面活性剂含有2个和/或3个oh基团的亲水侧。

4、可选的，所述表面活性剂选自苯酚、苯甲酸、正戊醇、甘油、4,4’-(1,2-乙二氧基)二苯酚、聚山梨醇酯-20、十二烷基硫酸钠、乙二醇、聚氧乙烯基联苯乙烯化苯基醚、聚氧乙烯基衍生物、曲拉通x-100、曲拉通x-305、甜菜碱和二苯酚中的一种或多种。

5、可选的，所述蛋白酶选自金属蛋白酶，丝氨酸蛋白酶、巯基蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶中的一种。

6、可选的，所述显色剂选自邻苯二胺（opd）、n-乙基-n-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐（toos）中的一种。

7、可选的，所述第一缓冲液和所述第二缓冲液均选自tris缓冲液、磷酸盐缓冲液、tricine缓冲液、hepes缓冲液和mes缓冲液中的一种。

8、本申请的第二方面，提供一种糖化白蛋白测定方法，包括：

9、将样本和r1试剂混合均匀，孵育后读取吸光度a1；

10、继续添加r2试剂混合均匀，孵育后读取吸光度a2；

11、根据以下公式计算吸光度变化值△a：△a=a2-a1；

12、其中，r1试剂和r2试剂由权利要求1~6中任一项所述的一种糖化白蛋白测定试剂盒提供。

13、可选的，所述样本可选自血浆和血清中的一种。

14、本申请所用表面活性剂含有至少一个oh基团的亲水侧，该表面活性剂能够与蛋白酶共同作用，促进糖化蛋白酶的分解，从而提高蛋白酶分解糖化白蛋白的效率。本发明可以实现使用少量的蛋白酶也可以将糖化白蛋白分解，节约成本，还可以避免大量蛋白酶带来的试剂稳定性降低，影响其他试剂测值准确性等副作用。

技术特征：

1.一种糖化白蛋白测定试剂盒，其特征在于，包括：r1试剂和r2试剂，r1试剂和r2试剂的体积比为4:1；

2.根据权利要求1所述的一种糖化白蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述表面活性剂含有2个和/或3个oh基团的亲水侧。

3.根据权利要求1所述的一种糖化白蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述表面活性剂选自苯酚、苯甲酸、正戊醇、甘油、4,4’-(1,2-乙二氧基)二苯酚、聚山梨醇酯-20、十二烷基硫酸钠、乙二醇、聚氧乙烯基联苯乙烯化苯基醚、聚氧乙烯基衍生物、曲拉通x-100、曲拉通x-305、甜菜碱和二苯酚中的一种或多种。

4.根据权利要求1所述的一种糖化白蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述蛋白酶选自金属蛋白酶、丝氨酸蛋白酶、巯基蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶中的一种。

5.根据权利要求1所述的一种糖化白蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述显色剂选自邻苯二胺（opd）、n-乙基-n-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐（toos）中的一种。

6.根据权利要求1所述的一种糖化白蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述第一缓冲液和所述第二缓冲液均选自tris缓冲液、磷酸盐缓冲液、tricine缓冲液、hepes缓冲液和mes缓冲液中的一种。

7.一种糖化白蛋白测定方法，其特征在于，包括：

8.根据权利要求7所述的一种糖化白蛋白测定方法，其特征在于，所述样本可选自血浆和血清中的一种。

技术总结
本发明提供一种糖化白蛋白测定试剂盒及测定方法，该糖化白蛋白测定试剂盒包括：R1试剂和R2试剂，R1试剂和R2试剂的体积比为4:1；所述R1试剂包括：第一缓冲液50～200mmol/L；蛋白酶0.01～3000KU/L；4‑氨基安替比林0.1～10g/L；表面活性剂1～5g/L；所述R2试剂包括：第二缓冲液50～200mmol/L；果糖氨基酸氧化酶0.1～100KU/L；过氧化物酶0.1～100KU/L；显色剂0.1～10g/L；其中，所述表面活性剂含有至少1个OH基团的亲水侧。本申请所用表面活性剂含有至少一个OH基团的亲水侧，该表面活性剂能够与蛋白酶共同作用，促进糖化蛋白酶的分解，从而提高蛋白酶分解糖化白蛋白的效率。本发明可以实现使用少量的蛋白酶也可以将糖化白蛋白分解，还可以避免大量蛋白酶带来的试剂稳定性降低等副作用。

技术研发人员：庞喆,刘玲,刘艳艳,陈凯丽,周健华
受保护的技术使用者：吉林基蛋生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/11