一种水稻叶片香味表型的环保高效检测方法与流程

本发明涉及检测，具体涉及一种水稻叶片香味表型的环保高效检测方法。

背景技术：

1、随着我国经济发展，人民生活水平进步，香稻品种越来越受到市场欢迎。高产、优质的香稻品种培育是保障我国粮食安全，提升人民生活水平的重要途径，而高效环保的水稻香味表型检测方法则是培育优良香稻品种的得力工具。

2、香味检测在表型鉴定上一般是通过蒸煮法、加热法、koh碱浸法、烘烤燃烧法等来进行。这些方法主要目的是通过破坏细胞结构将水稻香味物质释放至外界，并挥发至人嗅觉可以感应到的浓度，以方便快速的进行水稻香味的检测工作。然而以上这些方法一般是通过加热法或者碱裂解细胞，成本较高、效率较低，样品破坏比较彻底，同时细胞其他内含有机物在高温下会加速挥发，影响香味检测准确性，检测后的废渣、废液需要处理，同时也不利于其他基因或性状的综合选育。有鉴于此，开发香味表型的环保高效检测方法非常必要。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种水稻叶片香味表型的环保高效检测方法，以有效弥补上述水稻香味表型检测技术短板，并对精准水稻育种技术进行兼容。

2、为实现上述目的，本发明提出以下技术方案：一种水稻叶片香味表型的环保高效检测方法，包括以下步骤：待测水稻群体单株叶片离心管取样→香味基因来源水稻品种及改造水稻品种叶片离心管取样→样品离心管密封冰冻过夜→样品解冻→香味基因来源水稻品种及改造水稻品种叶片开盖确定味道→鉴定待测群体单株叶片味道→分类记载确定单株；具体如下：

3、(1)取待测群体水稻单株叶片并编号；

4、(2)取香味对照亲本(阳性对照)和无香味对照亲本(阴性对照)叶片并编号；

5、(3)将内含样品的离心管放置冰冻；

6、(4)叶片冻透后取出叶片解冻；

7、(5)取阳性对照和阴性对照管分别打开盖后鼻子贴近离心管口闻取味道；

8、(6)根据阳性对照香味取待测群体单株样品离心管分别开盖后闻取味道；

9、(7)根据味道不同将离心管分为香，不香两个群体，统计记载香味单株并结束香味检测。

10、优选地，所取水稻叶片要求为未衰老变黄叶片，取样部位位于叶片中上部叶脉较细的位置，长度为4cm左右，对折两次后放入2ml离心管内。

11、优选地，内含叶片的2ml离心管，编号后需放置在冰柜或冰箱冷冻层(-18℃及以下)中保存过夜，将叶片彻底冻透。

12、优选地，解冻需放置在室温(20℃及以上)自然解冻40分钟以上，不能进行高温加热，防止细胞结构破坏严重，内含挥发物影响香味闻取和后续其他分子标记检测工作。

13、优选地，解冻后由于叶片细胞内水结冰后部分破坏细胞结构，加之2ml离心管空间极小，部分细胞结构破坏后挥发出的香味物质2-乙酰-1-吡咯啉(简称2-ap)嗅觉正常者贴近离心管口即可闻到香味。

14、优选地，先行开盖闻取香味对照和无香味对照的叶片味道然后关盖密封，强化香味嗅觉、锚定香味记忆，再行同样操作鉴定待测群体单株香味，中间遇到不确定情况时可以反复闻取阳性对照香味，一般一人操作即可。

15、与现有技术相比，本发明的有益结果是：

16、(1)本发明的方法不涉及任何药品，对人体无毒。

17、(2)对水稻植株破坏小、环保性好，能够比较完美的与水稻育种各世代苗期单粒阵列育苗取样或者移栽后田间单株取样兼容。

18、(3)相较于加热法、koh法等香味检测，对水稻叶片细胞及细胞核dna破坏不严重，经过普通pcr丙烯酰胺凝胶电泳及kasp高通量基因分型测验，对后续分子标记辅助育种未造成影响，节能环保，无需重复取样。

19、(4)拥有香味阳性对照和无香味阴性对照，无需特殊环境，只要有冰箱或冰柜，普通人无需培训即可快速重复操作。

技术特征：

1.一种水稻叶片香味表型的环保高效检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的水稻叶片香味表型的环保高效检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中，所取水稻叶片要求为未衰老变黄叶片，取样部位位于叶片中上部叶脉较细的位置，长度为4-6cm，对折两次后放入2-4ml离心管内，盖好管盖并进行编号。

3.根据权利要求2所述的水稻叶片香味表型的环保高效检测方法，其特征在于：内含叶片的2ml离心管，编号后需放置在冰柜或冰箱冷冻层中并在不高于-18℃的设定温度下保存过夜，将叶片彻底冻透。

4.根据权利要求1所述的水稻叶片香味表型的环保高效检测方法，其特征在于：所述步骤(2)中，解冻需放置在室温自然解冻40-60min。

5.根据权利要求1所述的水稻叶片香味表型的环保高效检测方法，其特征在于：先行开盖闻取香味对照和无香味对照的叶片味道然后关盖密封，强化香味嗅觉、锚定香味记忆，再行同样操作鉴定待测群体单株香味，中间遇到不确定情况时反复闻取阳性对照香味。

技术总结
本发明公开了一种水稻叶片香味表型的环保高效检测方法，属于检测技术领域，主要包含以下步骤：待测群体叶片取样，香味基因来源阳性对照和无香味基因阴性对照叶片取样，样品冷冻过夜，样品解冻复温，闻取香味，分类记载；本发明的方法对人体无毒，对水稻植株破坏小、无药品环保性好，能够比较完美的与水稻育种各世代苗期单粒阵列育苗取样或者移栽后田间单株取样兼容；同时，相较于加热法、KOH法等香味检测，对水稻叶片细胞及细胞核DNA破坏不严重，经过普通PCR丙烯酰胺凝胶电泳及KASP高通量基因分型测验，对后续分子标记辅助育种未造成影响，节能环保，无需重复取样。

技术研发人员：王思哲,黄嘉欣,熊跃东,乔保建,任代胜,冯智,余重香
受保护的技术使用者：安徽袁粮水稻产业有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/12