一种鉴别铁皮石斛和水草石斛的方法

本发明涉及石斛的快速鉴别，尤其涉及一种鉴别铁皮石斛和水草石斛的方法。

背景技术：

1、铁皮石斛被誉为“中华九大仙草之首”，因其较好的生物保健功效而享誉国内外。由于其活性好，产品供不应求，市场销售价格较贵，随之而来的铁皮石斛造假现象较为普遍，通常是采用价格低廉、保健功能一般的石斛如水草石斛冒充铁皮石斛而进行售卖。一般情况下，铁皮石斛和水草石斛的外观差别较大，但是当干制成石斛枫斗或者粉碎成粉末后，铁皮石斛和水草石斛难以鉴别，虽然从分子生物学以及种属方面可以鉴别，但是所需的分子鉴定方法较为复杂。因此，本领域需要建立一种能够快速有效的鉴别铁皮石斛和水草石斛的方法。

技术实现思路

1、本发明的目的为提供一种鉴别铁皮石斛和水草石斛的方法，以解决现有的分子生物学以及种属鉴别复杂的问题。

2、为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、本发明提供了一种鉴别铁皮石斛和水草石斛的方法，包括如下步骤：

4、1)称取铁皮石斛粉末和水草石斛粉末，分别向其中加入乙腈溶液经混合后过滤，得铁皮石斛上清液和水草石斛上清液；

5、2)将铁皮石斛上清液和水草石斛上清液分别采用lc-ms/ms进行测定，测定时采用schedule-mrm模式，测定的条件设置为：检测的离子对为579.2/271.0，其中母离子对为579.2，子离子对为271.0；去簇电压为-240～-210v；碰撞电压为-55～-30v；离子源温度为350～550℃；

6、3)经检测，未能检测出离子对579.2/271.0的为铁皮石斛，能检测出离子对579.2/271.0的为水草石斛，通过离子对579.2/271.0是否出现可以有效的鉴别铁皮石斛和水草石斛。

7、作为优选，所述乙腈溶液为乙腈的水溶液；所述乙腈溶液中，乙腈和水的体积比为7～9：1～3。

8、作为优选，所述铁皮石斛粉末和乙腈溶液的质量体积比为1～3g：10ml；所述水草石斛粉末和乙腈溶液的质量体积比为1～3g：10ml。

9、作为优选，所述混合包括先进行振荡混合，后进行超声混合，最后再进行振荡混合；振荡混合的时间独立的为3～15min，振荡混合的速率为150～250r/min；超声混合的时间为1～3min，超声混合的功率为20～30khz。

10、作为优选，所述过滤采用超滤膜进行；超滤膜的截留率≥99.1％。

11、作为优选，所述步骤2)中，测定条件的设置为：流动相a为：甲醇；流动相b为：质量分数为0.1～0.2％的氨水的水溶液；梯度洗脱条件为：0～2.5min，3～35％a，2.5～5.5min，35～65％a，5.5～8.5min，65～95％a，8.5～9.8min，95％a；9.8～10min，95～3％a；10～12min，3％a；流速为：180～220μl/min；柱温为：35～45℃；进样量为：1.5～2.5μl。

12、经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明有益效果如下：

13、本发明提供了一种快速有效的鉴别铁皮石斛和水草石斛的方法，无需复杂的前处理过程，仅需通过单一的指标进行判别鉴定。

技术特征：

1.一种鉴别铁皮石斛和水草石斛的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述鉴别铁皮石斛和水草石斛的方法，其特征在于，所述乙腈溶液为乙腈的水溶液；所述乙腈溶液中，乙腈和水的体积比为7～9：1～3。

3.根据权利要求2所述鉴别铁皮石斛和水草石斛的方法，其特征在于，所述铁皮石斛粉末和乙腈溶液的质量体积比为1～3g：10ml；所述水草石斛粉末和乙腈溶液的质量体积比为1～3g：10ml。

4.根据权利要求1～3任一项所述鉴别铁皮石斛和水草石斛的方法，其特征在于，所述混合包括先进行振荡混合，后进行超声混合，最后再进行振荡混合；振荡混合的时间独立的为3～15min，振荡混合的速度为150～250r/min；超声混合的时间为1～3min，超声混合的功率为20～30khz。

5.根据权利要求4所述鉴别铁皮石斛和水草石斛的方法，其特征在于，所述过滤采用超滤膜进行；超滤膜的截留率≥99.1％。

6.根据权利要求5所述鉴别铁皮石斛和水草石斛的方法，其特征在于，所述步骤2)中，测定条件的设置为：流动相a为：甲醇；流动相b为：质量分数为0.1～0.2％的氨水的水溶液；梯度洗脱条件为：0～2.5min，3～35％a，2.5～5.5min，35～65％a，5.5～8.5min，65～95％a，8.5～9.8min，95％a；9.8～10min，95～3％a；10～12min，3％a；流速为：180～220μl/min；柱温为：35～45℃；进样量为：1.5～2.5μl。

技术总结
本发明属于石斛的快速鉴别技术领域，本发明公开了一种鉴别铁皮石斛和水草石斛的方法。包括如下步骤：1)称取铁皮石斛粉末和水草石斛粉末，分别向其中加入乙腈溶液经混合后过滤，得铁皮石斛上清液和水草石斛上清液；2)将铁皮石斛上清液和水草石斛上清液分别采用LC‑MS/MS进行测定，测定时采用schedule‑MRM模式，测定的条件设置为：检测的离子对为579.2/271.0，其中母离子对为579.2，子离子对为271.0；3)经检测，未能检测出离子对579.2/271.0的为铁皮石斛，能检测出离子对579.2/271.0的为水草石斛。所述方法简单且无需进行大量的预处理。

技术研发人员：林涛,陈兴连,刘宏程,刘振环,魏茂琼,杜丽娟
受保护的技术使用者：云南省农业科学院质量标准与检测技术研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/3/17