一种基于同位素特征的林下山参和园参鉴定方法与流程

本发明属于化学检测，具体涉及一种基于同位素特征的林下山参和园参鉴定方法。

背景技术：

1、人参(panax ginseng c.a.mey)为多年生草本植物，干燥根和根茎在医药及保健等方面应用广泛。目前，人工栽培的人参分为园参和林下山参两种。在园地里由人工栽培的人参称为“园参”又称“秧参”，生长年限6-7年；播种在山林野生状态下自然生长的称为“林下山参”(国家药典委员会.中华人民共和国药典：2015年版.一部).中国医药科技出版社，2015.)。林下山参生长环境与野生人参类似，具有与野生人参相似的性状特征，其药用价值高，售价是园参的十倍以上。

2、稳定同位素信息是所有生物(包括食品)的一种天然标签，它与生物的生长环境密切相关，并且能够反映生物与当地自然环境的交互，交互过程不直接受人为因素影响。基于此，稳定同位素特征能为食品溯源提供一种科学的、独立的、不可改变的，以及随整个食品链流动的身份信息。

3、目前，《林下山参鉴定及分等质量》db21/t 2932-2018，提出了通过外观观察鉴别林下山参和园参的方法，其缺乏进行定量分析的有效的技术手段；

4、专利申请cn1557968a(野山人参的分子标记及鉴别方法)提出了检测特异性dna片段的方法，不足之处是：检测特异性dna片段所用的设备复杂,操作方法繁难，难以形成技术标准并开展应用；

5、专利cn109696513a(一种利用人参皂苷成分含量及其比例鉴别人参种类及其生长年限的方法)提出了检测样品中三种人参皂苷含量，并计算相互比值的方法，不足之处是：判定方法极其繁杂，判定范围过窄，在日常药品检验等工作中可重复性较低；

6、技术文件(张艳欣,基于lc-ms技术对林下山参鉴别及生长年限判定的研究[d].2019,上海中医药大学)，提出了基于代谢组学技术深度研究林下山参代谢物组分，结合多元统计方法对结果进行分析的方法，不足之处是：代谢组学检测指标检测标靶过多，稳定性较差，依靠聚类和多元统计算法构建的判定方法中，缺少明确的定量判定标准，难以形成技术标准并实施。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明提供了一种基于同位素特征的林下山参和园参鉴定方法，通过检测人参皂苷re中13c/12c分布特征鉴别林下山参与园参，操作简单，鉴别标准清晰准确。

2、为了实现上述目的，本发明的技术方案为：

3、一种基于同位素特征的林下山参和园参鉴定方法，包括如下步骤：

4、s1、称取人参皂苷re标准品用超纯水定容，制备对照品溶液；

5、s2、将新鲜的人参供试品，用甲醇提取，制备供试品溶液；

6、s3、用液相色谱串联质谱检测方法分析对照品溶液，用液相色谱串联质谱检测方法分析供试品溶液；

7、s4、数据处理：对比对照品溶液与供试品溶液的检测结果，计算供试品的人参皂苷re中的13c/12c分布特征，其中，13c/12c为荷质比991.55的离子强度(intensity)与荷质比992.55的离子强度之比；

8、s5、若样品的人参皂苷re中13c/12c>0.53，则判断供试品为林下山参，若样品的人参皂苷re中13c/12c<0.53，则判断供试品为园参。

9、本发明的有益效果为：

10、1、本发明与现有基于人参总提取物同位素特征的检测方法相比，本发明涉及的检测标志物为单一化合物，简单，稳定性更好。通过对单一检测靶进行检测即可完成林下山参和园参的高精度鉴别。不依赖多因子检测和聚类算法。

11、2、本发明与现有基于同位素比例质谱的检测技术相比，采用液相色谱-质谱联用系统，操作简便，便于推广。

12、3.本发明的方法能够准确地鉴别园参/野山参，或者园参/林下山参，其准确率达到95％以上。

技术特征：

1.一种基于同位素特征的林下山参和园参鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的基于同位素特征的林下山参和园参鉴定方法，其特征在于，s1中，制备浓度为1mg/ml的混标液，并存放在4℃冰箱待测。

3.如权利要求2所述的基于同位素特征的林下山参和园参鉴定方法，其特征在于，准确称取人参皂苷re标准品10mg，加入10ml容量瓶中，用超纯水定容至刻度，制备浓度为1mg/ml的混标液，并存放在4℃冰箱待测。

4.如权利要求1所述的基于同位素特征的林下山参和园参鉴定方法，其特征在于，s2中，将新鲜的人参供试品干燥，粉碎后，加入饱和甲醇中，超声处理，收集提取液，高速离心后，取上清液待用。

5.如权利要求4所述的基于同位素特征的林下山参和园参鉴定方法，其特征在于，将新鲜人参供试品的主根切片均匀放在恒温干燥箱中，50℃温度下干燥24小时，粉碎后，取1g人参粉末，加入100ml饱和甲醇，超声处理45分钟，收集提取液，8000g高速离心20min，取上清液待用。

6.如权利要求1所述的基于同位素特征的林下山参和园参鉴定方法，其特征在于，s3中，采用uplc-q exactive液相色谱-质谱联用系统。

7.如权利要求6所述的基于同位素特征的林下山参和园参鉴定方法，其特征在于，液相色谱条件为：

8.如权利要求6所述的基于同位素特征的林下山参和园参鉴定方法，其特征在于，质谱条件为：

9.如权利要求8所述的基于同位素特征的林下山参和园参鉴定方法，其特征在于，

10.如权利要求1所述的基于同位素特征的林下山参和园参鉴定方法，其特征在于，s4中，数据处理通过工作站为xcalibur 2.2工作站实现，母离子和碎片离子的分子式预测参数:c[10～100],h[30～100],o[1～30]；质量精度误差在5×10-6以内。

技术总结
本发明提供了一种基于同位素特征的林下山参和园参鉴定方法，属于化学检测技术领域。方法包括如下步骤：S1、称取人参皂苷Re标准品用超纯水定容，制备对照品溶液；S2、将新鲜的人参供试品，用甲醇提取，制备供试品溶液；S3、用液相色谱串联质谱检测方法分析对照品溶液，用液相色谱串联质谱检测方法分析供试品溶液；S4、数据处理：对比对照品溶液与供试品溶液的检测结果，计算供试品的人参皂苷Re中的13C/12C分布特征；S5、若样品的分布特征>0.53，则判断供试品为林下山参，若样品的分布特征<0.53，则判断供试品为园参。本发明涉及的检测标志物为单一化合物，简单，稳定性更好。

技术研发人员：周书繁,孙浩,汪巍,丁韵凤,赵迎惠,张雪,李香尧,王雪华,陈佳宁,杨玉,陈雄
受保护的技术使用者：辽宁上药好护士药业（集团）有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/12