一种肿瘤标志物复合质控品冻干粉及其制备与应用的制作方法

本发明涉及生物制品，尤其涉及一种肿瘤标志物复合质控品冻干粉及其制备与应用。

背景技术：

1、肿瘤标志物是指特异性存在于恶性肿瘤细胞，或者恶性肿瘤细胞异常产生的物质，这些成分被释放到血中而被检测到，反映了肿瘤的发生、发展。肿瘤标志物存在于肿瘤患者的组织、体液或排泄物中，理想的肿瘤标志物应具有较高的敏感性和特异性，能够用免疫学、生物学、化学的方法检测。肿瘤标志物用于肿瘤的早期发现，肿瘤普查、筛查、诊断、鉴别及分期，用于判断肿瘤的愈后，寻找未知来源的转移灶、原发灶。在临床上，对患者体液中的标志物进行检测常常作为一种诊断肿瘤类疾病的依据，而诊断系统测量结果的准确性离不开检测系统的质量控制，临床上通常以质控品的准确度来监控实验室的检测仪器、试剂是否有效，保证患者检测结果的准确可靠。

2、目前肿瘤标志物质控品分为单一项目质控品和多肿瘤标志物复合质控品，相关技术中，多肿瘤标志物复合质控品的肿瘤标志物种类越多，特别是在包含了细胞角蛋白19片段、神经元特异性烯醇化酶、游离前列腺特异性抗原、总前列腺特异性抗原等标志物时，稳定性越差，有效期偏短，且大多存在明显的基质效应，检测项目不够全面的缺陷，其受到温度、长途运输等方面的影响，给临床检验的使用和储存带来不便。

技术实现思路

1、有鉴于此，本申请提供一种肿瘤标志物复合质控品冻干粉及其制备与应用，用于解决多肿瘤标志物复合质控品稳定性差、准确度低的问题。

2、为达到上述技术目的，本申请采用以下技术方案：

3、第一方面，本申请提供一种肿瘤标志物复合质控品冻干粉，其由肿瘤标志物复合阳性物质加入至基质液后冻干而成；基质液含有1～5w％蛋白保护剂、1～8w％糖类物质、0.1～1w％表面活性剂、5～10w％冻干赋形剂、余量为质控液；质控液由55～85v％正常人血清及15～45v％缓冲液组成；缓冲液含有0.1～1w％镁源、0.01～0.5w％防腐剂、余量为10～100mm磷酸盐缓冲液；肿瘤标志物复合阳性物质包括甲胎蛋白、糖类抗原125、糖类抗原15-3、糖类抗原72-4、糖类抗原19-9、人附睾蛋白4、鳞状细胞癌相关抗原、细胞角蛋白19片段、癌胚抗原、游离前列腺特异性抗原、总前列腺特异性抗原、神经元特异性烯醇化酶、胃泌素释放肽前体。

4、优选的，正常人血清与缓冲液的体积比为2～3:1。

5、优选的，肿瘤标志物复合阳性物质包括7～130iu/ml的甲胎蛋白(afp)、14～390u/ml的糖类抗原125(ca125)、14～130u/ml的糖类抗原15-3(ca15-3)、7～130u/ml的糖类抗原72-4(ca72-4)、14～130u/ml的糖类抗原19-9(ca19-9)、35～650pmol/l的人附睾蛋白4(he4)、1.4～32.5ng/ml的鳞状细胞癌相关抗原(scc)、2.1～130ng/ml的细胞角蛋白19片段(cyfra21-1)、7～130ng/ml的癌胚抗原(cea)、0.49～13ng/ml的游离前列腺特异性抗原(fpsa)、2.1～39ng/ml的总前列腺特异性抗原(t-psa)、8.4～130ng/ml的神经元特异性烯醇化酶(nse)、28～1300pg/ml的胃泌素释放肽前体(progrp)。

6、优选的，蛋白保护剂包括酪蛋白、酪蛋白水解物、牛血清白蛋白、人血清白蛋白中的一种或几种。

7、优选的，糖类物质包括海藻糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖中的一种或多种。

8、优选的，镁源选自硫酸镁、氯化镁、六水氯化镁中的一种或多种。

9、优选的，冻干赋形剂为甘露醇。

10、优选的，防腐剂包括叠氮钠、硫酸庆大霉素、proclin300中的一种或多种；表面活性剂为吐温20、吐温80、吐温100、聚乙二醇辛基苯基醚中的一种或多种。

11、第二方面，本申请提供一种肿瘤标志物复合质控品冻干粉的制备方法，包括以下步骤：

12、s1.将正常人血清与缓冲液混合后，加入蛋白保护剂、糖类、冻干赋形剂、表面活性剂，溶解搅拌后，调节ph值至6.5～7.5，得到基质液；

13、s2.向基质液中添加肿瘤标志物复合阳性物质，而后真空冷冻干燥，即得肿瘤标志物复合质控品冻干粉。

14、优选的，真空冷冻干燥的程序如下：

15、降温时间20-25min使温度降至-10℃，持续30min；

16、降温时间20-25min使温度降至-40℃，持续150min；

17、升温时间20-25min使温度升至-25℃，持续420min，真空度9～12pa；

18、升温时间10-15min使温度升至-20℃，持续480min，真空度9～12pa；

19、升温时间35-40min使温度升至35℃，持续330min，真空度25～35pa。

20、优选的，真空冷冻干燥后的肿瘤标志物复合质控品冻干粉于2～8℃保存。

21、第三方面，本申请提供一种肿瘤标志物复合质控品冻干粉在制备检测试剂中的应用。

22、本申请的有益效果如下：

23、(1)本发明的肿瘤标志物复合质控品包含13种项目，复合程度高，能够满足常见肿瘤类疾病的临床检测需求，降低误诊、漏诊的几率；

24、(2)本发明的肿瘤标志物复合质控品的基质液由正常人血清和缓冲液混合组成，消除了人血清本底值过高带来的可能影响，缓冲液的存在不仅能使部分肿瘤标志物阳性物质更加稳定，还可以尽可能避免不同批次血清对质控品性能的影响，同时节约了血液资源。

25、(3)本发明的肿瘤标志物复合质控品为冻干粉，不受运输、温度等因素影响，且由于在基质液中加入了蛋白保护剂、糖类、表面活性剂、防腐剂、赋形剂等组成的复合保护物质，使得质控品中各分析成分的准确度高，均匀性和稳定性良好，冻干状态下2～8℃可保存大于12个月，复溶后放于2～8℃可保存14天(fpsa、t-psa保存7天)，复溶后放于-20℃可保存60天，与对照相比偏差在15％以内。

26、(4)本发明的肿瘤标志物复合质控品及制备方法，适合工业化大规模生产，减少了生产过程中冷冻干燥的次数，降低了成本，检测项目多，准确度高，均匀性和稳定性等性能良好。

技术特征：

1.一种肿瘤标志物复合质控品冻干粉，其特征在于，其由肿瘤标志物复合阳性物质加入至基质液后冻干而成；所述基质液含有1～5w％蛋白保护剂、1～8w％糖类物质、0.1～1w％表面活性剂、5～10w％冻干赋形剂、余量为质控液；所述质控液由55～85v％正常人血清及15～45v％缓冲液组成；所述缓冲液含有0.1～1w％镁源、0.01～0.5w％防腐剂、余量为10～100mm磷酸盐缓冲液；所述肿瘤标志物复合阳性物质包括甲胎蛋白、糖类抗原125、糖类抗原15-3、糖类抗原72-4、糖类抗原19-9、人附睾蛋白4、鳞状细胞癌相关抗原、细胞角蛋白19片段、癌胚抗原、游离前列腺特异性抗原、总前列腺特异性抗原、神经元特异性烯醇化酶、胃泌素释放肽前体。

2.根据权利要求1所述的肿瘤标志物复合质控品冻干粉，其特征在于，所述肿瘤标志物复合阳性物质包括7～130iu/ml的甲胎蛋白、14～390u/ml的糖类抗原125、14～130u/ml的糖类抗原15-3、7～130u/ml的糖类抗原72-4、14～130u/ml的糖类抗原19-9、35～650pmol/l的人附睾蛋白4、1.4～32.5ng/ml的鳞状细胞癌相关抗原、2.1～130ng/ml的细胞角蛋白19片段、7～130ng/ml的癌胚抗原、0.49～13ng/ml的游离前列腺特异性抗原、2.1～39ng/ml的总前列腺特异性抗原、8.4～130ng/ml的神经元特异性烯醇化酶、28～1300pg/ml的胃泌素释放肽前体。

3.根据权利要求1所述的肿瘤标志物复合质控品冻干粉，其特征在于，所述蛋白保护剂包括酪蛋白、酪蛋白水解物、牛血清白蛋白、人血清白蛋白中的一种或几种。

4.根据权利要求1所述的肿瘤标志物复合质控品冻干粉，其特征在于，所述糖类物质包括海藻糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖中的一种或多种。

5.根据权利要求1所述的肿瘤标志物复合质控品冻干粉，其特征在于，所述镁源选自硫酸镁、氯化镁、六水氯化镁中的一种或多种。

6.根据权利要求1所述的肿瘤标志物复合质控品冻干粉，其特征在于，所述冻干赋形剂为甘露醇。

7.根据权利要求1所述的肿瘤标志物复合质控品冻干粉，其特征在于，所述防腐剂包括叠氮钠、硫酸庆大霉素、proclin300中的一种或多种；所述表面活性剂为吐温20、吐温80、吐温100、聚乙二醇辛基苯基醚中的一种或多种。

8.一种如权利要求1-7任一项所述的肿瘤标志物复合质控品冻干粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述真空冷冻干燥的程序如下：

10.一种如权利要求1-7任一项所述的肿瘤标志物复合质控品冻干粉在制备检测试剂中的应用。

技术总结
本发明公开一种肿瘤标志物复合质控品冻干粉及其制备与应用，其由13种肿瘤标志物阳性物质加入至基质液后冻干而成；基质液含有1～5w％蛋白保护剂、1～8w％糖类物质、0.1～1w％表面活性剂、5～10w％冻干赋形剂、余量为质控液；质控液由55～85v％正常人血清及15～45v％缓冲液组成；缓冲液含有0.1～1w％镁源、0.01～0.5w％防腐剂、余量为10～100mM磷酸盐缓冲液；本发明质控品准确度高，均匀性、稳定性等性能良好，满足临床检验需求。

技术研发人员：李启阳,李金河,徐凯,周建军
受保护的技术使用者：武汉明德生物科技股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/4/7