化学发光相加法在制备识别不同表位单克隆抗体中的应用

本发明涉及单克隆抗体，尤其涉及化学发光相加法在制备识别不同表位单克隆抗体中的应用。

背景技术：

1、单克隆抗体广泛用于生物学、医学、免疫学等多种学科，在疾病诊断、毒素检测、疾病治疗等领域具有重要作用，单克隆抗体药物可用于治疗肿瘤、病毒性感染等常见疾病。因此如何获得不同的单抗(即识别表位不同的单抗)是筛选单抗过程中非常重要的环节，目前可用的方法有杂交瘤细胞测序、单抗识别表位的鉴定以及elisa相加法。其中杂交瘤细胞测序成本高，因此在杂交瘤细胞筛选过程中一般不使用该方法；单抗识别表位的鉴定过程繁琐、所需时间长，不适用于杂交瘤细胞筛选过程中；elisa相加法能够快速将抗体进行分离，但由于elisa线性范围窄，因此elisa相加法不能准确地将单抗进行分类。因此，如何提供一种可用于杂交瘤细胞筛选的方法，该方法能够避免制备出识别表位相同的单抗，从而大大降低制备识别不同表位单抗的成本成为本领域技术人员亟待解决的技术问题。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供化学发光相加法在制备识别不同表位单克隆抗体中的应用，以解决现有技术中存在的问题。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了化学发光相加法在制备识别不同表位单克隆抗体中的应用。

4、本发明还提供了化学发光相加法在单克隆抗体分类中的应用。

5、优选的，化学发光相加法的具体应用方法为：

6、步骤1)采用间接clia法测定每个杂交瘤细胞上清(单抗)与包被目标抗原的饱和曲线，确定后续clia相加法中杂交瘤细胞上清(单抗)的最高稀释倍数；

7、步骤2)确定杂交瘤细胞上清(单抗)的最高稀释倍数后，同时测量确定稀释倍数后的每个单抗的cl值，以及两个单克隆抗体都加的cl值：当第一个单克隆抗体与抗原结合后，再加入第二个单克隆抗体所得cl值；

8、步骤3)采用clia相加法对单克隆抗体分类，建立定量分析clia相加性检验结果的公式：

9、ai＝(2×a1+2/(a1+a2)-1)×100

10、其中，ai表示两个抗体的相加性指数，a1、a2和a1+2分别为只加第一个单克隆抗体(a1)、只加第二个单克隆抗体(a2)和两个单克隆抗体都加(a1+2)的cl值，其中a1和a2的cl比值不能超过3倍；

11、ai的cut-off值定为50％，依据ai值的大小对抗体进行分类。

12、优选的，所述依据ai值的大小对抗体进行分类是当ai大于50％，表明这两株单克隆抗体识别的表位不同；当ai低于50％时，表明这两株单克隆抗体识别的表位相同或相似。

13、本发明还提供了化学发光相加法在杂交瘤细胞筛选中的应用。

14、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

15、本发明利用化学发光免疫分析(clia)的高灵敏度、宽的线性范围，建立了一种简便快速将抗体进行的分类的方法，为制备识别不同表位的单抗提供了一种新方法。该方法能够避免制备同一种单抗，从而大大降低了制备识别不同表位单抗的成本，节省了科研人员的时间和精力。

技术特征：

1.化学发光相加法在制备识别不同表位单克隆抗体中的应用。

2.化学发光相加法在单克隆抗体分类中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，化学发光相加法的具体应用方法为：

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述依据ai值的大小对抗体进行分类是当ai大于50％，表明这两株单克隆抗体识别的表位不同；当ai低于50％时，表明这两株单克隆抗体识别的表位相同或相似。

5.化学发光相加法在杂交瘤细胞筛选中的应用。

技术总结
本发明涉及单克隆抗体技术领域，尤其涉及化学发光相加法在制备识别不同表位单克隆抗体中的应用。基于化学发光免疫分析(CLIA)的高灵敏度、宽的线性范围，本发明将化学发光应用于单克隆抗体分类中，建立化学发光相加法。化学发光相加法是一种简便快速将抗体进行分类的方法，为制备识别不同表位的单抗提供了一种新方法，该方法能够避免制备同一种单抗，从而大大降低了制备识别不同表位单抗的成本，节省了科研人员的时间和精力。

技术研发人员：刘伟,邵军军,周广青,高闪电,常惠芸,郭慧琛
受保护的技术使用者：中国农业科学院兰州兽医研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/3/27