恩格列净中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯检测方法与流程

本申请涉及恩格列净杂质分析领域，尤其是涉及恩格列净中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯检测方法。

背景技术：

1、甲磺酸、苯甲磺酸等磺酸盐物质作为原料，恩格列净合成过程中甲磺酸、苯甲磺酸等磺酸盐物质与微量的低级醇生成烷基磺酸酯，如甲磺酸甲酯(mms)、甲磺酸乙酯(ems)、甲磺酸异丙酯(ims)等，这些物质可与dna发生烷基化反应，从而可能成为引发癌症的诱因，因此控制药物中该类杂质的毒理学关注阈值(ttc)水平非常重要，现有关于基因毒性杂质的最大摄取量为1.5μg/d。

2、目前针对上述杂质残留量检测多采用衍生化法测定甲磺酸甲酯(mms)、甲磺酸乙酯(ems)、甲磺酸异丙酯(ims)等，此类方法的前处理比较繁琐，检测成本高。

技术实现思路

1、为更为快速、准确、简便、灵敏测定恩格列净中杂质甲磺酸甲酯(mms)、甲磺酸乙酯(ems)、甲磺酸异丙酯(ims)残留，提供一种恩格列净中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯检测方法。

2、本发明的上述发明目的是通过以下技术方案得以实现的：

3、一种恩格列净中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯检测方法，

4、供试品溶液：称取恩格列净供试品到容量瓶中加甲醇稀释溶解至刻度，摇匀，得到供试品溶液；

5、对照溶液：以同时溶有甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯的甲醇溶液作为对照溶液；空白溶液：以甲醇作为空白溶液；

6、程序控制溶液：与对照溶液相同。

7、以气相质谱法进行以下步骤的试样检测：

8、分别进样空白溶液1针或多针，对照溶液5针，空白溶液1针或多针，供试品溶液各1针，空白溶液1针或多针至仪器平衡色谱条件，每隔12针或程序最后1针进样一针程序控制溶液1针，记录色谱过程，采用外标法计算甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯含量；气相色谱测定条件为：

9、色谱柱为db-624ui色谱柱30m×0.32mm×1.8μm，柱温：50℃保持3min后，25℃/min升至230℃，并在230℃保持5min；

10、载气为氦气，载气流速为1.3ml/min，进样体积为1.0μl，进样口温度为200℃，分流比为5:1，

11、ms传输线温度为260℃；离子源温度为280℃，离子源类型为ei；

12、仪器平衡色谱条件：

13、色谱柱为db-624ui色谱柱30m×0.32mm×1.8μm，柱温：250℃保持15.2min，载气：氦气，载气流速：1.3ml/min；进样体积：1.0μl，进样口温度：250℃；分流比：5:1；ms传输线温度：260℃；离子源温度：280℃，离子源类型：ei。

14、通过采用上述技术方案，本申请的检测方法检测恩格列净中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯时，具备有优良的专属性、高精度、检测限和定量限为loq≤18ppm，lod≤6ppm，能够更为快速、准确、简便、灵敏测定恩格列净中杂质甲磺酸甲酯(mms)、甲磺酸乙酯(ems)、甲磺酸异丙酯(ims)残留。

15、可选的，计算公式为：

16、含量(ppm)＝(cs×au)/(as×cu)

17、其中：

18、cs为对照溶液中各溶剂的浓度，单位为μg/ml；

19、au为供试品溶液所得到的色谱图中溶剂的峰面积；

20、cu为供试品溶液的浓度，单位为g/ml；

21、as为5针对照溶液所得到的色谱图中各溶剂的平均峰面积。

22、可选的，所述质谱中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯定性、定量离对情况如下：

23、甲磺酸甲酯定量离子：80，定性离子：65，79；

24、甲磺酸乙酯定量离子：79，定性离子：97，109；

25、甲磺酸异丙酯定量离子：123，定性离子：43，79。

26、通过采用上述技术方案，获取信息更为准确，计算更为方便。

27、可选的，供试品溶液中恩格列净浓度为2.5～2.52mg/ml。

28、可选的，所述供试品溶液的配制方法为：称取供试品到20ml容量瓶中加甲醇稀释溶解至刻度，摇匀。

29、可选的，对照溶液配中甲磺酸甲酯浓度为0.15～0.16μg/ml，甲磺酸乙酯浓度为0.15～0.16μg/ml，甲磺酸异丙酯浓度为0.15～0.16μg/ml。

30、可选的，其特征在于，所述对照溶液的配制方法为：

31、先称取甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯，以甲醇为溶剂各自配制甲磺酸甲酯储备溶液、甲磺酸乙酯储备溶液、甲磺酸异丙酯储备溶液，

32、再移取甲磺酸甲酯储备溶液、甲磺酸乙酯储备溶液、甲磺酸异丙酯储备溶液到容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得到对照溶液。

33、通过采用上述技术方案，由此获得的供试品溶液、对照溶液的稳定性更好，达到16小时，以此进行配制的其他溶液稳定性亦更好，检测结果更为准确。

34、综上所述，本申请至少具备以下有益效果：

35、1.本申请的检测方法检测恩格列净中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯时，具备有优良的专属性、高精度、检测限和定量限为loq≤18ppm，lod≤6ppm，能够更为快速、准确、简便、灵敏测定恩格列净中杂质甲磺酸甲酯(mms)、甲磺酸乙酯(ems)、甲磺酸异丙酯(ims)残留。

36、2.本申请检测方法中供试品溶液、对照溶液的稳定性更好，检测结果更为准确。

技术特征：

1.一种恩格列净中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯检测方法，其特征在于，

2.根据权利要求1所述的恩格列净中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯检测方法，其特征在于，计算公式为：

3.根据权利要求1所述的恩格列净中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯检测方法，其特征在于，所述质谱中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯定性、定量离对情况如下：甲磺酸甲酯定量离子：80，定性离子：65，79；

4.根据权利要求1所述的恩格列净中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯检测方法，其特征在于，供试品溶液中恩格列净浓度为2.5～2.52mg/ml。

5.根据权利要求1或4所述的恩格列净中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯检测方法，其特征在于，所述供试品溶液的配制方法为：称取供试品到20ml容量瓶中加甲醇稀释溶解至刻度，摇匀。

6.根据权利要求1所述的恩格列净中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯检测方法，其特征在于，对照溶液配中甲磺酸甲酯浓度为0.15～0.16μg/ml，甲磺酸乙酯浓度为0.15～0.16μg/ml，甲磺酸异丙酯浓度为0.15～0.16μg/ml。

7.根据权利要求1或6所述的恩格列净中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯检测方法，其特征在于，所述对照溶液的配制方法为：

技术总结
本申请公开了一种恩格列净中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯检测方法，甲醇为溶剂配制供试品溶液、对照溶液、空白溶液、程序控制溶液，并以气相质谱法进行检测：依次进样空白溶液，对照溶液5针，空白溶液，供试品溶液1针，空白溶液至仪器平衡条件，并每隔12针或程序最后1针进样程序控制溶液1针，记录色谱过程，外标法计算甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯含量；在设定的测定条件、仪器平衡条件下本申请的检测方法具备有优良的专属性、高精度、检测限和定量限，能够更为快速、准确、简便、灵敏测定恩格列净中杂质甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯残留。

技术研发人员：唐宏渊,赵巧鹃,袁佳奎,潘丹娇
受保护的技术使用者：浙江江北药业有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/4/17