德拉沙星葡甲胺起始物料中杂质的检测方法与流程

本发明属于药物分析，具体涉及德拉沙星葡甲胺合成过程中起始物料3-羟基氮杂环丁烷盐酸盐中杂质的检测方法。

背景技术：

1、德拉沙星(delafloxacin)是一种新型喹诺酮类抗生素，用于治疗急性细菌性皮肤和皮肤结构感染(absssi)以及社区获得性细菌性肺炎(cabp)；其葡甲胺盐的化学结构如式i所示：

2、

3、德拉沙星最早由wakunaga制药开发，2006年，rib-x(即现在的melinta)获得该药的全球独家授权，并于2017年6月19日获美国食品药品监督管理局(fda)批准上市，商品名为目前，该药在国内尚未批准上市。

4、3-羟基氮杂环丁烷盐酸盐(式ii)是合成德拉沙星葡甲胺的一种起始物料，在合成反应中，起始物料的杂质不可避免地会带入到德拉沙星葡甲胺产物中。因而，对于德拉沙星葡甲胺起始物料的检测或质量控制，对于制备德拉沙星葡甲胺、提高德拉沙星葡甲胺质量稳定性具有重要意义。

5、式iii化合物为3-羟基氮杂环丁烷盐酸盐制备过程中的工艺杂质，式iii化合物在紫外光区无特征紫外吸收，因此，为了准确测定该杂质含量，亟需提供一种新的检测方法。

6、

技术实现思路

1、本发明的目的是为了解决以上现有技术的不足而提供一种德拉沙星葡甲胺起始物料3-羟基氮杂环丁烷盐酸盐中杂质(式iii)的检测方法。

2、本发明的技术方案为：

3、德拉沙星葡甲胺起始物料中杂质的检测方法，先将杂质进行衍生化反应得到衍生化合物，再采用高效液相色谱进行检测，所述检测方法采用c18色谱柱，以流动相a和流动相b作为洗脱液进行梯度洗脱，所述流动相a为磷酸溶液，优选为0.05％～0.2％的磷酸溶液，更优选为0.09％～0.11％的磷酸溶液，最优选为0.1％的磷酸溶液，所述流动相b为乙腈；所述梯度洗脱条件包括：

4、

5、其中，85≤a1≤95，45≤a2≤55，80≤a3≤95；25≤t1≤35，5≤t2≤15，0.1≤t3≤1，5≤t4≤15；

6、所述德拉沙星葡甲胺起始物料为：

7、所述杂质为：

8、所述杂质衍生化合物为：

9、优选地，所述c18色谱柱为inertsil ods-sp色谱柱，所述色谱柱的规格为内径4.6mm，长度150mm，填料粒径5μm。

10、进一步地，在本发明的某些实施例中，所述c18色谱柱还可以是agilent extend-c18色谱柱，所述色谱柱的规格为内径4.6mm，长度150mm，填料粒径5μm。

11、优选地，在本发明所述德拉沙星葡甲胺起始物料中杂质的检测方法中，还具有如下任选的色谱条件：

12、色谱柱温度为15～40℃，优选为20～30℃，和/或

13、流动相流速为0.7～1.3ml/min，优选为0.9～1.1ml/min，和/或

14、检测器采用紫外检测器，检测波长为225～235nm，优选为228～232nm。

15、在本发明的一个具体实施方案中，所述色谱柱温度为25℃；流动相流速为1.0ml/min；检测波长为230nm。

16、在本发明的一个具体实施方案中，a1＝90，a2＝50，a3＝90；t1＝30，t2＝10，0.1≤t3≤1，8≤t4≤12。

17、在本发明的一个具体实施方案中，a1＝90，a2＝50，a3＝90；t1＝30，t2＝10，t3＝1，t4＝9。

18、在本发明的一个具体实施方案中，所述杂质(式iii)与对甲基苯磺酰氯反应得到所述杂质衍生化合物(式iv)。

19、在本发明的一个具体实施方案中，所述德拉沙星葡甲胺起始物料(式ii)经n,n-二甲基乙酰胺溶解后，加入三乙胺乙腈溶液、对甲基苯磺酰氯溶液，室温下反应，将所述杂质(式iii)与对甲基苯磺酰氯反应得到所述杂质衍生化合物(式iv)。

20、本领域技术人员应知晓的是，除上述紫外检测器外，本发明的分析方法还可以灵活选用常用的其他类型高效液相色谱检测器，如荧光检测器、电化学检测器、示差检测器、蒸发光散射检测器、电导检测器、质谱检测器、电雾式检测器等。

21、具体地，本发明提供的德拉沙星葡甲胺起始物料中杂质的检测方法，包括供试品溶液的配制、对照品溶液的配制和测定三个步骤。

22、所述供试品溶液的配制包括：取德拉沙星葡甲胺起始物料10mg，置容器中，量入n,n-二甲基乙酰胺1ml，溶解，再分别加入三乙胺乙腈溶液和对甲基苯磺酰氯溶液，摇匀，于室温下反应，转移至50ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，作为供试品溶液。

23、所述对照品溶液的配制包括：取杂质对照品适量，加n,n-二甲基乙酰胺溶解并稀释制成每1ml中含杂质30μg的溶液，作为对照品母液。量取对照品母液1ml，置容器中，再分别加入三乙胺乙腈溶液和对甲基苯磺酰氯溶液，摇匀，于室温条件下反应，转移至50ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，作为对照品溶液。

24、所述测定步骤包括：量取供试品溶液与对照品溶液分别注入色谱仪，记录色谱图，按外标法计算各杂质检出量。

25、优选地，上述供试品溶液和对照品溶液配制过程中三乙胺乙腈溶液为3％三乙胺乙腈溶液，溶液配制方法为：取三乙胺3ml，置100ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀；所述三乙胺乙腈溶液的体积为1.75ml～2.2ml，更优选为2ml。

26、优选地，上述供试品溶液和对照品溶液配制过程中对甲基苯磺酰氯溶液配制方法为：取对甲基苯磺酰氯适量，加丙酮1ml溶解；所述对甲基苯磺酰氯的质量为415mg～500mg，更优选为450mg。

27、优选地，上述供试品溶液和对照品溶液配制过程中反应时间分别为40～60min，优选为50min。

28、本发明中，“室温”指15-25℃。

29、有益效果：

30、本发明提供的德拉沙星葡甲胺起始物料中杂质的检测方法，能够准确检测出起始物料3-羟基氮杂环丁烷盐酸盐(式ii)中杂质(式iii)，杂质及主峰理论板数均能满足药典要求，而且方法学验证结果显示本发明方法专属性、定量限与检测限、线性、进样精密度、溶液稳定性、中间精密度、准确度及耐用性均良好，为控制德拉沙星葡甲胺原料药及其制剂的质量提供了有效准确的检测方法。

技术特征：

1.德拉沙星葡甲胺起始物料中杂质的检测方法，其特征在于，先将杂质进行衍生化反应得到衍生化合物，再采用高效液相色谱进行检测；所述检测方法采用c18色谱柱，以流动相a和流动相b作为洗脱液进行梯度洗脱；所述流动相a为磷酸溶液，优选为0.05％～0.2％的磷酸溶液，更优选为0.09％～0.11％的磷酸溶液，最优选为0.1％的磷酸溶液；所述流动相b为乙腈；所述梯度洗脱条件包括：

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述c18色谱柱为inertsilods-sp色谱柱，所述色谱柱的规格为内径4.6mm，长度150mm，填料粒径5μm。

3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述c18色谱柱为agilent extend-c18色谱柱，所述色谱柱的规格为内径4.6mm，长度150mm，填料粒径5μm。

4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法还具有如下任选的色谱条件：

5.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱温度为25℃；流动相流速为1.0ml/min；检测波长为230nm。

6.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，a1＝90，a2＝50，a3＝90；t1＝30，t2＝10，0.1≤t3≤1，8≤t4≤12。

7.如权利要求1中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述杂质(式iii)与对甲基苯磺酰氯反应得到所述杂质衍生化合物(式iv)。

8.如权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述德拉沙星葡甲胺起始物料(式ii)经n,n-二甲基乙酰胺溶解后，加入三乙胺乙腈溶液、对甲基苯磺酰氯溶液，室温下反应，将所述杂质(式iii)与对甲基苯磺酰氯反应得到所述杂质衍生化合物(式iv)。

9.如权利要求1-8中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括供试品溶液的配制、对照品溶液的配制和测定三个步骤：

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，

技术总结
本发明提供了一种德拉沙星葡甲胺起始物料中杂质的检测方法，包括供试品溶液的配制、对照品溶液的配制和测定三个步骤。本发明的检测方法能够准确检测出起始物料3‑羟基氮杂环丁烷盐酸盐(式II)中杂质(式III)，且方法学验证结果显示本发明方法专属性、定量限与检测限、线性、进样精密度、溶液稳定性、中间精密度、准确度及耐用性均良好。

技术研发人员：陈庆财,田帅华,郭东山
受保护的技术使用者：西藏嘉信景天药业有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/31