采用气相色谱仪测定颈痛颗粒中多种挥发油成分的方法与流程

本发明涉及中药复方制剂的质量检测方法，具体为采用气相色谱仪测定颈痛颗粒中多种挥发油成分的方法。

背景技术：

1、颈痛颗粒收载于中国药典2020年版一部。具有活血化瘀、行气止痛的功效。用于神经根型颈椎病，属血瘀气滞、脉络闭阻证，症见颈、肩及上肢疼痛，发僵或窜麻、窜痛。

2、颈痛颗粒制剂是由如下重量配比的药材制成的：三七250克、川芎750克、延胡索500克、羌活1000克、白芍750克、威灵仙1000克、葛根750g。颈痛颗粒由于效果良好，经临床验证，疗效显著，因此，在临床上备受患者青睐。

3、目前2020版中国药典中颈痛颗粒质量标准收载了威灵仙中齐墩果酸成分、羌活中紫花前胡苷成分、白芍中芍药苷成分、川芎、延胡索和葛根的鉴别试验；含量测定项下仅收载了三七的含量测定方法。对于工艺中挥发油提取，在质量标准中无任何控制手段。

4、现有技术中都是对单一成分进行测定，且很少有将挥发油列入质量控制，未发现对于颈痛颗粒制剂的其他质量检测方法。中药产品成分多样复杂，单一成分评价药品质量不精准，不利于全面评价中药质量。颈痛颗粒具有活血化瘀、行气止痛的功效，研究表明羌活与威灵仙挥发油具有镇痛的功效，因此挥发油在颈痛颗粒中属于有效成分，所以将挥发油列入质量控制尤为必要。

5、对于有挥发油提取的中药产品，在其质量标准中控制挥发油的手段少之又少，基本检测挥发油量的多少，对挥发油中成分控制的基本没有。导致参考文献较少，方法开发困难。挥发油一般都是以包合物的形式存在于药品中，因此对于挥发油有效提取尤为困难，加热回流、超声提取、浸泡提取等，挥发油极易挥发，如何将挥发油提取出来，且保证挥发油不损失又是一大难题；另外，多指标含量测定，对照品消耗大，检测成本高等问题都是制约挥发油作为质量指标检测的因素。

技术实现思路

1、本发明针对以上不足之处，提供了采用气相色谱仪测定颈痛颗粒中多种挥发油成分的方法。本发明可以实现多指标、多成分的同时测定，完善单一成分测定和多指标成分含量测定的不足，进一步确保颈痛颗粒的质量安全、评价全面。

2、本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种采用气相色谱仪测定颈痛颗粒中多种挥发油成分的方法，包含有如下步骤：(1)供试品溶液的制备

3、取颈痛颗粒置于烧瓶中，加水振摇混合后，连接挥发油测定器与回流冷凝管；自挥发油测定器上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢入烧瓶时为止，再将正己烷加入挥发油测定器刻度部分；置电加热套中缓缓加热至沸，并保持微沸一段时间后停止加热，待挥发油测定器冷却至室温，关闭冷凝水，取上层正己烷溶液摇匀，滤过，取续滤液，即得；

4、(2)测定

5、采用气相色谱法，测定供试品溶液中α-蒎烯、柠檬烯、y-松油烯的含量。

6、进一步的，所述色谱条件是：色谱柱：db-35(30m*0.32nm，0.25μm)，柱温：起始温度60℃，保持1min，以2℃/min的速率升温至90℃，再以30℃/min的速率升温至280℃，保持5min；载气：高纯氮气，进样体积：1μl，进样口温度：250℃，检测器温度：250℃，不分流。

7、进一步的，所述供试样品的制备为：取颈痛颗粒5.0g，精密称定，置于烧瓶中，加水250ml与玻璃珠数粒，振摇混合后，连接挥发油测定器与回流冷凝管；自挥发油测定器上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢入烧瓶时为止，再精密量取1ml正己烷，加入挥发油测定器刻度部分；置电加热套中缓缓加热至沸，并保持微沸约3h，停止加热，待挥发油测定器冷却至室温，关闭冷凝水，取上层正己烷溶液转移至25ml容量瓶中，加正己烷定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

8、进一步的，所述色谱柱规格为30m*0.32nm，0.25μm。

9、本发明的有益效果是：

10、本发明提供一种气相色谱法同时测定颈痛颗粒中3种挥发油的方法，确保产品的质量控制。检测指标包括α-蒎烯、柠檬烯、y-松油烯，以各自对照品为参照物，通过外标法计算颈痛颗粒中α-蒎烯、柠檬烯、y-松油烯的含量，目前未发现将该方法应用于颈痛颗粒质量控制的其他文献报道。

11、由于中药中挥发油一般是以包合物的形式存在的，所以一般的超声提取，无法破坏包合物，将挥发油提取出来，同时挥发油极易挥发，如果提取溶剂不合理，即使挥发油提取出来，也挥发了，因此，待测组分中为检测到响应峰。我们对样品制备进行创新型改进，挥发油提取的方式，是在提取器中加入正己烷，这样挥发油随着水蒸气进入冷凝管，经冷凝进入挥发油提取器，水不溶于正己烷，会流回烧瓶，挥发油溶于正己烷，实现了水与油的分离，挥发油溶于正己烷解决了挥发油挥发的问题。

12、颈痛颗粒中，挥发油的主要有效成分有3个，分别为α-蒎烯、柠檬烯、y-松油烯，3种挥发油同时检测需要保证3个成分各自与相邻峰之间分离度大于1.5，对于成分复杂的中药来讲，尤为困难。本发明在此基础上对色谱条件进行创新性改进，使供试品色谱图中各待测成分与相邻峰之间的分离度大于1.5，且阴性对照无干扰。

13、本发明具有实用性高，操作性强，节约成本等优点；多种成分同时测定更有利于对产品的质量控制和全面评价。

技术特征：

1.一种采用气相色谱仪测定颈痛颗粒中多种挥发油成分的方法，其特征在于，(1)供试品溶液的制备

2.根据权利要求1所述的采用气相色谱仪测定颈痛颗粒中多种挥发油成分的方法，其特征在于，所述色谱条件是：色谱柱：db-35(30m*0.32nm，0.25μm)，柱温：起始温度60℃，保持1min，以2℃/min的速率升温至90℃，再以30℃/min的速率升温至280℃，保持5min；载气：高纯氮气，进样体积：1μl，进样口温度：250℃，检测器温度：250℃，不分流。

3.根据权利要求1所述的采用气相色谱仪测定颈痛颗粒中多种挥发油成分的方法，其特征在于，所述供试样品的制备为：取颈痛颗粒5.0g，精密称定，置于烧瓶中，加水250ml与玻璃珠数粒，振摇混合后，连接挥发油测定器与回流冷凝管；自挥发油测定器上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢入烧瓶时为止，再精密量取1ml正己烷，加入挥发油测定器刻度部分；置电加热套中缓缓加热至沸，并保持微沸约3h，停止加热，待挥发油测定器冷却至室温，关闭冷凝水，取上层正己烷溶液转移至25ml容量瓶中，加正己烷定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

4.根据权利要求1所述的一种同时测定颈痛颗粒中葛根素、芍药苷、阿魏酸含量的方法，其特征在于，所述色谱柱规格为30m*0.32nm，0.25μm。

技术总结
本发明公开了一种采用气相色谱仪测定颈痛颗粒中多种挥发油成分的方法，供试品溶液的制备，取颈痛颗粒置于烧瓶中，加水振摇混合后，连接挥发油测定器与回流冷凝管；自挥发油测定器上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢入烧瓶时为止，再将正己烷加入挥发油测定器刻度部分；置电加热套中缓缓加热至沸，并保持微沸一段时间后停止加热，待挥发油测定器冷却至室温，关闭冷凝水，取上层正己烷溶液摇匀，滤过，取续滤液，即得；采用气相色谱法，测定供试品溶液中α‑蒎烯、柠檬烯、Y‑松油烯的含量。本发明可以实现多指标、多成分的同时测定，完善单一成分测定和多指标成分含量测定的不足，进一步确保颈痛颗粒的质量安全、评价全面。

技术研发人员：刘杰,赵晓辉,林永强,江玉娟,徐腾飞,汪冰,潘瑞雪,陈勇,程合丽,陈俊亮
受保护的技术使用者：山东明仁福瑞达制药股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/4/7