一种二维液相色谱法同时测定保健食品中水飞蓟宾、葛根素和丹酚酸B含量的方法与流程

本发明属于保健食品检测，具体涉及一种二维液相色谱法同时测定保健食品中水飞蓟宾、葛根素和丹酚酸b含量的方法。

背景技术：

1、酒精对人体的伤害，尤其是对肝脏的损伤作用日益引起人们的关注，开发能够有效抑制乙醇诱导的肝损伤的产品是保健食品以及医药行业的研究热点。葛花、葛根、水飞蓟、五味子、高良姜、丹参等中药材是解酒护肝类产品的重要原料，市面上有大量以中药材为原料的解酒护肝类产品。

2、中药材的活性成分的含量是影响解酒护肝产品的功效的关键，影响产品质量的关键。以水飞蓟葛根丹参片为例，其是以水飞蓟、丹参、葛根三味中药材为原料开发的一款解酒护肝功能的保健食品，其中水飞蓟宾、葛根素、丹酚酸b分别是水飞蓟、葛根、丹参三味中药材的功能成分。其中，水飞蓟宾又被称作“天然护肝药”，具有明显保护及稳定肝细胞的作用；葛根素是从中药葛根中分离的异黄酮类衍生物，对急性肝损伤有较好的治疗作用；丹酚酸b为三分子丹参素与一分子咖啡酸缩合而成，是研究较多的丹酚酸之一，能有效缓解肝组织病理损伤。三者的含量是影响产品解酒护肝功效的关键。因此，开发一种同时测定保健食品中水飞蓟宾、葛根素和丹酚酸b含量的方法，能为保健食品的质量控制提供依据，具有一定的研究意义。

3、目前尚未有同时测定保健食品中水飞蓟宾、葛根素和丹酚酸b含量的方法的文献报道。研究人员发现，水飞蓟宾、葛根素和丹酚酸b含量检测的方法存在测定条件多样、色谱条件不统一的问题，另外由于中药类保健食品成分复杂，样品制备难度大，导致色谱检测中出现杂质峰干扰，样品准确定定量难度大、检测效率低等问题。

技术实现思路

1、为了克服上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种二维液相色谱法同时测定保健食品中水飞蓟宾、葛根素和丹酚酸b含量的方法。本发明基于中心切割的二维液相色谱法对样品中的水飞蓟宾、葛根素和丹酚酸b进行分离，提高了丹酚酸b的分离度及准确性，同时也提高了检测效率。

2、本发明目的通过如下技术方案实现：

3、一种二维液相色谱法同时测定保健食品中水飞蓟宾、葛根素和丹酚酸b含量的方法，包括如下步骤：

4、(1)将待测样品经溶剂超声提取得提取液；

5、(2)提取液通过二维高效液相色谱仪的第一维液相色谱确定葛根素、丹酚酸b、水飞蓟宾在第一维液相色谱的保留时间；

6、(3)提取液通过二维高效液相色谱仪检测，根据丹酚酸b在第一维液相色谱的保留时间在线中心切割，采用外标法定量；

7、其中，所述二维高效液相色谱仪的系统适用性色谱条件为：

8、第一维液相色谱条件为：第一维色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1％磷酸为流动相a，甲醇为流动相c，进行梯度洗脱；检测波长为0-15.60min：247nm，15.60-37min：287nm；

9、第二维液相色谱条件为：第二维色谱柱以五氟苯为填充剂；以0.1％磷酸为流动相a1，乙腈为流动相b1，进行等度洗脱；检测波长为286nm；

10、捕获柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

11、洗脱程序见下表:

12、

13、

14、优选地，所述步骤(1)中，溶剂为体积浓度为60-80％的甲醇水溶液；超声提取时间为20-40min；待测样品与溶剂的质量体积比为1：40-60g/ml。

15、优选地，所述步骤(2)和(3)中，第一维液相色谱和第二维液相色谱的柱温均为30℃；第一维液相色谱的流速为0.8ml/min，第二维液相色谱的流速为0.5ml/min。

16、优选地，步骤(3)中，在线中心切割的时间为丹酚酸b在第一维液相色谱的保留时间±0.1min。

17、作为本发明一个优选的实施方式，第一维色谱柱为agilent zorbax eclipseplus c18，4.6×250mm,5μm。

18、作为本发明一个优选的实施方式，第二维色谱柱为agilent poroshell 120pfp，4.6×100mm,4μm。

19、作为本发明一个优选的实施方式，捕获柱为agilent poroshell 120ec c18,4.6×50mm 2.7μm。

20、本发明与现有技术相比，具有如下有益效果：

21、本发明提供了一种二维液相色谱法同时测定保健食品中水飞蓟宾、葛根素和丹酚酸b含量的方法，统一了样品制备方法，检测前处理过程简单。

22、本发明方法基于在线中心切割的二维液相色谱法对样品中的水飞蓟宾、葛根素和丹酚酸b进行分离。首先在第一维中，使用甲醇-水系统分离水飞蓟宾、葛根素、丹酚酸b。然后将第一维上的丹酚酸b捕获到第二维乙腈-水系统中进行再分离，解决了成分复杂的保健食品在不同的流动相系统下，丹酚酸b存在杂质峰干扰的问题，提高了丹酚酸b的分离度及准确性，并且两维的检测是在线同步进行的，这大大提高了检测效率。

23、本发明通过对保健食品中水飞蓟宾、葛根素和丹酚酸b含量测定方法进行线性、精密度、耐用性试验(稳定性)、专属性试验(空白)、检出限、定量限、准确度(回收率)试验、实际样品测定，证明含量测定方法科学有效，能对保健食品中水飞蓟宾、葛根素和丹酚酸b的含量起到质量控制的目的。

技术特征：

1.一种二维液相色谱法同时测定保健食品中水飞蓟宾、葛根素和丹酚酸b含量

2.根据权利要求1所述的二维液相色谱法同时测定保健食品中水飞蓟宾、葛根素

3.根据权利要求1所述的二维液相色谱法同时测定保健食品中水飞蓟宾、葛根素和丹酚酸b含量的方法，其特征在于，步骤（2）和（3）中，第一维液相色谱和第二维液相色谱的柱温均为30℃；第一维液相色谱的流速为0.8ml/min，第二维液相色谱的流速为0.5ml/min。

4.根据权利要求1所述的二维液相色谱法同时测定保健食品中水飞蓟宾、葛根素和丹酚酸b含量的方法，其特征在于，步骤（3）中，在线中心切割的时间为丹酚酸b在第一维液相色谱的保留时间±0.1min。

5. 根据权利要求1所述的二维液相色谱法同时测定保健食品中水飞蓟宾、葛根素和丹酚酸b含量的方法，其特征在于，第一维色谱柱为agilent zorbax eclipse plus c18，4.6×250mm,5μm。

6. 根据权利要求1所述的二维液相色谱法同时测定保健食品中水飞蓟宾、葛根素和丹酚酸b含量的方法，其特征在于，第二维色谱柱为agilent poroshell 120 pfp，4.6×100mm,4μm。

7. 根据权利要求1所述的二维液相色谱法同时测定保健食品中水飞蓟宾、葛根素和丹酚酸b含量的方法，其特征在于，捕获柱为agilent poroshell 120 ec c18,4.6×50mm 2.7μm。

技术总结
本发明公开了一种二维液相色谱法同时测定保健食品中水飞蓟宾、葛根素和丹酚酸B含量的方法，包括：将待测样品经溶剂超声提取后得提取液，提取液通过二维高效液相色谱仪检测，在线中心切割，采用外标法定量。本发明方法基于在线中心切割的二维液相色谱法对样品中的水飞蓟宾、葛根素和丹酚酸B进行分离，解决了成分复杂的保健食品在不同的流动相系统下，丹酚酸B存在杂质峰干扰的问题，提高了丹酚酸B的分离度及准确性，并且二维的检测是在线同步进行的，这大大提高了检测效率。

技术研发人员：房家祥,刘光兰,张湘越,李珍,吴振知,刘文得,蔡良平,张学荣,潘拾朝,刘慧堂
受保护的技术使用者：汤臣倍健股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/19