一种酱油的前处理方法和氯丙醇类化合物的检测方法与流程

本发明属于分析检测，具体涉及一种酱油的前处理方法和氯丙醇类化合物的检测方法。

背景技术：

1、配制酱油是指以酿造酱油为主体，加入盐酸水解植物蛋白调味液、食品添加剂等配制而成的液体调味品，然而盐酸水解植物蛋白调味液的副产品——氯丙醇类化合物，却因其致癌等风险引发大量关注。其中，污染水平最高的是3-氯-1，2-丙二醇(3-mcpd)，其次为1，3-二氯-2-丙二醇(1，3-dcp)，2-氯-1，3-丙二醇(2-mcpd)和2，3-二氯-1-丙二醇(2，3-dcp)的污染水平相对较低。

2、食品中氯丙醇常用的检测方法有气相色谱法、气相色谱-质谱联用法、毛细管电泳法、高效液相色谱-荧光检测法、近红外光谱法等，而固相萃取法是主要的前处理方式。例如，现有技术(刘沁颖等.气相色谱-质谱联用法测定液体调味料中4种氯丙醇的含量[j]中国酿造，2023年第42卷第1期：226～230)公开了一种待测样品的前处理方法：将待测样品、氯化钠和内标液混合，采用硅藻土固相萃取小柱进行萃取、淋洗除杂和洗脱后进行衍生。然而，上述前处理方法需要对样品进行固相支持液液萃取(即固相萃取)，前处理步骤复杂。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明目的在于提供一种酱油的前处理方法和氯丙醇类化合物的检测方法，本发明提供的前处理方法无需固相萃取，前处理步骤简单。

2、为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、本发明提供了一种酱油的前处理方法，包括以下步骤：

4、将酱油的待测样品、氯化钠和乙腈混合，进行盐析辅助液液萃取，得到萃取相；

5、将所述萃取相进行干燥后复溶，得到复溶液，将所述复溶液进行酯化衍生，得到待测样品液。

6、优选的，所述待测样品和氯化钠的质量比为2∶1～1.4。

7、优选的，所述待测样品和乙腈的固液比为2g∶1.5～3.0ml。

8、优选的，所述盐析辅助液液萃取的方式为离心萃取；

9、所述离心萃取的转速为4000～12000rpm，时间为5～10min。

10、优选的，所述酯化衍生采用的衍生试剂包括七氟丁酰基咪唑；

11、所述复溶液和衍生试剂的体积比为1∶0.05～0.1。

12、优选的，所述酯化衍生的温度为70～75℃，时间为20～30min。

13、本发明提供了一种酱油中氯丙醇类化合物的检测方法，包括以下步骤：

14、将酱油的待测样品、内标物、氯化钠和乙腈混合，进行盐析辅助液液萃取，得到萃取相；所述内标物包括d5-3-氯-1，2-丙二醇；

15、将所述萃取相进行干燥后复溶，得到复溶液，将所述复溶液进行酯化衍生，得到待测样品液；

16、将所述待测样品液进行气相色谱-质谱检测，得到检测结果；所述检测结果包括定性检测结果和定量检测结果；

17、所述氯丙醇类化合物包括2-氯-1，3-丙二醇、3-氯-1，2-丙二醇、1，3-二氯-2-丙二醇和2，3-二氯-1-丙二醇中的一种或几种。

18、优选的，所述待测样品和内标物的质量比1∶0.01～0.1。

19、优选的，所述气相色谱-质谱检测的气相色谱检测的条件包括：色谱柱为hp-5ms；柱流量为0.5～1.5ml/min；柱温采用程序升温，所述程序升温为0～1min，40℃；1～21min，由40℃匀速升温至60℃；21～31min，由60℃匀速升温至升温至80℃；31～35.25min，由80℃匀速升温至升温至250℃；35.25～40.25min，250℃；进样口温度为200～300℃；进样方式为不分流进样；进样体积为0.5～2μl。

20、优选的，所述气相色谱-质谱检测的质谱检测的条件包括：离子源为电子轰击离子源；电子能量为40～90ev；传输线温度为250～300℃；离子源温度为180～280℃；溶剂延迟时间为2～8min；检测方式为离子监测模式，其中，1，3-二氯-2-丙二醇的监控离子为75/77/275，定量离子为75；2，3-二氯-1-丙二醇的监控离子为75/77/111，定量离子为75；3-氯-1，2-丙二醇的监控离子为253/289/453，定量离子为253；2-氯-1，3-丙二醇的监控离子为253/289/291，定量离子为253；d5-3-氯-1，2-丙二醇的监控离子为257/294/278，定量离子为257。

21、本发明提供了一种酱油的前处理方法，本发明将酱油的待测样品、内标物、氯化钠和乙腈混合，进行盐析辅助液液萃取，得到萃取相；然后将所述萃取相进行干燥后复溶，将所述复溶得到的混合溶液进行酯化衍生，得到待测样品液。本发明提供的前处理方法采用盐析辅助液液萃取的方法，无需固相萃取，步骤简单；采用氯化钠作为盐析剂，乙腈作为萃取溶剂，对4种氯丙醇类化合物(2-氯-1，3-丙二醇、3-氯-1，2-丙二醇、1，3-二氯-2-丙二醇和2，3-二氯-1-丙二醇)的萃取效果优异，采用本发明提供的前处理方法进行前处理后检测的回收率高，重复性好。而且，本发明提供的前处理方法操作简单，成本低廉，适用于酱油中氯丙醇类化合物的定性筛查和定量测定的前处理中。

22、本发明还提供了一种酱油中氯丙醇类化合物的检测方法。本发明提供的检测方法检出限低，灵敏度、精密度和准确度高，且操作简单，成本低廉，适用于酱油中氯丙醇类化合物的定性和定量检测。

技术特征：

1.一种酱油的前处理方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，所述待测样品和氯化钠的质量比为2∶1～1.4。

3.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，所述待测样品和乙腈的固液比为2g∶1.5～3.0ml。

4.根据权利要求1、2或3所述的前处理方法，其特征在于，所述盐析辅助液液萃取的方式为离心萃取；

5.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，所述酯化衍生采用的衍生试剂包括七氟丁酰基咪唑；

6.根据权利要求1或5所述的前处理方法，其特征在于，所述酯化衍生的温度为70～75℃，时间为20～30min。

7.一种酱油中氯丙醇类化合物的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述待测样品和内标物的质量比1∶0.01～0.1。

9.根据权利要求7或8所述的检测方法，其特征在于，所述气相色谱-质谱检测的气相色谱检测的条件包括：色谱柱为hp-5ms；柱流量为0.5～1.5ml/min；柱温采用程序升温，所述程序升温为0～1min，40℃；1～21min，由40℃匀速升温至60℃；21～31min，由60℃匀速升温至升温至80℃；31～35.25min，由80℃匀速升温至升温至250℃；35.25～40.25min，250℃；进样口温度为200～300℃；进样方式为不分流进样；进样体积为0.5～2μl。

10.根据权利要求7或8所述的检测方法，其特征在于，所述气相色谱-质谱检测的质谱检测的条件包括：离子源为电子轰击离子源；电子能量为40～90ev；传输线温度为250～300℃；离子源温度为180～280℃；溶剂延迟时间为2～8min；检测方式为离子监测模式，其中，1，3-二氯-2-丙二醇的监控离子为75/77/275，定量离子为75；2，3-二氯-1-丙二醇的监控离子为75/77/111，定量离子为75；3-氯-1，2-丙二醇的监控离子为253/289/453，定量离子为253；2-氯-1，3-丙二醇的监控离子为253/289/291，定量离子为253；d5-3-氯-1，2-丙二醇的监控离子为257/294/278，定量离子为257。

技术总结
本发明提供了一种酱油的前处理方法和氯丙醇类化合物的检测方法，属于分析检测技术领域。本发明提供的前处理方法采用盐析辅助液液萃取的方法，无需固相萃取，步骤简单；采用氯化钠作为盐析剂，乙腈作为萃取溶剂，对4种氯丙醇类化合物(2‑氯‑1，3‑丙二醇、3‑氯‑1，2‑丙二醇、1，3‑二氯‑2‑丙二醇和2，3‑二氯‑1‑丙二醇)的萃取效果优异，采用本发明提供的前处理方法进行前处理后检测的回收率高，重复性好。而且，本发明提供的前处理方法操作简单，成本低廉，适用于酱油中氯丙醇类化合物的定性筛查和定量测定的前处理中。

技术研发人员：王东旭,曾坤,王新财,谷贵章
受保护的技术使用者：湖州市食品药品检验研究院（湖州市药品和医疗器械不良反应监测中心、湖州市医疗器械监督检验中心、湖州市食品认证审评和粮油质量监测中心）
技术研发日：
技术公布日：2024/3/27