本技术属于免疫检测领域,具体涉及一种定量检测pla2r(磷脂酶a2受体)抗体的试纸条及检测卡。
背景技术:
1、膜性肾病常规诊断方法包括临床表现、肾脏穿刺术的组织学检查或肾组织电镜检查。研究发现特发性膜性肾病的自身免疫实质是自身抗体与pla2r反应的结果,已经确认了pla2r是自身抗体的主要靶抗原。
2、目前报道的抗pla2r抗体检测技术主要有免疫印迹法、间接免疫荧光法和时间分辨荧光法。免疫印迹法耗时较久,灵敏度、特异性相对较低,仍处于实验室阶段。间接免疫荧光法只能定性不能定量;elisa法重复性差,容易出现假阳。化学发光法所需的检测仪器价格昂贵;这些方法都不适合临床快速诊断。相对于以上方法,时间分辨荧光法具有定量、便捷的优点。已有公司完成这种方法的开发,但都是采取将时间分辨荧光微球偶联物喷涂在结合垫上的方式,这种方式由于喷金仪器限制,重复性较差。
3、鉴于此,特提出本实用新型。
技术实现思路
1、为了提高pla2r抗体检测的灵敏度、特异性,能够定量检测且试剂成本低,简单,操作简便的方法,本实用新型提供一种抗pla2r抗体检测卡及制作、检测方法。
2、根据本实用新型的一个方面,提供了一种检测pla2r抗体的试纸条,所述pla2r抗体试纸条包括底板以及在所述底板长度方向上依次搭接的样本垫、硝酸纤维素膜和吸水垫;所述硝酸纤维素膜上划有检测线和封闭液线,所述检测线包被抗人igg抗体,所述封闭液线包被pla2r-蛋白时间分辨荧光微球偶联物,所述封闭液线相对于所述检测线更接近于所述样本垫。所述硝酸纤维素膜上还设有质控线,所述质控线包被pla2r抗体,并且所述质控线相对于所述检测线更接近于所述吸水垫。
3、所述试纸条的宽度可为3.0-4.0mm。
4、所述吸水纸、所述样本垫、所述硝酸纤维素膜和所述吸水垫之间相邻部位部分重叠区域的重叠长度为1-5mm。所述吸水可纸搭接在所述硝酸纤维素包被膜上侧。
5、所述底板可为聚苯乙烯构件、聚氯乙烯构件或者聚乙烯构件。所述样品垫可为表面活性剂和阻断剂的缓冲液浸泡处理后干燥的玻璃纤维构件。
6、根据本实用新型的另一个方面,提供了一种检测pla2r抗体的检测卡,包括所述试纸条以及包覆所述试纸条的外壳;所述外壳进一步包括底座和卡盖,所述卡盖上设置有观察口和加样口,所述加样口开口于所述样品垫上部,以露出部分或全部所述样品垫区域;所述观察口开口于所述硝酸纤维素膜上侧,以露出全部所述检测带和所述质控带。所述卡盖和所述底座分别为塑料上壳和塑料下壳,所述塑料上壳扣合所述塑料下壳上后形成卡壳。
7、根据本实用新型的第三个方面,提供了一种pla2r抗体检测卡的制作方法,包括以下步骤:
8、a.在硝酸纤维素膜上从上至下划pla2r抗体构成的c线、抗人igg抗体构成的t线、封闭液线并烘干;
9、b.在所述封闭液划线的同一位置划线pla2r-蛋白时间分辨荧光微球偶联物并干燥;
10、c.将样品垫搭接在所述硝酸纤维素膜靠近封闭液线的底端,之后粘贴在底板上。
11、所述封闭液包含:50-200mm的hepes、0.5-2%的bsa、1-5%的蔗糖和0.5-2%的pvp-k30。
12、所述c、t线划线浓度为1-2mg/ml,所述封闭液划线浓度为2.5-3.5mg/ml。优选地,所述封闭液划线浓度为2.5mg/ml。
13、所述pla2r蛋白时间分辨荧光微球偶联物划线浓度低于所述封闭液划线浓度。
14、步骤a中烘干时间是0.5-2小时。优选地,步骤a中烘干时间是1小时。
15、不同于传统的技术方案中将量子点偶联的pla2r喷涂在结合垫上,本实用新型将pla2r-蛋白时间分辨荧光微球偶联物划在硝酸纤维素膜上,避免了因为喷金导致的误差,优化了精密度。本实用新型试纸条,检测时间可缩短至5min,变异系数cv值可控制在7%以内。此外,本实用新型不必使用结合物垫,节省成本,提高了生产效率。
1.一种检测pla2r抗体的试纸条,其特征在于:所述pla2r抗体试纸条包括底板以及在所述底板长度方向上依次搭接的样本垫、硝酸纤维素膜和吸水垫;所述硝酸纤维素膜上划有检测线和封闭液线,所述检测线包被抗人igg抗体,所述封闭液线包被pla2r-蛋白时间分辨荧光微球偶联物,所述封闭液线相对于所述检测线更接近于所述样本垫。
2.根据权利要求1所述的检测pla2r抗体的试纸条,其特征在于:所述硝酸纤维素膜上还划有质控线,所述质控线包被pla2r抗体,并且所述质控线相对于所述检测线更接近于所述吸水垫。
3.根据权利要求1或2所述的检测pla2r抗体的试纸条,其特征在于:所述试纸条(3)的宽度为3.0-4.0 mm。
4.根据权利要求1或2所述的检测pla2r抗体的试纸条,其特征在于:所述样本垫、所述硝酸纤维素膜和所述吸水垫之间相邻部位部分重叠区域的重叠长度为1-5mm。
5.根据权利要求1或2所述的检测pla2r抗体的试纸条,其特征在于:所述吸水垫搭接在所述硝酸纤维素膜上侧。
6.根据权利要求1或2所述的检测pla2r抗体的试纸条,其特征在于:所述底板为聚苯乙烯构件、聚氯乙烯构件或者聚乙烯构件。
7.根据权利要求1或2所述的检测pla2r抗体的试纸条,其特征在于:所述样本垫为表面活性剂和阻断剂的缓冲液浸泡处理后干燥的玻璃纤维构件。
8.一种检测pla2r抗体的检测卡,其特征在于:包括权利要求1-7中任一项所述的试纸条以及包覆所述试纸条的外壳;所述外壳进一步包括底座和卡盖,所述卡盖上设置有观察口和加样口,所述加样口开口于所述样本垫上部,以露出部分或全部所述样本垫区域;所述观察口开口于所硝酸纤维素膜上侧,以露出全部所述检测线。
9.根据权利要求8所述的检测pla2r抗体的检测卡,其特征在于:所述卡盖和底座分别为塑料上壳和塑料下壳,所述塑料上壳扣合所述塑料下壳上后形成卡壳。