用于检测黄热病毒血清中和抗体的试剂盒

本发明涉及一种用于检测黄热病毒血清中和抗体的试剂盒，属于生物工程领域。

背景技术：

1、黄热病毒经由埃及伊蚊传播后可导致黄热病，具有强致死性，重症感染死亡率较高。已有研究结果表明：黄热病毒减毒活疫苗在大部分人群中具有良好的持久保护性，但是越来越多的流行病学研究发现疫苗接种后抗体滴度随时间逐渐下降进而失去保护作用。抗体滴度的降低可能导致突破性感染的发生。因此，检测黄热疫苗接种个体中具有抗病毒活性的中和性抗体的水平具有重要意义。

2、目前市场上的抗体检测试剂盒仅能够检测血清中的普通抗体，用于判断是否发生黄热病毒感染，但无法判断其中具有中和病毒活性的中和抗体水平，无法评估判断接种黄热疫苗后，受种者体内产生的抗体是否具有有效的保护作用。实验室疫苗保护性评价常采用的方法是噬斑减少中和检测(plaque reduction neutralization test，prnt)，prnt90滴度>10认为是产生了保护性抗体。由于prnt的实验操作依赖于生物安全3级(p3)实验室，而且过程繁琐、稳定性差、周期长、主观性强，因此该方法具有很大的局限性，难以在一般的实验室及医院广泛普及。

技术实现思路

1、本发明所要解决的首要技术问题在于提供一种用于检测黄热病毒血清中和抗体的试剂组，可以用于制备检测黄热病毒血清中和抗体试剂盒的用途。

2、本发明所要解决的另一技术问题在于提供一种用于检测黄热病毒血清中和抗体的试剂盒。

3、为实现上述技术目的，本发明采用以下的技术方案：

4、根据本发明实施例的第一方面，提供一种用于检测黄热病毒血清中和抗体的试剂组，为包被黄热病毒e蛋白人源中和抗体5a、黄热病毒e蛋白、5a抗体标准品、一抗、二抗、阴性对照及阳性对照。

5、其中较优地，所述5a抗体标准品为稀释的黄热病毒e蛋白人源中和抗体5a。

6、其中较优地，所述阴性对照为无菌水，所述阳性对照为黄热病毒抗体阳性血清。

7、其中较优地，上述试剂组在用于制备检测黄热病毒血清中和抗体试剂盒中的用途。

8、其中较优地，所述一抗为鼠源抗his标签抗体，二抗为羊抗鼠抗体。

9、根据本发明实施例的第二方面，提供一种用于检测黄热病毒血清中和抗体的试剂盒，其中包括上述的试剂组及elisa检测方法中所需试剂。

10、其中较优地，上述试剂盒的组成优选为：包被黄热病毒e蛋白人源中和抗体5a、黄热病毒e蛋白、5a抗体标准品、一抗、二抗、阴性对照、阳性对照、包被缓冲液、洗涤缓冲液及稀释缓冲液。

11、其中较优地，上述5a抗体标准品为稀释的黄热病毒e蛋白人源中和抗体5a。

12、其中较优地，上述阴性对照为无菌水。

13、其中较优地，上述阳性对照为黄热病毒抗体阳性血清。

14、与现有技术相比较，本发明具有以下的技术效果：

15、本发明可以高特异性和高灵敏度地检测血清中具有中和活性的黄热病毒e蛋白的中和抗体。本发明利用待测血清样本和5a抗体竞争结合e蛋白，随后检测未与血清结合但仍与5a抗体结合的e蛋白量，即可有效地检测出样本中是否含有相应的中和抗体。另外，采用梯度稀释后的5a抗体绘制标准曲线，可对待测样本中相应中和抗体进行定量。本试剂盒重复性好，结果可靠，适用于众多中小型实验室和临床机构推广应用。

16、本发明有效地解决了检测黄热病毒e蛋白的中和抗体中黄热病毒e蛋白抗原包被方法导致的特异性差的技术问题。本发明还解决了利用包被抗his标签抗体检测方法中od值较低与阴性对照血清无明显差异，导致无法检测的技术问题。相比现有技术中存在的问题，本发明对黄热病毒中和抗体检测的特异性强，灵敏度高，无需特殊设备，而且大大缩短了检测时间(4小时即可出具结果)。

技术特征：

1.一种用于检测黄热病毒血清中和抗体的试剂组，其特征在于：

2.如权利要求1所述的用于检测黄热病毒血清中和抗体的试剂组，其特征在于：

3.如权利要求1所述的用于检测黄热病毒血清中和抗体的试剂组，其特征在于：

4.如权利要求1所述的用于检测黄热病毒血清中和抗体的试剂组，其特征在于：

5.权利要求1至4中任意一项所述试剂组在用于制备检测黄热病毒血清中和抗体试剂盒中的用途。

6.一种用于检测黄热病毒血清中和抗体的试剂盒，其特征在于包括权利要求1所述的试剂组及elisa检测方法中所需试剂。

7.如权利要求6所述的用于检测黄热病毒血清中和抗体的试剂盒，其特征在于组成为：包被黄热病毒e蛋白人源中和抗体5a、黄热病毒e蛋白、5a抗体标准品、一抗、二抗、阴性对照、阳性对照、包被缓冲液、tris缓冲液、封闭缓冲液、洗涤缓冲液、稀释缓冲液及终止液。

8.如权利要求7所述的用于检测黄热病毒血清中和抗体的试剂盒，其特征在于：

9.如权利要求7所述的用于检测黄热病毒血清中和抗体的试剂盒，其特征在于：

10.如权利要求7所述的用于检测黄热病毒血清中和抗体的试剂盒，其特征在于：

技术总结
本发明公开了一种用于检测黄热病毒血清中和抗体的试剂盒。其中的试剂组为包被黄热病毒E蛋白人源中和抗体5A、黄热病毒E蛋白、5A抗体标准品、一抗、二抗、阴性对照及阳性对照。本发明对黄热病毒中和抗体检测的特异性强，灵敏度高，无需特殊设备，而且大大缩短了检测时间(4小时即可出具结果)。另外，本试剂盒重复性好，结果可靠，适用于众多中小型实验室和临床机构推广应用。

技术研发人员：杨光,黄敏君,郭东星,李晶晶
受保护的技术使用者：首都医科大学附属北京友谊医院
技术研发日：
技术公布日：2024/4/17