一种磷酸西格列汀-IM1中水合肼测定分析方法与流程

本申请涉及药品检测，更具体的说，它涉及一种磷酸西格列汀-im1中水合肼测定分析方法。

背景技术：

1、磷酸西格列汀-im1是一种口服抗高血糖药物，通过增加活性肠促胰岛激素的水平，可以实现对2型糖尿病患者血糖的控制，具有安全性良好、副作用轻等优点。磷酸西格列汀-im1的合成路径较多，代表性的是以3-r-(1r-1-苯基乙基氨基)-4-(2,4,5-三氟苯甲基)-2-丁烯酸甲酯与3-(三氟甲基)-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡嗪盐酸盐缩合后，再经还原、成盐制得。其中，反应原料3-(三氟甲基)-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡嗪盐酸盐以肼为起始原料制备，而肼可与溶剂中的水分结合生成水合肼。

2、虽然水合肼在药物合成中广泛使用，但是其经人体酶解后具有较高的生物活性，可与人体内遗传物质发生分子结合作用产生基因毒性，因此在磷酸西格列汀-im1的合成工艺中需要对水合肼含量进行严格控制。

3、目前对水合肼的检测方法主要有化学滴定法，液相色谱法，电化学检测法等，但这些检测方法都存在检测的局限性，无法实现水合肼的微量检测。

技术实现思路

1、为了实现微量检测，本申请提供一种磷酸西格列汀-im1中水合肼测定分析方法。

2、本申请提供一种磷酸西格列汀-im1中水合肼测定分析方法，采用如下技术方案：

3、一种磷酸西格列汀-im1中水合肼测定分析方法，包括如下步骤：

4、(1)储备溶液的制备：取磷酸西格列汀-im1制备供试品溶液，取水合肼制备对照品溶液；

5、(2)测试溶液的制备：供试品溶液和对照品溶液分别加入衍生试剂，密封，置于50℃烘箱中衍生反应3-5h，反应后冷却至室温，得到供试品衍生产物和对照品衍生产物，备用；

6、(3)测定：采用高效液相色谱法对供试品衍生产物和对照品衍生产物进行检测。

7、通过采用上述技术方案，水合肼作为较强还原剂，分子量低、不含碳原子，不宜直接测定，但水合肼可通过衍生化方法生成可用于量化的衍生产物。所建立的分析方法灵敏度高、专属性强、易操作，适用于磷酸西格列汀-im1中微量水合肼的测定。

8、可选地，所述高效液相色谱法的检测条件如下：

9、以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

10、流动相a：水；

11、流动相b：乙腈；

12、检测波长：313nm；

13、流速：1.0ml/min；

14、进样体积：5μl；

15、柱温：40℃；

16、洗脱方式：线性梯度洗脱。

17、可选地，所述洗脱梯度的程序为：

18、0min，流动相a的体积分数为50％，流动相的体积分数为50％；

19、10min，流动相a的体积分数为5％，流动相的体积分数为95％；

20、15min，流动相a的体积分数为5％，流动相的体积分数为95％；

21、15.1min，流动相a的体积分数为50％，流动相的体积分数为50％；

22、20min，流动相a的体积分数为50％，流动相的体积分数为50％。

23、可选地，所述十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱的型号为poroshell 120ec-c18，管柱规格为4.6×75mm，填料粒径为2.7μm。

24、通过采用上述技术方案，能够缩短分析周期，通过在分析过程中逐渐改变流动相组成，使各组分能在最短时间内实现最佳分离，从而提高分析率，衍生产物的保留时间能够控制在5min之间。

25、封端的碳十八固定相，对酸性、碱性、中性化合物都有良好的选择性，能够得到良好的分离度和高柱效，目标峰峰型良好，峰型尖锐且对称，从而节省时间和经费。

26、可选地，所述衍生试剂为含0.5wt％苯甲醛的甲醇溶液。

27、通过采用上述技术方案，苯甲醛与水合肼能够缩合得到水合肼衍生物苯甲醛腙，在本反应体系中，苯甲醛腙的稳定性较好，且苯甲醛腙在313nm处具有紫外特征吸收，适用于高效液相色谱法。

28、可选地，所述供试品溶液和对照品溶液中的溶剂为含50wt％四氢呋喃的水溶液。

29、通过采用上述技术方案，磷酸西格列汀-im1和水合肼在四氢呋喃水溶液中的溶解度较好，且对苯甲醛腙出峰无干扰。苯甲醛腙在体系中不易生成副产物，操作较为简便，苯甲醛腙的峰型尖锐且对称，基本没有拖尾现象。

30、可选地，所述供试品溶液中，磷酸西格列汀-im1的浓度为1～2mg/ml，优选为1.5mg/ml。

31、可选地，所述对照品溶液中，水合肼的浓度为0.03～0.60μg/ml。

32、可选地，所述衍生试剂与所述供试品溶液或对照品溶液的体积比为1:(1.5～2.5)，优选为1:2。

33、通过采用上述技术方案，检测限较低，检测灵敏度高，能够对微量水合肼衍生物进行检测。对于药品而言，可以检测出药品中是否含有基因毒性杂质，从而确保药品的安全性和有效性，并且有助于推动药品研究和开发。

34、可选地，所述步骤2中，衍生反应的时间优选为5h，冷却时间优选为1h。

35、通过采用上述技术方案，在衍生反应中，使得样品反应完全，反应产物冷却至室温再进样，有助于解决进样时温度过高导致持续反应的问题，实现连续多次检测所得结果之间的一致性。

36、综上所述，本申请具有以下有益效果：

37、本申请采用0.5wt％苯甲醛的甲醇溶液作为衍生化试剂，通过高效液相色谱法能够检测磷酸西格列汀-im1中的微量水合肼，灵敏度较高，提高药品的安全性和有效性；

技术特征：

1.一种磷酸西格列汀-im1中水合肼测定分析方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的磷酸西格列汀-im1中水合肼测定分析方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的检测条件如下：

3.根据权利要求2所述的磷酸西格列汀-im1中水合肼测定分析方法，其特征在于，所述洗脱梯度的程序为：

4.根据权利要求2所述的磷酸西格列汀-im1中水合肼测定分析方法，其特征在于：所述十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱的型号为poroshell 120 ec-c18，管柱规格为4.6×75mm，填料粒径为2.7μm。

5.根据权利要求1所述的磷酸西格列汀-im1中水合肼测定分析方法，其特征在于：所述衍生试剂为含0.5wt%苯甲醛的甲醇溶液。

6.根据权利要求1所述的磷酸西格列汀-im1中水合肼测定分析方法，其特征在于：所述供试品溶液和对照品溶液中的溶剂为含50wt%四氢呋喃的水溶液。

7.根据权利要求1所述的磷酸西格列汀-im1中水合肼测定分析方法，其特征在于：所述供试品溶液中，磷酸西格列汀-im1的浓度为1~2 mg/ml，优选为1.5 mg/ml。

8.根据权利要求1所述的磷酸西格列汀-im1中水合肼测定分析方法，其特征在于：所述对照品溶液中，水合肼的浓度为0.03~0.60μg/ml。

9.根据权利要求1所述的磷酸西格列汀-im1中水合肼测定分析方法，其特征在于：所述衍生试剂与所述供试品溶液或对照品溶液的体积比为1:（1.5~2.5），优选为1:2。

10.根据权利要求1所述的磷酸西格列汀-im1中水合肼测定分析方法，其特征在于：所述步骤2中，衍生反应的时间优选为5h，冷却时间优选为1h。

技术总结
本申请涉及药品检测技术领域，具体公开了一种磷酸西格列汀‑IM1中水合肼测定分析方法。磷酸西格列汀‑IM1中水合肼测定分析方法，包括如下步骤：（1）储备溶液的制备：取磷酸西格列汀‑IM1制备供试品溶液，取水合肼制备对照品溶液；（2）测试溶液的制备：供试品溶液和对照品溶液分别加入衍生试剂，密封，置于50℃烘箱中衍生反应3‑5h，反应后冷却至室温，得到供试品衍生产物和对照品衍生产物，备用；（3）测定：采用高效液相色谱法对供试品衍生产物和对照品衍生产物进行检测。本申请的测定分析方法具有灵敏度高的效果，能够检测磷酸西格列汀‑IM1中的微量水合肼。

技术研发人员：唐宏渊,赵巧鹃,袁佳奎,潘丹娇
受保护的技术使用者：浙江江北药业有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/21