本发明属于试剂盒检测领域,尤其涉及一种胰蛋白酶原-2检测试剂盒及其制备方法。
背景技术:
1、胰蛋白酶,是蛋白酶的一种,ec 3.4.4.4,是从牛、羊、猪的胰脏提取的一种丝氨酸蛋白水解酶。在脊椎动物中,作为消化酶而起作用。在胰脏是胰蛋白酶的前体胰蛋白酶原被合成后,作为胰液的成分而分泌,受肠激酶,或胰蛋白酶的限制分解成为活化胰蛋白酶,是肽链内切酶,它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切断。它不仅起消化酶的作用,而且还能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前体,起活化作用。是特异性最强的蛋白酶,在决定蛋白质的氨基酸排列中,它成为不可缺少的工具。
2、而胰蛋白酶原-2是辅助诊断胰腺炎的特异性和敏感性指标,但是目前针对胰蛋白酶原-2的检测不准确,因此,提供一种检测灵敏的胰蛋白酶原-2检测试剂盒成为人们亟待解决的问题。
技术实现思路
1、本发明的主要目的在于提供一种胰蛋白酶原-2检测试剂盒及其制备方法,以克服现有技术中的不足。
2、为实现前述发明目的,本发明采用的技术方案包括:
3、根据本发明实施例的第一方面,提供了一种胰蛋白酶原-2检测试剂盒,包括金标液包被的金标垫,所述金标液包括重悬液和胶体金标记的胰蛋白酶原-2抗体,所述重悬液包括按重量份数计算的以下组分:0.2-0.4份tris-hcl、0.2-0.4份柠檬酸三钠、1-2份bsa、0.06-0.08份蛋白酶k、0.6-0.8份吐温、0.6-0.8份亚氨基乙二酸。
4、进一步的,所述重悬液包括按重量份数计算的以下组分:0.2-0.4份tris-hcl、0.2-0.4份柠檬酸三钠、1-2份bsa、0.06-0.08份蛋白酶k、0.6-0.8份吐温、0.6-0.8份亚氨基乙二酸。
5、进一步的,所述重悬液包括按重量份数计算的以下组分:0.2-0.4份tris-hcl、0.2-0.4份柠檬酸三钠、1-2份bsa、0.06-0.08份蛋白酶k、0.6-0.8份吐温、0.6-0.8份亚氨基乙二酸。
6、进一步的,所述重悬液包括按重量份数计算的以下组分:0.2-0.4份tris-hcl、0.2-0.4份柠檬酸三钠、1-2份bsa、0.06-0.08份蛋白酶k、0.6-0.8份吐温、0.6-0.8份亚氨基乙二酸。
7、根据本发明实施例的第二方面,提供了一种胰蛋白酶原-2检测试剂盒的制备方法,包括以下步骤:
8、s1、将胰蛋白酶原-2抗体加入胶体金溶液中,获得胶体金标记的胰蛋白酶原-2抗体溶液;
9、s2、将所述胶体金标记的胰蛋白酶原-2抗体溶液离心,收集沉淀物,获得所述胶体金标记的胰蛋白酶原-2抗体;
10、s3、将所述胶体金标记的胰蛋白酶原-2抗体用重悬液进行重悬,获得所述金标液。
11、进一步的,所述离心的转速为5000-7000r/min,离心时间为10-20min。
12、进一步的,所述金标液的制备方法包括将所述胶体金标记的胰蛋白酶原-2抗体使用所述重悬液复溶。
13、进一步的,所述重悬液的制备方法包括以下步骤:
14、①、将tris-hcl、柠檬酸三钠、bsa和蛋白酶k混合均匀,期间施加频率为10-20khz的超声波进行处理,得到混合液;
15、②、将所述混合液与吐温、亚氨基乙二酸混合均匀,制得所述重悬液。
16、进一步的,所述超声波每隔3min停止1-5s,且施加所述超声波前将混合液加热至20-25℃。
17、进一步的,所述重悬液的ph为7-9。
18、与现有技术相比,本发明的优点包括:
19、本发明提供一种胰蛋白酶原-2检测试剂盒及其制备方法,所述胰蛋白酶原-2检测试剂盒包括金标液包被的金标垫,所述金标液包括重悬液和胶体金标记的胰蛋白酶原-2抗体,能够对胰蛋白酶原-2准确检测,且本发明的重悬液能够消除基质效应引起的测试结果不确定的问题,从而保证试剂盒的灵敏度,提升检测效果。
1.一种胰蛋白酶原-2检测试剂盒,其特征在于,包括金标液包被的金标垫,所述金标液包括重悬液和胶体金标记的胰蛋白酶原-2抗体,所述重悬液包括按重量份数计算的以下组分:0.2-0.4份tris-hcl、0.2-0.4份柠檬酸三钠、1-2份bsa、0.06-0.08份蛋白酶k、0.6-0.8份吐温、0.6-0.8份亚氨基乙二酸。
2.根据权利要求1所述的胰蛋白酶原-2检测试剂盒,其特征在于:所述重悬液包括按重量份数计算的以下组分:0.2-0.4份tris-hcl、0.2-0.4份柠檬酸三钠、1-2份bsa、0.06-0.08份蛋白酶k、0.6-0.8份吐温、0.6-0.8份亚氨基乙二酸。
3.根据权利要求1所述的胰蛋白酶原-2检测试剂盒,其特征在于:所述重悬液包括按重量份数计算的以下组分:0.2-0.4份tris-hcl、0.2-0.4份柠檬酸三钠、1-2份bsa、0.06-0.08份蛋白酶k、0.6-0.8份吐温、0.6-0.8份亚氨基乙二酸。
4.根据权利要求1所述的胰蛋白酶原-2检测试剂盒,其特征在于:所述重悬液包括按重量份数计算的以下组分:0.2-0.4份tris-hcl、0.2-0.4份柠檬酸三钠、1-2份bsa、0.06-0.08份蛋白酶k、0.6-0.8份吐温、0.6-0.8份亚氨基乙二酸。
5.一种如权利要求1-4中任一项所述胰蛋白酶原-2检测试剂盒的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
6.根据权利要求5所述胰蛋白酶原-2检测试剂盒的制备方法,其特征在于:所述离心的转速为5000-7000r/min,离心时间为10-20min。
7.根据权利要求5所述胰蛋白酶原-2检测试剂盒的制备方法,其特征在于:所述金标液的制备方法包括将所述胶体金标记的胰蛋白酶原-2抗体使用所述重悬液复溶。
8.根据权利要求5所述胰蛋白酶原-2检测试剂盒的制备方法,其特征在于,所述重悬液的制备方法包括以下步骤:
9.根据权利要求8所述胰蛋白酶原-2检测试剂盒的制备方法,其特征在于:所述超声波每隔3min停止1-5s,且施加所述超声波前将混合液加热至20-25℃。
10.根据权利要求8所述胰蛋白酶原-2检测试剂盒的制备方法,其特征在于:所述重悬液的ph为7-9。