一种D-二聚体检测抗干扰试剂及其试剂盒的制作方法

文档序号:38085627发布日期:2024-05-28 19:08阅读:106来源:国知局

本发明涉及d-二聚体检测,尤其涉及一种d-二聚体检测抗干扰试剂及其试剂盒。


背景技术:

1、d-二聚体是交联纤维蛋白经纤溶酶作用后的终末产物,同时也是交联纤维蛋白经纤溶酶水解作用所产生的一种特异性纤维蛋白降解产物,d-二聚体水平的增高反映了体内继发性纤溶活性增强,可作为高凝状态较为敏感的指标,是纤维蛋白降解产物和纤溶亢进的分子标志物,当血管内血栓形成时产生大量交联纤维蛋白,纤溶酶活性继发性增强,血浆d-二聚体水平增高,因此,检测血浆d-二聚体水平对血栓性疾病的诊断及溶栓治疗监测等有重要意义,也是鉴别原发性和继发性纤溶的良好指标。

2、现有技术中,检测d-二聚体的方法主要有elisa法、免疫金标定量、乳胶凝集法和免疫比浊法,前两种方法灵敏度、特异性高,但试剂盒供应少、成本高、操作复杂、检测耗时,需至少1个小时才能报出结果,不适合急诊情况下的检测应用。乳胶凝集法虽操作简便,费用不高,适用于不同地区和级别的医院和诊所;但其灵敏度不高,仅能检出400μg/l水平的d-二聚体,且局限于d-二聚体的定性或半定量。免疫比浊法测定d-二聚体的原理是将d-二聚体的单抗吸附于大小适中、均匀的聚苯乙烯颗粒上,当遇到标本中的d-二聚体抗原时,则使聚苯乙烯颗粒发生聚集,其程度与标本中含有的d-二聚体抗原量成正比。由于发生凝聚的区域内具有一个特殊的结构,即一个单抗有两个反应位点,这样一个单抗足以引发一次凝聚反应,且反应的程度与抗原的浓度成正比关系。但是市面上很多d-二聚体检测试剂存在均匀性差,稳定期短等问题,同时,在免疫测定中多会受到如类风湿因子和血红蛋白等干扰物质影响的情况,检测准确度较低。

3、中国专利cn110702895a公开了一种d二聚体检测试剂和方法、试剂制备方法及聚乙二醇的应用,其中d二聚体检测试剂包括聚乙二醇、缓冲液体系和无机盐;聚乙二醇为相对分子量6000 10000的聚乙二醇;无机盐用于调节缓冲液体系离子强度,利用低分子量聚乙二醇对血红蛋白与d二聚体相互作用进行干扰,减小血红蛋白对d二聚体与特异性抗体反应的影响,起到抗血红蛋白干扰的作用,提高了d二聚体检测的准确性。

4、但是现有的检测试剂并不能避免其他干扰因子对准确性的影响,有待进一步提升。


技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种d-二聚体检测抗干扰试剂及其试剂盒,能够避免血红蛋白、类风湿因子、胆红素、甘油三酯等干扰物质的干扰,使测定结果更准确。

2、为了实现上述发明目的,本发明提供以下技术方案:

3、本发明提供了一种d-二聚体检测抗干扰试剂,包括以下组分:

4、脂肪酶、异嗜性抗体阻断剂和盐离子。

5、优选的,所述脂肪酶、异嗜性抗体阻断剂和盐离子的质量比为0.01~1:0.01~1:0.01~10。

6、优选的,所述盐离子选自氯化钠、氯化钾、乙二胺四乙酸二钠、亚铁氰化钾中的一种或几种。

7、本发明还提供了一种d-二聚体检测试剂盒,包括试剂1和试剂2;

8、所述试剂1以缓冲液为溶剂,含有表面活性剂、防腐剂和上述d-二聚体检测抗干扰试剂;

9、所述试剂2以缓冲液为溶剂,含有表面活性剂、盐离子、稳定剂、防腐剂和d-二聚体致敏胶乳颗粒;

10、在试剂1中,所述d-二聚体检测抗干扰试剂的浓度为0.03~12%。

11、优选的,所述缓冲液的缓冲ph为6.0~9.0,浓度为20~300mm。

12、优选的,所述缓冲液选自硼酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、mes缓冲液和tris缓冲液中的一种或几种。

13、优选的,所述表面活性剂中含有a组分和b组分;

14、所述a组分选自聚乙二醇6000、聚乙二醇8000和聚乙二醇单甲醚甲基丙烯酸酯中的一种或几种;

15、所述b组分选自吐温20、吐温80、tritonx-100、brij-35中的一种或几种;

16、在试剂1或试剂2中,所述a组分的浓度为0.05~8%;

17、在试剂1或试剂2中,所述b组分的浓度为0.01~3%;

18、在表面活性剂中,所述a组分与b组分的体积比为0.01~800:1。

19、优选的,所述盐离子选自氯化钠、氯化钾、乙二胺四乙酸二钠、亚铁氰化钾中的一种或几种。

20、优选的,所述防腐剂选自叠氮化钠、proclin300、苯甲酸钠中的一种或几种;

21、在试剂1或试剂2中,所述防腐剂的浓度为0.01~0.2%;

22、所述稳定剂选自甘油、bsa、海藻糖、乳糖、甘氨酸、蔗糖中的一种或几种;

23、在试剂2中,所述稳定剂的浓度为0.2~15%。

24、优选的,所述d-二聚体致敏胶乳颗粒为鼠抗人d-二聚体单克隆抗体与聚苯乙烯微球通过化学偶联得到的致敏胶乳颗粒;

25、所述d-二聚体致敏胶乳颗粒的微球粒径为80~300nm;

26、在试剂2中,所述d-二聚体致敏胶乳颗粒的浓度为0.8~4.5mg/ml。

27、本发明的有益效果:

28、本发明提供的d-二聚体检测抗干扰试剂中,各组分相互配合,能够有效避免检测样品中血红蛋白、类风湿因子、胆红素、甘油三酯等干扰物质的干扰,使测定结果更准确。

29、本发明提供的d-二聚体检测试剂盒中试剂不易发生聚沉、均匀性较优;还能消除样本中干扰物质对试剂测定结果的干扰作用,使结果更准确;同时试剂的保存期限较长,适合在产业中推广应用。



技术特征:

1.一种d-二聚体检测抗干扰试剂,其特征在于,包括以下组分:

2.根据权利要求1所述的d-二聚体检测抗干扰试剂,其特征在于,所述脂肪酶、异嗜性抗体阻断剂和盐离子的质量比为0.01~1:0.01~1:0.01~10。

3.根据权利要求1或2所述的d-二聚体检测抗干扰试剂,其特征在于,所述盐离子选自氯化钠、氯化钾、乙二胺四乙酸二钠、亚铁氰化钾中的一种或几种。

4.一种d-二聚体检测试剂盒,其特征在于,包括试剂1和试剂2;

5.根据权利要求4所述的d-二聚体检测试剂盒,其特征在于,所述缓冲液的缓冲ph为6.0~9.0,浓度为20~300mm。

6.根据权利要求5所述的d-二聚体检测试剂盒,其特征在于,所述缓冲液选自硼酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、mes缓冲液和tris缓冲液中的一种或几种。

7.根据权利要求4所述的d-二聚体检测试剂盒,其特征在于,所述表面活性剂中含有a组分和b组分;

8.根据权利要求4所述的d-二聚体检测试剂盒,其特征在于,所述盐离子选自氯化钠、氯化钾、乙二胺四乙酸二钠、亚铁氰化钾中的一种或几种。

9.根据权利要求4所述的d-二聚体检测试剂盒,其特征在于,所述防腐剂选自叠氮化钠、proclin300、苯甲酸钠中的一种或几种;

10.根据权利要求4所述的d-二聚体检测试剂盒,其特征在于,所述d-二聚体致敏胶乳颗粒为鼠抗人d-二聚体单克隆抗体与聚苯乙烯微球通过化学偶联得到的致敏胶乳颗粒;


技术总结
本发明提供了一种D‑二聚体检测抗干扰试剂及其试剂盒,属于D‑二聚体检测技术领域。本发明提供的D‑二聚体检测抗干扰试剂中,各组分相互配合,解决了现有的检测试剂并不能避免其他干扰因子对准确性影响的问题。本发明提供的D‑二聚体检测抗干扰试剂能够避免血红蛋白、类风湿因子、胆红素、甘油三酯等干扰物质的干扰,使测定结果更准确。本发明提供的D‑二聚体检测试剂盒中试剂不易发生聚沉、均匀性较优;还能消除样本中干扰物质对试剂测定结果的干扰作用,使结果更准确;同时试剂的保存期限较长,适合在产业中推广应用。

技术研发人员:陈莹
受保护的技术使用者:武汉市长立生物技术有限责任公司
技术研发日:
技术公布日:2024/5/27
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