本申请属于生物化学领域,主要涉及用于检测抗利妥昔单抗中和抗体的方法。
背景技术:
1、由于利妥昔单抗结构和作用机理的特殊性,针对不同结构域产生的抗药抗体(anti-drug antibody,ada)均可能具有中和活性,通过多种机制阻断利妥昔单抗内化,或阻碍细胞毒素分子释放,从而降低细胞杀伤效应或导致脱靶毒性。因此,利妥昔单抗的中和抗体检测方法的设计和开发不同于常规抗体类药物,且具有很大的挑战,这些挑战包括:基于细胞的抗体难以区分抗体的表位、难以选择合适的阳性对照抗体、细胞系的变异较大、基质中的药物干扰较大、常规方法无法避免基质中的干扰等。
2、因此,开发新的用于检测抗利妥昔单抗中和抗体的方法具有重要的意义。
技术实现思路
1、本申请提供了检测生物样品中抗利妥昔单抗中和抗体的方法,所述方法包括:
2、对所述生物样品中的抗利妥昔单抗中和抗体进行亲和捕获;
3、对所述亲和捕获的抗利妥昔单抗中和抗体进行酸解离;
4、向酸解离后的抗利妥昔单抗中和抗体中加入中和试剂和包含利妥昔单抗的溶液,获得混合液;
5、向所述混合液中加入抗体依赖性细胞介导的细胞毒性作用(adcc)的靶细胞和效应细胞进行共孵育;以及
6、基于adcc效应测定所述生物样品中的抗利妥昔单抗中和抗体。
7、在一些实施方案中,所述方法还包括在所述亲和捕获前对所述生物样品进行处理的步骤,并且其中所述处理为酸处理。
8、在一些实施方案中,所述亲和捕获使用包含利妥昔单抗的捕获试剂进行。
9、在一些实施方案中,所述酸解离使用浓度为300mm,ph 2.0的醋酸进行。
10、在一些实施方案中,所述中和试剂是浓度为1m,ph 9.5的三羟甲基氨基甲烷溶液。
11、在一些实施方案中,所述中和试剂与所述解离后的抗利妥昔单抗中和抗体的体积比为1:2。
12、在一些实施方案中,加入的所述包含利妥昔单抗的溶液的体积为加入的所述酸解离后的抗利妥昔单抗中和抗体的体积与所述中和试剂的体积之和。
13、在一些实施方案中,所述生物样品为血清。
14、在一些实施方案中,所述adcc靶细胞为wil2-s细胞。
15、在一些实施方案中,所述adcc效应细胞为jurkat/nfat-luc+fcγriiia转基因细胞。
1.检测生物样品中抗利妥昔单抗中和抗体的方法,所述方法包括:
2.如权利要求1所述的方法,其还包括在所述亲和捕获前对所述生物样品进行处理的步骤,并且其中所述处理为酸处理。
3.如权利要求1所述的方法,其中所述亲和捕获使用包含利妥昔单抗的捕获试剂进行。
4. 如权利要求1所述的方法,其中所述酸解离使用浓度为300mm,ph 2.0的醋酸进行。
5. 如权利要求1所述的方法,其中所述中和试剂是浓度为1m,ph 9.5的三羟甲基氨基甲烷溶液。
6.如权利要求1所述的方法,其中所述中和试剂与所述酸解离后的抗利妥昔单抗中和抗体的体积比为1:2。
7.如权利要求1所述的方法,加入的所述包含利妥昔单抗的溶液的体积为加入的所述酸解离后的抗利妥昔单抗中和抗体的体积与所述中和试剂的体积之和。
8.如权利要求1所述的方法,其中所述生物样品为血清。
9.如权利要求1所述的方法,其中所述adcc靶细胞为wil2-s细胞。
10.如权利要求1所述的方法,其中所述adcc效应细胞为jurkat/nfat-luc+fcγriiia转基因细胞。