本发明属于药物分析，具体涉及一种伏立康唑中4-（1,1-二溴代乙基）-6-氯-5-氟嘧啶的检测方法。
背景技术：
1、伏立康唑，化学名称为(2r,3s)-2-(2,4-二氟苯基)-3-(5-氟-4-嘧啶基)-1-(1h-1,2,4-三唑-1-基)-2-丁醇，是一种有机化合物，化学式为c16h14f3n5o，是第二代三唑类抗真菌化合物，可作用于严重的真菌感染，由于伏立康睡抗真菌谱广、抗菌效力强，安全性好，且国内市场对抗真菌药物的需求增长迅速，因此市场前景巨大。
2、4-（1,1-二溴代乙基）-6-氯-5-氟嘧啶，（简称：双溴杂质）化学结构：，是伏立康唑的合成过程中可能产生的潜在副产物，可能残留在伏立康唑中，属于基因毒性杂质，因此，在伏立康唑生产过程中需要严格控制其含量，参考ich m7毒理学阈值ttc =1.5µg/天，而伏立康唑片剂中伏立康唑的最大日剂量为0.8g/天，根据公式限度=ttc/最大日剂量，计算得到4-（1,1-二溴代乙基）-6-氯-5-氟嘧啶在伏立康唑原料药中的限度为1.875ppm。
3、目前鲜有文献报道4-（1,1-二溴代乙基）-6-氯-5-氟嘧啶的检测方法，作为医药行业，严格控制产品中的杂质含量是非常必要的，对物料杂质的研究有助于药物的合成工艺优化和质量控制，研究伏立康唑中4-（1,1-二溴代乙基）-6-氯-5-氟嘧啶的检验方法，为评价伏立康唑药物的质量提供了较好的参考，也为优化伏立康唑药物合成工艺提供技术依据，对确定伏立康唑中4-（1,1-二溴代乙基）-6-氯-5-氟嘧啶所引起的不良反应具有重大意义。
4、本发明公开了采用lc-ms测定伏立康唑中4-（1,1-二溴代乙基）-6-氯-5-氟嘧啶的检测方法，通过使用lc-ms方法进行检测，为解决伏立康唑中4-（1,1-二溴代乙基）-6-氯-5-氟嘧啶的检测问题，提供了一种便捷、高效、准确的检测方法，该方法能检测伏立康唑中4-（1,1-二溴代乙基）-6-氯-5-氟嘧啶的含量，从而有效保障用药安全，便于伏立康唑的质量控制。
技术实现思路
1、本发明提供一种采用lc-ms测定伏立康唑中4-（1,1-二溴代乙基）-6-氯-5-氟嘧啶的检测方法，为解决伏立康唑中4-（1,1-二溴代乙基）-6-氯-5-氟嘧啶的检测问题，提供了一种便捷、高效、准确的检测方法，该方法能检测伏立康唑中4-（1,1-二溴代乙基）-6-氯-5-氟嘧啶的含量，从而有效保障用药安全，便于伏立康唑的质量控制，该方法便捷、高效、准确，在系统适用性、重复性、专属性、准确度方面完全符合中国药典方法验证的指导原则，可用于伏立康唑的质量控制。
2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
3、一种伏立康唑中4-（1,1-二溴代乙基）-6-氯-5-氟嘧啶的检验方法，其特征在于，所述方法是将4-（1,1-二溴代乙基）-6-氯-5-氟嘧啶与衍生试剂乙胺进行柱前衍生化，衍生产物在lc-ms中检测，所述检测方法包括以下步骤：
4、（1）配制溶液，分别配制空白溶液、灵敏度溶液、对照品溶液和供试品溶液；
5、（2）测定方法：采用lc-ms/ms测定伏立康唑中4-（1,1-二溴代乙基）-6-氯-5-氟嘧啶的含量，待系统稳定后，分别进空白溶液、灵敏度溶液、对照品溶液和供试品溶液，记录色谱图；
6、色谱条件如下:
7、色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，进样量：0.2-1.0µl，柱温：30±5℃，流速：0.5±0.1ml/min，以甲酸溶液为流动相a，以乙腈为流动相b，采用梯度洗脱；
8、质谱条件如下：离子源类型：esi，干燥气温度：320℃，干燥气流速：8 l/min，雾化气压力：40 psi，鞘气温度：350℃，鞘气流速：10 l/min，毛细管电压：3500v，极性：正极，扫描模式：mrm，emv：200v，开关阀的切换时间设置：0.0min：to waste；6.0min：to ms；10.0min：to waste；
9、。
10、进一步的，所述洗脱梯度为：
11、。
12、进一步的，所述流动相a：甲酸：水的体积比为1:1000；
13、所述空白溶液：取适量乙胺置于容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，50-70℃水浴加热0.5-2h，冷却至室温；
14、所述对照品溶液：取适量4-（1,1-二溴代乙基）-6-氯-5-氟嘧啶对照品乙胺置于容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，50-70℃水浴加热0.5-2h，冷却至室温；
15、灵敏度溶液：取适量4-（1,1-二溴代乙基）-6-氯-5-氟嘧啶对照品乙胺置于容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，50-70℃水浴加热0.5-2h，冷却至室温；
16、供试品溶液：取适量供试品置于容量瓶中，加入适量乙胺和适量稀释液溶解，再用稀释液稀释至刻度，摇匀，50-70℃水浴加热0.5-2h，冷却至室温；所述稀释液为乙腈；所述色谱柱为poroshell 120 ec-c18 2.7 μm，4.6×100mm。
17、本发明公开了伏立康唑中4-（1,1-二溴代乙基）-6-氯-5-氟嘧啶的检测方法，为解决伏立康唑中4-（1,1-二溴代乙基）-6-氯-5-氟嘧啶的检测问题，提供了一种便捷、高效、准确的检测方法，该方法能检测伏立康唑中4-（1,1-二溴代乙基）-6-氯-5-氟嘧啶的含量，从而有效保障用药安全。
1.一种伏立康唑中4-（1,1-二溴代乙基）-6-氯-5-氟嘧啶的检验方法，其特征在于，所述方法是将4-（1,1-二溴代乙基）-6-氯-5-氟嘧啶与衍生试剂乙胺进行柱前衍生化，衍生产物在lc-ms中检测，所述检测方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的检验方法，其特征在于，所述洗脱梯度为：
3.根据权利要求2所述的检验方法，其特征在于，所述流动相a：甲酸：水的体积比为1:1000；