一种检测司盘85含量的方法与流程

本发明涉及药物分析，尤其涉及一种检测司盘85含量的方法。

背景技术：

1、目前，大多数亚单位疫苗（包括天然产物、重组产物以及合成肽）都是弱抗原，亚单位抗原单独给药往往是失败的，可能原因是免疫系统的错误处理、快速清除、刺激不适当的免疫反应以及缺乏关键的 b 细胞或 t 细胞表位等。

2、为了增强抗原的免疫原性、免疫应答速度及持久性，疫苗生产中常加入铝佐剂、mf59等佐剂，其中，疫苗制品中使用的司盘85（span85）成分。

3、司盘85（sorbitan trioleate）是淡黄色至黄色油状液体，在水中不溶，分子式为c60h108o8，分子量为957.495，沸点为887.4±65.0 ℃，属于难挥发物质，不能直接进行气相色谱分析。

技术实现思路

1、为了解决上述技术问题中的至少之一，本发明提供了一种检测司盘85含量的方法。

2、作为一个方面，本发明提供了一种检测司盘85含量的方法，方法包括如下步骤：待测样品前处理：将待测样品与破乳剂和有机溶剂混合，进行破乳处理，得到上清液，将上清液进行酯化反应，得到司盘85衍生物溶液，利用饱和nacl溶液对司盘85衍生物溶液进行处理，得到待测进样样品；标准曲线方程的建立：配制至少三种不同浓度的司盘85的标准溶液，按照与待测样品前处理相同的步骤处理标准溶液，利用气相色谱进行检测，根据检测结果建立司盘85衍生物色谱峰面积-司盘85浓度的标准曲线方程；待测样品检测：利用气相色谱对待测进样样品进行检测，根据检测结果和标准曲线方程计算得到待测样品中司盘85的含量。

3、在本发明的一些实施例中，其中，破乳处理的步骤包括：超声、离心，得到上清液。

4、在本发明的一些实施例中，其中，超声的时间为0.1~20min，例如，可以是5min、8.9min、11.3min、14.6min、16.8min、17.3min、19.6min等；和/或，离心的加速度为1000~15000g，例如，可以是1509g、3896g、8623g、9836g、10000g、11239g、15000g、14239g等，时间为0.1~20min，例如，可以是6.8min、3min、11.4min、14.9min、19.6min等。

5、在本发明的一些实施例中，其中，酯化反应的步骤包括：上清液与碱和醇混合，进行酯化反应，得到司盘85衍生物。

6、在本发明的一些实施例中，其中，碱为碱金属氢氧化物；和/或，醇为甲醇。

7、在本发明的一些实施例中，其中，酯化反应的温度为10~100℃，例如，可以是13.6℃、24.9℃、46.7℃、63.2℃、78.4℃、96.9℃等；时间为0.1~30min，例如，可以是8.3min、13.8min、16.4min、19.6min、23.6min、25.6min、29.6min等。

8、在本发明的一些实施例中，其中，气相色谱的条件包括：载气：氮气；和/或，流速：1~3ml/min，例如，可以是1.2ml/min、1.6ml/min、2ml/min、2.1ml/min、2.3ml/min、2.6ml/min、2.9ml/min等，恒流模式；和/或，色谱柱：毛细管柱或等同的色谱柱；和/或，检测器：fid检测器；和/或，进样口温度：200~280℃，例如，可以是212℃、236℃、240℃、243℃、259℃、271℃、278℃等；和/或，检测器温度：240~320℃，例如，可以是259℃、271℃、280℃、283℃、297℃、309℃、318℃等；和/或，进样量：0.01~20.0μl，例如，可以是1.0μl、1.2μl、3.4μl、5.9μl、7.8μl、9.1μl、12.3μl、14.8μl、16.1μl、19.3μl等；和/或，分流比：（0.1~100）:1，例如，可以是0.8:1、1:1、13:1、29:1、42:1、68:1、73:1、82:1、96:1等。

9、在本发明的一些实施例中，其中，气相色谱的升温程序包括：柱温：初始温度40~280℃，例如，57℃、79℃、92℃、118℃、139℃、160℃、178℃、216℃、238℃、279℃等，以0~100℃/min（例如，可以是12℃/min、27℃/min、43℃/min、62℃/min1、89℃/min、96℃/min等）升至150~300℃（例如，可以是169℃、183℃、220℃、228℃、249℃、286℃、298℃等），保持0~20min（例如，可以是1.9min、3.1min、5min、5.9min、7.4min、11.7min、13.9min、16.7min、18.9min、19.9min等），再以0~50℃/min（例如，可以是3℃/min、7℃/min、13℃/min、20℃/min、23℃/min、37℃/min、48℃/min等）升至220~330℃（例如，可以是231℃、249℃、258℃、280℃、283℃、307℃、329℃等），保持0~10min（例如，可以是0.9min、3.1min、5min、5.9min、6.4min、7.6min、8.9min、9.7min等）。

10、在本发明的一些实施例中，其中，有机溶剂为正己烷；和/或，破乳剂为乙腈。

11、在本发明的一些实施例中，其中，待测样品选自疫苗成品、佐剂、安慰剂中任意一种。

12、本发明实施例提供的技术方案具有如下优点：

13、本发明的检测司盘85含量的方法，通过将司盘85在碱性条件下进行酯化反应进行衍生，将高沸点的司盘85 转换成沸点较低的司盘85衍生物，司盘85衍生物能够进行气相色谱分析，并对酯化后的司盘85衍生物进行了质谱定位，为疫苗的质量监控提供技术支撑。同时，也能够实现待测样品（例如：疫苗成品、佐剂、安慰剂中的任意一种）中司盘85的含量的准确检测，可以保证疫苗制品的稳定性和不同批次之间的一致性，同时克服了样品中其他组分干扰的问题，增强了方法的专属性。

技术特征：

1.一种检测司盘85含量的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述破乳处理的步骤包括：

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述酯化反应的步骤包括：

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述气相色谱的条件包括：

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述气相色谱的升温程序包括：

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

技术总结
本发明涉及药物分析技术领域，尤其涉及一种检测司盘85含量的方法。方法包括如下步骤：待测样品前处理；标准曲线方程的建立；待测样品检测。本发明通过将司盘85在碱性条件下进行酯化反应进行衍生，将高沸点的司盘85转换成沸点较低的司盘85衍生物，司盘85衍生物能够进行气相色谱分析，并对酯化后的司盘85衍生物进行了质谱定位，为疫苗的质量监控提供技术支撑。

技术研发人员：胡忠玉,王瑾,吴先富,胡萍,吕华,何鹏,陶明珍,方鑫,王青,孙会敏
受保护的技术使用者：中国食品药品检定研究院
技术研发日：
技术公布日：2025/4/24