一种测定禽畜肉中三十五种兽药残留量的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于食品安全检测领域，涉及一种兽药残留量的检测方法，尤其涉及一种 测定禽畜肉中三十五种兽药残留量的检测方法。
【背景技术】
[0002] 兽药：是指用于预防、治疗、诊断动物疾病或者有目的地调节动物生理机能的物质 (含药物饲料添加剂），主要包括：血清制品、疫苗、诊断制品、微生态制品、中兽药、中成药、 化学药品、抗生素、生化药品、放射性药品及外用杀虫剂、消毒剂等。兽药在防治动物疾病、 提高生产效率、改善产品质量等方面起着重要的作用。然而，由于某些养殖人员非法用药、 滥用兽药、不按要求科学用药，致使禽畜肉中兽药超标问题比较严重。
[0003] 目前，在动物源性食品中较容易引起残留量超标的兽药主要有抗生素类和激素类 等药物。滥用兽药极易造成动物源性食品中有害物质的残留，对人体健康造成直接危害。磺 胺类药物能够破坏人体造血机能，有一定的致癌性。食用残留喹诺酮类药的动物机体组织 后喹诺酮类抗生素就在人体内残留蓄积，造成人体疾病对该药物的严重耐药性，影响人体 疾病的治疗。
[0004] 0受体激动剂是又称为0 -兴奋剂（0 -agonists)，是一类人工合成药物，主要用 于防治人、兽支气管哮喘和支气管痉挛，在药学上称为e-肾上腺素兴奋剂。四十多年前国 内外研宄表明，在饲料中添加某些e-受体激动剂具有营养再分配作用，可以明显提高瘦 肉率，这些药物又被叫做"瘦肉精"。人食用含"瘦肉精"的猪肝，会造成中毒现象，常见有恶 心、头晕、四肢无力、手颤等中毒症状。含"瘦肉精"的禽畜肉对心脏病、高血压患者、老年人 的危害更大。因而造成安全隐患。我国明文禁止e-肾上腺素类激素在饲料、畜牧生产中 使用，同时2010年卫生部也将肾上腺素受体激动剂类药物列入非食用物质名单。但受经济 利益的驱使，"瘦肉精"在畜禽养殖业非法使用的情况依然不容乐观，特别是用于饲养瘦肉 型猪、鸡等。
[0005] 随着我国对食品安全问题的重视，动物源性食品中兽药残留已逐渐成为人们关注 的焦点。我国针对动物源性食品中兽药的残留出台了许多检测标准：《禽畜肉中十六种磺 胺类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》（GB/T20759-2006)、《动物源性食品中磺 胺类药物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法》（GB/T21316-2007)、《动物源性食品中 14种喹诺酮药物残留检测方法液相色谱-质谱/质谱法》（GB/T21312-2007)、《动物源产 品中喹诺酮类残留量的测定液相色谱-串联质谱法》(GB/T20366-2006)、《动物源性食品中 0 -受体激动剂残留检测方法液相色谱-质谱质谱法》(GB/T21313-2007)、《动物源性食品 中0 -受体激动剂残留检测液相色谱-串联质谱法》（农业部1025号公告-18-2008)等。 除了上述国家标准外，科研文献中也提出了一些兽药残留的检测方法。
[0006] 目前，无论是文献还是国家标准大多是单一兽药或一类兽药的检测方法。如：GB/ T20759-2006只规定了 16中磺胺类药物的检测方法；谢孟峡等，固相萃取-气相色谱-质 谱分析肉样中盐酸克伦特罗的残留量，分析化学，2002年第11期，1308-1311页；杨方等， 液相色谱-串联质谱法检测水产品中15种喹诺酮类药物残留量，分析实验室，2008年第 12期，27-33页，等。另外一些文献也报道了几种兽药同时检测的方法，如赵颖等，超高效液 相色谱-电喷雾串联四极杆质谱法同时测定配合饲料中29种兽药，色谱，2012年第9期， 908-914页。该方法涉及了喹诺酮类、磺胺类、大环内酯类和硝基呋喃类四类兽药，但是该方 法适用于饲料，且步骤较为复杂，需要采用固相萃取技术进行净化富集。
[0007] 本发明涉及的三十五种兽药包括三大类，分别为磺胺类（共计17种）、喹诺酮类 (共计12种）、0受体激动剂类（共计6种）。采用无水硫酸钠除水，酸化乙腈溶进行液 液液萃取，旋转蒸发浓缩，前处理步骤简便，并且利用准确度高的超高效液相色谱-串联质 谱仪进行测定。通过优化流动相配比，调谐仪器，可以快速准确的一次性检测上述三类共计 三十五种兽药在禽畜肉中的残留量。
【发明内容】
[0008] 本发明解决的技术问题在于，选择合适的有机溶剂同时提取禽畜肉中的三十五种 兽药，降低禽畜肉基质干扰，调谐仪器，一次性准确的检测出禽畜肉中的三十五种兽药残留 量。
[0009] 本发明所述的的技术问题可通过如下技术方案实现：
[0010] (1)样品经粉碎机粉碎，混勾，准确称取5.OOg(精确至0?Olg)，置于50mL聚丙稀 离心管中，加入5g无水硫酸钠和20mL1 %甲酸乙腈溶液，采用匀浆机对样品均质2min。均 质后的样品以4000r/min的转速离心5min。上清液转移至鸡心瓶中，重复提取一次；
[0011] (2)合并经离心处理后的上清液，用旋转蒸发仪于50°C水浴蒸发浓缩至干；
[0012] (3)准确加入2mL0. 1 %的甲酸水溶液溶解残渣，再加入ImL正己烷除脂，涡旋混 匀，静置分层后，取下层液体，过〇. 22ym滤膜后，超高效液相色谱-串联质谱仪测定，外标 法定量；
[0013] 本发明的有益效果在于，建立了一种禽畜肉中三十五种兽药残留量的测定方法， 采用酸化乙腈提取禽畜肉中的三十五种兽药，前处理方法简便易行，可以一次性准确的检 测出禽畜肉中残留的三十五种兽药。
【附图说明】
[0014]
[0015] 图1三十五种兽药标准溶液MRM图。图中代号标示：
[0016] 氧氟沙星，YFSX;恩诺沙星，ENSX;苯乙醇胺A，BYCAA;莱克多巴胺，LKDBA;盐酸 克伦特罗，KLTL;齐帕特罗，QPTL;沙丁胺醇，SDAC;盐酸多巴胺，YSDBA;;双氟沙星，SFSX; 沙拉沙星，SLSX;磺胺苯吡挫，HAbenbizuo;磺胺间二甲氧喃啶，HAjianerjiayang;磺胺邻 二甲氧喃啶，HAlinerjiayang;吡哌酸，BPS;磺胺喹噁啉，HAkuielin;萘啶酸，NDS;磺胺醋 酰，HAcuxian;单诺沙星，DNSX;洛美沙星，LMSX;磺胺氟哒嗪，HAlvdaqin;磺胺对甲氧嘧 啶，3-zhong(左边的峰，RT3.55min);磺胺甲氧嘆，3-zhong(中间的峰，RT4. 18min);磺 胺-6-甲氧喃啶，3-zhong(右边的峰，RT4. 95min);磺胺二甲喃啶，HAerjiamiding;磺胺甲 噻二挫，HAjiaerzuo;磺胺二甲异噁挫，HAezuo;磺胺甲基异噁挫，HAjiaezuo;培氟沙星， PFSX;环丙沙星，HBSX;依诺沙星，YNSX;诺氟沙星，NFSX;磺胺甲基嘧啶，HAjiamiding;磺胺 噻挫，HAsaizuo;磺胺喃啶，HAmiding;磺胺吡啶，HAbiding0
【具体实施方式】
[0017] 下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明并不局限于具体实施 例。
[0018] 实施例1某市售鸡肉中三十五种兽药残留量的测定
[0019] 1、分析步骤
[0020] 称取粉碎后鸡肉试样5. 00g(精确到0.Olg)于50mL聚丙稀离心管中，加入5g无水 硫酸钠和20mLl%的甲酸乙腈溶液，采用匀浆机将样品均质2min，均质后的样品以4000r/ min离心5min，上清液转移至鸡心瓶中，重复提取一次。合并提取液，用旋转蒸发仪于50°C 水浴蒸发浓缩至干，准确加入2mL0. 1 %的甲酸水溶液和ImL正己烷溶解残渣，涡旋混合均 匀，静置分层后，取下层液体，过〇. 22ym滤膜后，用超高效液相色谱-串联质谱仪测定。
[0021] 2、超高效液相色谱-串联质谱条件
[0022] 仪器：WatersXEVOTQ-MS超高效液相色谱-串联质谱仪（三重四级杆）；色谱柱： WatersAcquityBEH-C18, 2.ImmX50mm，I. 7ym;流动相：甲醇+0?I% 甲酸水溶液（梯度洗 脱，程序见表1);流速：〇. 2mL/min;进样量：2. 0yL;离子源：电喷雾离子源（ESI);扫描方 式：正离子扫描；检测方式：多反应监测（MRM);电喷雾电压：3kv;离子源温度：110°C;去溶 剂温度：350°C;离子对、锥孔电压、碰撞能见表2。
[0023] 表1超高效液相色谱-串联质谱梯度洗脱条件
【主权项】
1. 一种测定禽畜肉中三十五种兽药残留量的检测方法，其特征在于所述方法包括如下 步骤： (1) 样品经粉碎机粉碎，混勾，准确称取5.OOg样品，精确至0.Olg，置于50mL聚丙稀离 心管中，加入5g无水硫酸钠和20mL1%甲酸乙腈溶液，采用勾衆机对样品均质2min。均质 后的样品以4000r/min的转速离心5min。上清液转移至鸡心瓶中，重复提取一次； (2) 合并经离心处理后的上清液，用旋转蒸发仪于50°C水浴蒸发浓缩至干； (3) 准确加入2mL0. 1 %的甲酸水溶液溶解残渣，再加入ImL正己烷除脂，涡旋混匀，静 置分层后，取下层液体，过0. 22ym滤膜后，待测； (4) 采用超高效液相色谱-串联质谱仪进行测定，测定条件如下： 仪器：Waters XEVO TQ-MS超高效液相色谱-串联质谱仪；色谱柱：Waters Acquity BEH-C18,2. l_X50mm，I. 7 y m ;流动相：甲醇+0. 1 %甲酸水溶液，梯度洗脱；流速：0. 2mL/ min ;进样量：2. 0 y L ;离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监 测；电喷雾电压：3kv ;离子源温度：110°C ;去溶剂温度：350°C。
2. 如权利要求1所述的兽药残留量的检测方法，其中所述兽药为：磺胺类药物共17 种，包括磺胺醋酰、磺胺甲基异噁唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲异噁唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺 氯哒嗪、磺胺喹噁啉、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺苯吡唑、磺胺-6-甲氧嘧 啶、磺胺对甲氧喃啶、磺胺甲氧哒嘆、磺胺甲噻二挫、磺胺噻挫、磺胺吡啶、磺胺喃啶；喹诺酮 类药共12种，包括培氟沙星、伊诺沙星、吡哌酸、奈啶酸、双氟沙星、沙拉沙星、单诺沙星、洛 美沙星、氧氟沙星，恩诺沙星，环丙沙星、诺氟沙星物；e受体激动剂类药物共6种，包括盐 酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、盐酸多巴胺、齐帕特罗、苯乙醇胺A。
3. 如权利要求书1所述的兽药残留量的检测方法，其特征在于采用超高效液相色 谱-串联质谱仪检测。
【专利摘要】本发明涉及一种兽药残留量的检测方法，尤其涉及一种测定禽畜肉中三十五种兽药残留量的检测方法，所述方法包括如下步骤：称取粉碎混匀后的禽畜肉，加入酸化乙腈，用匀浆机均质提取，上清液用旋转蒸发仪蒸发浓缩至干，残渣用0.1％的甲酸水溶液定容，并用正己烷脱脂，脱脂后的溶液供超高效液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。本发明的检测方法定性准确、定量快速、步骤简便等特点，适合于禽畜肉中三十五种兽药残留量的检测。
【IPC分类】G01N30-88
【公开号】CN104764844
【申请号】CN201510117727
【发明人】宋薇
【申请人】谱尼测试科技股份有限公司
【公开日】2015年7月8日
【申请日】2015年3月18日