一种长效肿瘤组织渗液样本保存液的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种样本保存液，具体地说是一种长效肿瘤组织渗液样本保存液。
【背景技术】
[0002] 炎症是肿瘤的第七大特征。肿瘤基因的活化会导致炎症分子的产生及炎症细胞的 聚集。一组细胞因子蛋白，包括IL-1，IL-6，TNF和RANKL等炎症因子对下游的关键转录 因子NF-kappaB活化并且促进炎症。肿瘤组织血管内的液体和肿瘤细胞成分通过血管壁进 入组织间质、体腔、粘膜表面和体表的过程称为肿瘤性渗出。所渗出的液体和细胞总称为肿 瘤性渗出物或渗出液。以血管反应为中心的肿瘤性渗出病变是肿瘤性炎症最具特征性的变 化，炎性渗出物内含有较高的蛋白质和较多的细胞成分以及他们的崩解产物。此过程中血 管反应主要表现为血流动力学改变(炎性充血)、血管通透性增加(炎性渗出）、液体渗出和 细胞渗出（炎性浸润)。由于肿瘤组织周围炎性浸润，肿瘤性渗出组织渗液中可能含有肿瘤 组织细胞原血红素，它是在组织细胞恶变过程中产生一种因果性生物标志因子，而组织渗 液中是否含有肿瘤组织细胞原血红素对组织是否恶变的鉴定具有重要意义。检测肿瘤组织 细胞原血红素是筛查恶性肿瘤的一种新方法。肿瘤组织渗液可以作为直接生物学介质来检 测肿瘤组织细胞原血红素的存在。
[0003] 在肿瘤组织渗液采集和检测分析过程中，存有以下难点：（1)由于炎性反应，组织 渗液中含有蛋白质、糖、甘油三脂、胆固醇和纤维蛋白原破坏放出的凝血活酶和大量脱落细 胞，这些物质可能对肿瘤组织细胞原血红素的检测形成干扰。假若组织渗液样本浑浊较重， 或所含上述物质过多，致样本的吸光度高低不一，使自动化分析检测无法进行，或检测结果 失准。（2)肿瘤组织渗液采样之后、送验之前，样本需要在保存液内保存一段时间。有时，为 了动态监测和复查需要，同一样本还需要保存较长的时间。（3)肿瘤组织细胞原血红素是检 测的目的物，它是一种酶样物质，很不稳定。为解决以上三个问题，需要一种为肿瘤组织渗 液样本提供稳定的环境，防止渗液内有形物质凝固和沉淀，清除样本中的粘液以降低黏度 并具有防腐功效，且使样本的吸光度处于可控状态，提高分析检测的精准度和可靠性的预 处理技术。研制能满足以上需求的保存液是亟待解决的问题。经检索，目前尚无肿瘤组织 渗液样本保存液，致使肿瘤组织渗液无法保存，肿瘤组织细胞原血红素检测无法进行。本发 明提供了一种能满足肿瘤组织细胞原血红素分析检测的样本长效肿瘤组织渗液保存液。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种在肿瘤组织细胞原血红素检测过程中使用的长效肿 瘤组织渗液样本保存液。本发明制备的长效肿瘤组织渗液样本保存液，能在90天内为肿瘤 组织渗液样本提供稳定的环境，防止渗液内有形物质凝固和沉淀，并具有清除样本中的粘 液降低黏度和防腐作用，使样本的吸光度处于可控状态，保证肿瘤细胞原血红素检测的准 确性。
[0005] 本发明采用以下技术方案： 一种长效肿瘤组织渗液样本保存液，其特征在于，它是由3. 69~3. 76g/L乙二胺四乙酸 二钠、38~42mg/L异丁醇、9. 5~10. 5ml/L甲醛和0? lmol/L~lmol/L磷酸盐缓冲液组成；所述 磷酸盐缓冲液的pH值为6. 2~7. 8。
[0006] 优选的，所述的长效肿瘤组织渗液样本保存液是由3. 72g/L的乙二胺四乙酸二 钠、40mg/L的异丁醇、10ml/L的甲醛和0? 5mol/L pH值为7. 4磷酸盐缓冲液组成。
[0007] 本发明长效肿瘤组织渗液样本保存液的使用方法如下：选用适宜的采样器，在检 测部位轻轻擦拭，获取局部的组织渗液。采液量为〇.5~lml，一般以采样拭子全部湿润为度。 采样后把拭子插入保存液2ml中轻轻搅动，使拭子上获取的组织渗液与本发明之样本保存 液混匀，制得样本液常温保存、送验。
[0008] 本发明长效肿瘤组织渗液样本保存液的机理和有益效果如下：磷酸盐缓冲液体 系，提供稳定的酸碱环境。乙二胺四乙酸二钠是一种稳定剂，增加样本内的肿瘤组织细胞 原血红素的稳定性；它还具有抗凝和防止有形物质沉淀的功能；同时它还是一种络合剂， 减少样本中可能存在的金属离子的干扰。异丁醇是一种有机助溶剂，还具有消除粘液降低 样本液黏度的作用，又有助于溶解和萃取样本内的有机物，减少样本中可能存在的蛋白质、 糖、甘油三脂、胆固醇和纤维蛋白原等物质的干扰。甲醛具有防腐功能。本发明的配伍合理， 制备方法简单实用，制备的产品能在常温下妥善保存肿瘤组织渗液样本90天，防止渗液内 有形物质凝固和沉淀，并具有清除样本中的粘液降低黏度和防腐作用，有效地保护检测目 的物一一肿瘤组织细胞原血红素的稳定性，剔除干扰因素，保证检测的精准度。
【具体实施方式】
[0009] 下面结合具体实施例对本发明做进一步的详细说明。
[0010] 实施例1 肿瘤组织渗液样本保存液配方：3. 69g/L乙二胺四乙酸二钠、38mg/L异丁醇、9. 5ml/L 甲醛和0. lmol/L pH值为7. 8的磷酸盐缓冲液组成。
[0011] 上述样本保存液的制备方法： (1) 配制0? lmol/L pH值为7. 8的磷酸盐缓冲液1L ; (2) 将乙二胺四乙酸二钠3. 69g加入到上述磷酸盐缓冲液中，在60±3°C水浴中加热溶 解； (3) 将异丁醇38mg加入步骤（2)制得的溶液中，充分搅拌使之完全溶解； (4) 将甲醛9. 5ml加入步骤（3)制得的溶液中，搅拌使之混匀。
[0012] 实施例2 肿瘤组织渗液样本保存液配方：3. 72g/L的乙二胺四乙酸二钠、40mg/L的异丁醇、 10ml/L的甲醛和0. 2mol/L pH值为7. 4磷酸盐缓冲液。
[0013] 上述样本保存液的制备方法： (1) 配制0? 2mol/L pH值为7. 4的磷酸盐缓冲液； (2) 将乙二胺四乙酸二钠3. 72g加入到上述磷酸盐缓冲液中，在60±3°C水浴中加热溶 解； (3) 将异丁醇40mg加入步骤（2)制得的溶液中，充分搅拌使之完全溶解； (4) 将甲醛10ml加入步骤（3)制得的溶液中，搅拌使之混匀。
[0014] 实施例3 肿瘤组织渗液样本保存液配方：3. 76g/L乙二胺四乙酸二钠、42mg/L异丁醇、10. 5ml/ L甲醛和lmol/L pH值为6. 2的磷酸盐缓冲液组成。
[0015] 上述样本保存液的制备方法： (1) 配制lmol/L pH值为6. 2的磷酸盐缓冲液； (2) 将乙二胺四乙酸二钠3. 76g加入到上述磷酸盐缓冲液中，在60±3°C水浴中加热溶 解； (3) 将异丁醇42mg加入步骤（2)制得的溶液中，充分搅拌使之完全溶解； (4) 将甲醛10. 5ml加入步骤（3)制得的溶液中，搅拌使之混匀。
[0016] 实施例4 有效性实验 1、试验方法 (1)试验设备：全自动肿瘤组织细胞原血红素检测分析仪。
[0017] (2)检测试剂：组织渗液肿瘤组织细胞原血红素定量检测试剂。
[0018] (3)检测样本液：肿瘤组织渗液样本0. 5ml加入实施例2制备的肿瘤组织渗液样 本保存液2ml内混匀，常温保存备用。
[0019] (4)检测方法：制得样本液后，立即（0天）测定样本液内肿瘤细胞原血红素含量， 此后每隔15天对同一样本液检测1次，至第90天。
[0020] (5)操作模式：在比色管中加入待检样本液200 y L，再加入组织渗液肿瘤组织细 胞原血红素定量检测试剂200 y L，37°C温育使试剂与样本充分反应。在反应144秒的时间 点上，以光电比色法读取该样本与试剂反应后显色液的吸光度，以此吸光度值通过仪器设 定的标准曲线读取相对应的肿瘤组织细胞原血红素的含量（yg /L)。
[0021] (6)统计学处理：采用方差试验对检测结果进行差异性比较。
[0022] 2、试验动物样本液的制作： (1)诱发性鼻咽癌小白鼠动物模型的建立：取120 g左右大白鼠，乙醚麻醉后，用磨平 针尖的8号针头，从前鼻孔轻轻插入，针尖可达鼻咽腔；经注射器灌注用1%吐温-80新配的 33. 3%二乙基亚硝胺（DEN)混悬液0.0 2 ml (含DEN 6. 7 mg)。每周1次，共15次。病理 学检查证实诱发鼻咽癌成功。
[0023] (2)取鼻咽癌诱发成功的小白鼠3只处死，分别用取样拭子在 试验小白鼠鼻咽部沾取组织渗液，每鼠〇. 5ml。将带有渗液的拭子在实施例2制得的肿 瘤组织渗液样本保存液2ml内搅动混匀，制得试验动物肿瘤组织渗液样本液3份常温保存 备用。
[0024] 3、临床检测样本液的制作 样本液1 :病理学检查诊断为宫颈浸润性鳞状细胞癌。持宫颈渗液采样器经阴道徐徐 插入至宫颈部位，按右上、右下、左下、左上、宫颈管口循序擦拭，获取组织渗液0.5ml，与实 施例2所得样本保存液2ml混匀，常温保存备用。样本液2:病理学检查诊断为结节型鼻咽 癌。持鼻咽部取样器由鼻腔置入，沿下鼻道直达鼻咽，左、右各旋转180度，再按顺序在鼻咽 后壁、咽鼓管咽口、咽鼓管园枕和咽隐管处擦拭获取组织渗液0. 5ml，与实施例2所得样本 保存液2ml混匀，常温保存备用。样本液3:病理学检查诊断为小细胞肺癌。请受检者在样 本瓶内留取痰液，取其0. 5ml与实施例2所得样本保存液2ml混匀，常温保存备用。
[0025] 样本液4 :病理学检查诊断为阴茎鳞状上皮癌。执采样器在阴茎冠状沟增生溃疡 处轻轻擦拭，获取组织渗液0. 5ml，与实施例2所得样本保存液2ml混匀，常温保存备用。 4、试验结果：见表1和表2。
【主权项】
1. 一种长效肿瘤组织渗液样本保存液，其特征在于，它是由3. 69~3. 76g/L乙二胺四乙 酸二钠、38~42mg/L异丁醇、9. 5~10. 5ml/L甲醛和0? lmol/L~lmol/L磷酸盐缓冲液组成；所 述磷酸盐缓冲液的pH值为6. 2~7. 8。
2. 根据权利要求1所述的长效肿瘤组织渗液样本保存液，其特征在于，它是由3. 72g/L 的乙二胺四乙酸二钠、40mg/L的异丁醇、10ml/L的甲醛和0. 5mol/L pH值为7. 4磷酸盐缓 冲液组成。
【专利摘要】本发明公开了一种长效肿瘤组织渗液样本保存液，该样本保存液是由3.69~3.76g/L乙二胺四乙酸二钠、38~42mg/L异丁醇、9.5~10.5ml/L甲醛和0.1mol/L~1mol/L磷酸盐缓冲液组成。本发明制备的长效肿瘤组织渗液样本保存液，能在90天内为肿瘤组织渗液样本提供稳定的环境，防止渗液内有形物质凝固和沉淀，并具有清除样本中的粘液降低黏度和防腐作用，使样本的吸光度处于可控状态，保证肿瘤细胞原血红素检测的准确性。
【IPC分类】G01N1-28
【公开号】CN104849122
【申请号】CN201510295106
【发明人】蒋春亮
【申请人】蒋春亮
【公开日】2015年8月19日
【申请日】2015年6月2日