一种熊胆丸的检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种熊胆丸的检测方法，该检测方法包括性状检测和薄层色谱定性鉴别，所述的薄层色谱定性鉴别包括对熊胆丸中龙胆和八角莲的定性鉴别、柴胡和大叶柴胡的定性鉴别、栀子的定性鉴别；该方法有效的控制了熊胆丸中八角莲和大叶柴胡的混入，同时确保熊胆丸中含有龙胆、柴胡和栀子成分，从而有效地控制了少投药材或者不投药材的情况，保证了药品质量，保证了用药安全。
【专利说明】
一种熊胆丸的检测方法
技术领域
[0001]本发明涉及药物成分的鉴别方法，特别涉及一种熊胆丸的检测方法。
【背景技术】
[0002]熊胆丸是《卫生部药品标准》中药成方制剂第二册收载的品种，其标准编号为WS3-B-0460-90，处方龙胆、泽泻(盐制)、地黄、当归、桅子、菊花、车前子(盐制)、决明子、柴胡、防风、黄芩、木贼、黄连粉、薄荷脑、大黄、冰片、熊胆，是纯中药制成的胶囊剂，具有清热散风，止痛退翳的作用。临床上用于风热或肝经湿热引起的目赤肿痛，羞明多泪的治疗。该药品标准是卫生部最早制定的药品标准，由于当时的技术水平和条件有限，该标准没有对任何药材和任何成份进行定性定量的质量控制，既没有质量指标，也没有这些质量指标的鉴别和检验方法，由此会导致部分厂家在生产药品时不严格控制和管理原材料的鉴别和筛选，误用或混入其它药材，致使药品的疗效明显下降，影响药品的安全有效，严重损害患者的利益。
[0003]处方中的龙胆，为龙胆科多年生草本植物，分布于我国黑龙江、吉林、辽宁、浙江等地，生草甸、灌丛或林缘。因其与八角莲很相似，所以常常有八角莲混入其中，误作龙胆使用。而八角莲又叫金魁莲、旱八角，属于小檗科、鬼白属植物，老百姓都知道其有毒，其含有的鬼白毒素和脱氧鬼白毒素，外用和误服可引起严重系统性毒性作用，曾经有过致死的报道，另外，其有致畸作用。因此，控制熊胆丸中八角莲的混入非常必要。
[0004]处方中用到柴胡，其功效主要是和解少阳，和胃降逆，扶正祛邪，但是因为柴胡属于常用药且使用量较大，而柴胡的产量有限，所以其伪品大叶柴胡也被有意或者无意混入使用，大叶柴胡中含有柴胡毒素和乙酰柴胡毒素，这两种成份均为有毒物质，此前已多次发生因服用混有大叶柴胡的药品而中毒的药害事件，所以控制大叶柴胡很有必要。《山东医药工业》于2003年第二十二卷第5期发表了《对中国药典2000年版柴胡检验方法的补充》一文，探讨过药典上大叶柴胡药材的鉴别控制问题，但是其方法有明显的不足:放置24小时，检测时间太长，不利于药品生产过程控制和药品质量监督检查；因柴胡毒素和乙酰柴胡毒素含量相对较低，点样仅2μ1，点样量过少，影响检验的准确性;因柴胡毒素和乙酰柴胡毒素含量相对较低，在紫外灯下检视，不用显色剂显色来观察，观察效果不好，更重要的是小柴胡颗粒处方药味多、所含成份复杂，其它成份会产生混淆和干扰，所以，寻找一种更好的办法来控制大叶柴胡已是当务之急。
[0005]桅子也是常用中药，供需矛盾突出，也有必要进行控制。根据熊胆丸的处方特点，制定确实可行的检测方法，尤其是对龙胆、八角莲以及柴胡、大叶柴胡进行鉴别，以保证产品的质量和临床疗效非常迫切。
【发明内容】
[0006]本发明的目的在于克服现有技术对熊胆丸的质量检测不完善的缺陷，提供一种熊胆丸的检测方法。该检测方法包括对熊胆丸的性状鉴别和对熊胆丸制剂中的龙胆和八角莲、柴胡和大叶柴胡、栀子等几味主要药材的薄层色谱定性鉴别，通过该检测方法有效地鉴别了熊胆丸含有的药物成分，控制了熊胆丸的质量，使熊胆丸的使用更加安全、有效。
[0007]为了实现上述发明目的，本发明提供了一种熊胆丸的检测方法，包括:
熊胆丸的制备:1、按现有技术中熊胆丸原料配方分别称取龙胆、泽泻(盐制)、地黄、当归、桅子、菊花、车前子(盐制)、决明子、柴胡、防风、黄苳、木贼、黄连粉、薄荷脑、大黄、冰片、熊胆备用。2、将熊胆、薄荷脑、冰片研成细粉，与黄连粉末配研，过筛，混匀得混合粉末A;3、将龙胆、泽泻(盐制)、地黄、当归、桅子、菊花、车前子(盐制)、决明子、柴胡、防风、黄芩、木贼、黄连粉、大黄等十三味，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次I小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成稠膏，干燥，粉碎，过筛得混合粉末B; 4、将步骤2和3所得粉末A、粉末B与适量辅料混合，过筛，混匀，装胶囊，即得熊胆丸。
[0008]熊胆丸性状鉴别:本品为胶囊剂，内容物为棕褐色的粉末;气清凉，味苦、微辛。
[0009]龙胆和八角莲的定性鉴别:分别以龙胆对照药材和八角莲对照药材为对照品，以体积比乙酸乙酯:甲醇:水= 8-12:2:1的乙酸乙酯-甲醇混合水溶液为展开剂，用薄层色谱法鉴别。
[0010]柴胡和大叶柴胡的定性鉴别:分别以柴胡对照药材和八角莲对照药材为对照品，以体积比乙酸乙酯:乙醇:水=10-14:2:1的乙酸乙酯-乙醇混合水溶液为展开剂，用薄层色谱法鉴别。
[0011]栀子的定性鉴别:以栀子对照药材为对照品，以体积比三氯甲烷:甲醇=3:1的三氯甲烷-甲醇溶液为展开剂，用薄层色谱法鉴别。
[0012]本发明所述检测方法通过对龙胆和八角莲、柴胡和大叶柴胡、栀子进行薄层色谱鉴别，有效地控制了熊胆丸的成分，使该药品更加安全、有效，从而保证了该胶囊制剂的临床疗效，维护了患者利益。
[0013]上述一种熊胆丸的检测方法中，优选的，龙胆和八角莲的定性鉴别的具体步骤为:取本品内容物，加入甲醇，加热回流，放冷，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液;分别另取龙胆对照药材与八角莲对照药材，按照供试品溶液的制备方法分别制成龙胆对照药材溶液和八角莲对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、龙胆对照品溶液、八角莲对照品溶液，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比乙酸乙酯:甲醇:水= 8-12: 2:1的乙酸乙酯-甲醇混合水溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置于波长为254nm的紫外光灯下检视;供试品色谱中，在与龙胆对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，在与八角莲对照药材色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。
[0014]其中，所述龙胆和八角莲的定性鉴别中，采用体积比乙酸乙酯:甲醇:水=8-12: 2:1的乙酸乙酯-甲醇混合水溶液为展开剂，展开时间短，展开效果好，斑点显色清晰。
[0015]最优选的，所述龙胆和八角莲的定性鉴别中，采用体积比乙酸乙酯:甲醇:水=10:2:1的乙酸乙酯-甲醇混合水溶液为展开剂，通过以上优选，可以进一步地优化展开效果，更容易观察比较分析样品中的有效成分。
[0016]上述一种熊胆丸的检测方法中，优选的，柴胡和大叶柴胡的定性鉴别的具体步骤为:取本品内容物，加水，搅拌溶解，离心，取上清液，加在聚酰胺柱上，分别用水、20v%乙醇溶液和50v%乙醇溶液洗脱，收集5(^%乙醇溶液洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液;另取柴胡对照药材、大叶柴胡对照药材，分别加水，分别煎煮，滤过，滤液浓缩，取浓缩液加在聚酰胺柱上，分别用水和50v%乙醇溶液洗脱，收集5(^%乙醇溶液洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，得到柴胡对照品溶液和大叶柴胡对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、柴胡对照品溶液和大叶柴胡对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比乙酸乙酯:乙醇:水= 10-14: 2:1的乙酸乙酯-乙醇混合水溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以对二甲氨基苯甲醛的硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，置于波长为365nm的紫外光灯下进行检视;供试品色谱中，在与柴胡对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，在与大叶柴胡对照药材色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。
[0017]其中，所述柴胡和大叶柴胡的定性鉴别中，采用体积比乙酸乙酯:乙醇:水=10-14:2:1的乙酸乙酯-乙醇混合水溶液为展开剂，展开时间短，展开效果好，斑点显色清晰。
[0018]最优选的，所述柴胡和大叶柴胡的定性鉴别中，采用体积比乙酸乙酯:乙醇:水=12: 2:1的乙酸乙酯-乙醇混合水溶液为展开剂，通过以上优选，可以进一步地优化展开效果，更容易观察比较分析样品中的有效成分。
[0019]上述一种熊胆丸的检测方法中，优选的，栀子的定性鉴别的具体步骤为:取本品内容物，加甲醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液;另取栀子对照药材，加甲醇，超声处理，滤过，滤液浓缩，作为栀子对照品溶液;再取栀子苷对照品，加甲醇制成浓度为2g/L的溶液，作为栀子苷对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比三氯甲烷:甲醇=3:1的三氯甲烷-甲醇溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10?七%硫酸-乙醇溶液，加热至斑点显色清晰;供试品色谱中，在与栀子对照药材色谱和栀子苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0020]其中，所述栀子的定性鉴别中，采用体积比三氯甲烷:甲醇=3:1的三氯甲烷-甲醇溶液为展开剂，展开时间短，展开效果好，斑点显色清晰。
[0021]与现有技术相比，本发明的有益效果:
(I)本发明所述检测方法包括对龙胆和八角莲的鉴别，有效避免了含有的鬼白毒素和脱氧鬼白毒素的八角莲的混入而引起的严重系统性毒性和致畸作用。
[0022](2)本发明所述检测方法改进了对柴胡和大叶柴胡的鉴别方法，避免了由于大叶柴胡点样量过少而导致的检测结果不准确的缺陷，从而有效控制了含有大量柴胡毒素和乙酰柴胡毒素的大叶柴胡的混入。
[0023](3)本发明所述检测方法通过对龙胆和八角莲、柴胡和大叶柴胡、栀子药材进行薄层色谱定性鉴别，有效地控制了熊胆丸的质量。本发明方法科学合理、切实可行，保证了药品应该有的有效成分，也控制了不应该有的成份;特别是控制了药品中混入八角莲这种有毒物质；解决了用更加有效的办法控制有意或者无意混入使用有毒的大叶柴胡的问题；桅子也是常用中药，供需矛盾突出，通过本检测方法，有效地控制了少投药材或者不投药材的情况，保证了药品质量，保证了用药安全。
【具体实施方式】
[0024]下面结合试验例及【具体实施方式】对本发明作进一步的详细描述。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本
【发明内容】
所实现的技术均属于本发明的范围。
[0025]本发明所述的熊胆丸的质量检测方法，包括如下步骤: 1、性状鉴别:本品为胶囊剂，内容物为棕褐色的粉末;气清凉，味苦、微辛。
[0026]2、薄层色谱定性鉴别:
龙胆和八角莲的定性鉴别:取本品内容物lg，加入甲醇20ml，加热回流15分钟，放冷，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。分别另取龙胆对照药材与八角莲对照药材各0.5 g，按照供试品溶液的制备方法分别制成龙胆对照药材溶液和八角莲对照药材溶液，照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四0502)试验，吸取供试品溶液5μ1、龙胆对照品溶液2μ1、八角莲对照品溶液2μ1，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比乙酸乙酯:甲醇:水= 8-12:2:1的乙酸乙酯-甲醇混合水溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置于波长为254nm的紫外光灯下检视;供试品色谱中，在与龙胆对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，在与八角莲对照药材色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。
[0027]柴胡与大叶柴胡的定性鉴别:取本品内容物3g，加水20ml，搅拌使溶解，离心，取上清液，加在聚酰胺柱(100?200目，8g，内径为2.5?3cm，湿法装柱)上，分别用204乙醇溶液和50v%乙醇溶液各10ml洗脱，收集5(^%乙醇溶液洗脱液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取柴胡对照药材lg，大叶柴胡对照药材lg，分别加水适量，分别煎煮1.5小时，滤过，滤液浓缩至约1ml，加在聚酰胺柱(100?200目，4g，内径为2cm，湿法装柱)上，分别用水10ml和5(^%乙醇溶液150ml洗脱，收集5(^%乙醇溶液洗脱液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，得到柴胡对照品溶液和大叶柴胡对照品溶液。照薄层色谱法试验(《中国药典》2015年版四0502)，分别吸取供试品溶液2?10μ1、柴胡对照药材溶液2μ1和大叶柴胡对照药材溶液2μ I，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比乙酸乙酯:乙醇:水=I O-14: 2:1的乙酸乙酯-乙醇混合水溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5wt%对二甲氨基苯甲醛的10wt%硫酸-乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，置于波长为365nm的紫外光灯下进行检视;供试品色谱中，在与柴胡对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，在与大叶柴胡对照药材色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。
[0028]栀子的定性鉴别:取本品内容物3g，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取栀子对照药材0.5g，加甲醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至约2ml，作为栀子对照药材溶液。再取栀子苷对照品，加甲醇制成浓度为2g/L的溶液，作为栀子苷对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四0502)试验，吸取上述三种溶液各5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比三氯甲烷:甲醇=3:1的三氯甲烷-甲醇溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10wt%硫酸乙醇溶液，在105°(:加热至斑点显色清晰;供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0029]以下采用具体的实施例和对比例来说明本发明检测方法的有益效果。在以下的实施例和对比例中，熊胆丸的制备方法为:1、分别称取龙胆1013g、泽泻(盐制)608g、地黄760g、当归608g、桅子608g、菊花608g、车前子(盐制)608g、决明子608g、柴胡608g、防风608g、黄芩608g、木贼608g、黄连粉608g、薄荷脑62.29g、大黄1031g、冰片76g、熊胆12.66g备用;2、将熊胆、薄荷脑、冰片研成细粉，与黄连粉末配研，过筛，混匀得混合粉末A; 3、将龙胆、泽泻(盐制)、地黄、当归、桅子、菊花、车前子(盐制)、决明子、柴胡、防风、黄芩、木贼、黄连粉、大黄等十三味，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次I小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成稠膏，干燥，粉碎，过筛得混合粉末B;4、将步骤2和3所得粉末A、粉末B与适量辅料混合，过筛，混匀，装胶囊，制成10000粒，即得熊胆丸。
[0030]功能与主治:清热散风，止痛退翳。用于风热或肝经湿热引起的目赤肿痛，羞明多泪。
[0031]用法与用量:口服，一次4粒，一日2次，小儿酌减。
[0032]注意:孕妇忌服。
[0033]规格:每粒装0.25g。
[0034]贮藏:密封。
[0035]实施例1:
1、性状鉴别:
本品为胶囊剂，内容物为棕褐色的粉末;气清凉，味苦、微辛。
[0036]2、薄层色谱定性鉴别:
龙胆和八角莲的定性鉴别:取本品内容物lg，加入甲醇20ml，加热回流15分钟，放冷，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。分别另取龙胆对照药材与八角莲对照药材各0.5g，按照供试品溶液的制备方法分别制成龙胆对照药材溶液和八角莲对照药材溶液，照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四0502)试验，吸取供试品溶液5μ1、龙胆对照品溶液2μ1、八角莲对照品溶液2μ1，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比乙酸乙酯:甲醇:水=10:2:1的乙酸乙酯-甲醇混合水溶液为展开剂，展开40min，取出，晾干，置于波长为254nm的紫外光灯下检视;供试品色谱中，在与龙胆对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，在与八角莲对照药材色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。
[0037]柴胡与大叶柴胡的定性鉴别:取本品内容物3g，加水20ml，搅拌使溶解，离心，取上清液，加在聚酰胺柱(150目，8g，内径为2.8cm，湿法装柱)上，分别用20v%乙醇溶液和5(^%乙醇溶液各10ml洗脱，收集5(^%乙醇溶液洗脱液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取柴胡对照药材lg，大叶柴胡对照药材lg，分别加水适量，分别煎煮1.5小时，滤过，滤液浓缩至约1ml，加在聚酰胺柱(150目，4g，内径为2cm，湿法装柱)上，分别用水10ml和5(^%乙醇溶液150ml洗脱，收集5(^%乙醇溶液洗脱液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，得到柴胡对照品溶液和大叶柴胡对照品溶液。照薄层色谱法试验(《中国药典》2015年版四0502)，分别吸取供试品溶液5μ1、柴胡对照药材溶液2μ1和大叶柴胡对照药材溶液2μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比乙酸乙酯:乙醇:水= 12:2:1的乙酸乙酯-乙醇混合水溶液为展开剂，展开50min，取出，瞭干，喷以5wt%对二甲氨基苯甲醛的10wt%硫酸-乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，置于波长为365nm的紫外光灯下进行检视。供试品色谱中，在与柴胡对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，在与大叶柴胡对照药材色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。
[0038]栀子的定性鉴别:取本品内容物3g，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取栀子对照药材0.5g，加甲醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至约2ml，作为栀子对照药材溶液。再取栀子苷对照品，加甲醇制成浓度为2g/L的溶液，作为栀子苷对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四0502)试验，吸取上述三种溶液各5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比三氯甲烷:甲醇=3:1的三氯甲烷-甲醇溶液为展开剂，展开40min，取出，晾干，喷以10^%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0039]实施例2:
1、性状鉴别:本品为胶囊剂，内容物为棕褐色的粉末;气清凉，味苦、微辛。
[0040]2、薄层色谱定性鉴别:
龙胆和八角莲的定性鉴别:取本品内容物lg，加入甲醇20ml，加热回流15分钟，放冷，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。分别另取龙胆对照药材与八角莲对照药材各0.5g，按照供试品溶液的制备方法分别制成龙胆对照药材溶液和八角莲对照药材溶液，照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四0502)试验，吸取供试品溶液5μ1、龙胆对照品溶液2μ1、八角莲对照品溶液2μ1，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比乙酸乙酯:甲醇:水= 8:2:1的乙酸乙酯-甲醇混合水溶液为展开剂，展开40min，取出，晾干，置于波长为254nm的紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与龙胆对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，在与八角莲对照药材色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。
[0041 ]柴胡与大叶柴胡的定性鉴别:取本品内容物3g，加水20ml，搅拌使溶解，离心，取上清液，加在聚酰胺柱(100目，8g，内径为2.5cm，湿法装柱)上，分别用20v%乙醇溶液和5(^%乙醇溶液各10ml洗脱，收集5(^%乙醇溶液洗脱液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取柴胡对照药材lg，大叶柴胡对照药材lg，分别加水适量，分别煎煮1.5小时，滤过，滤液浓缩至约1ml，加在聚酰胺柱(100目，4g，内径为2cm，湿法装柱)上，分别用水10ml和5(^%乙醇溶液150ml洗脱，收集5(^%乙醇溶液洗脱液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，得到柴胡对照品溶液和大叶柴胡对照品溶液。照薄层色谱法试验(《中国药典》2015年版四0502)，分别吸取供试品溶液2μ1、柴胡对照药材溶液2μ1和大叶柴胡对照药材溶液2μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比乙酸乙酯:乙醇:水= 10:2:1的乙酸乙酯-乙醇混合水溶液为展开剂，展开50min，取出，瞭干，喷以5wt%对二甲氨基苯甲醛的10wt%硫酸-乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，置于波长为365nm的紫外光灯下进行检视。供试品色谱中，在与柴胡对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，在与大叶柴胡对照药材色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。
[0042]栀子的定性鉴别:取本品内容物3g，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取栀子对照药材0.5g，加甲醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至约2ml，作为栀子对照药材溶液。再取栀子苷对照品，加甲醇制成浓度为2g/L的溶液，作为栀子苷对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四0502)试验，吸取上述三种溶液各5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比三氯甲烷:甲醇=3:1的三氯甲烷-甲醇溶液为展开剂，展开40min，取出，晾干，喷以10^%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0043]实施例3:
1、性状鉴别:本品为胶囊剂，内容物为棕褐色的粉末;气清凉，味苦、微辛。
[0044]2、薄层色谱定性鉴别:
龙胆和八角莲的定性鉴别:取本品内容物lg，加入甲醇20ml，加热回流15分钟，放冷，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。分别另取龙胆对照药材与八角莲对照药材各0.5g，按照供试品溶液的制备方法分别制成龙胆对照药材溶液和八角莲对照药材溶液，照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四0502)试验，吸取供试品溶液5μ1、龙胆对照品溶液2μ1、八角莲对照品溶液2μ1，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比乙酸乙酯:甲醇:水= 12:2:1的乙酸乙酯-甲醇混合水溶液为展开剂，展开40min，取出，晾干，置于波长为254nm的紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与龙胆对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，在与八角莲对照药材色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。
[0045]柴胡与大叶柴胡的定性鉴别:取本品内容物3g，加水20ml，搅拌使溶解，离心，取上清液，加在聚酰胺柱(200目，8g，内径为3cm，湿法装柱)上，分别用20v%乙醇溶液和50v%乙醇溶液各10ml洗脱，收集5(^%乙醇溶液洗脱液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取柴胡对照药材lg，大叶柴胡对照药材lg，分别加水适量，分别煎煮1.5小时，滤过，滤液浓缩至约1ml，加在聚酰胺柱(200目，4g，内径为2cm，湿法装柱)上，分别用水10ml和5(^%乙醇溶液150ml洗脱，收集5(^%乙醇溶液洗脱液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，得到柴胡对照品溶液和大叶柴胡对照品溶液。照薄层色谱法试验(《中国药典》2015年版四0502)，分别吸取供试品溶液10μ1、柴胡对照药材溶液2μ1和大叶柴胡对照药材溶液2μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比乙酸乙酯:乙醇:水=14: 2:1的乙酸乙酯-乙醇混合水溶液为展开剂，展开50min，取出，瞭干，喷以5wt%对二甲氨基苯甲醛的10wt%硫酸-乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，置于波长为365nm的紫外光灯下进行检视。供试品色谱中，在与柴胡对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，在与大叶柴胡对照药材色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。
[0046]栀子的定性鉴别:取本品内容物3g，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取栀子对照药材0.5g，加甲醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至约2ml，作为栀子对照药材溶液。再取栀子苷对照品，加甲醇制成浓度为2g/L的溶液，作为栀子苷对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四0502)试验，吸取上述三种溶液各5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比三氯甲烷:甲醇=3:1的三氯甲烷-甲醇溶液为展开剂，展开40min，取出，晾干，喷以10^%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0047]对比例1:
考察龙胆和八角莲的薄层色谱定性鉴别中，展开剂对薄层色谱定性鉴别的影响，其余均同实施例1。
[0048](I)采用体积比乙酸乙酯:甲醇:水=7:2:1的乙酸乙酯-甲醇混合水溶液为展开剂，展开仅需要30min，对八角莲的分离效果好，但是对龙胆的分离效果差，无法对龙胆进行有效鉴别，即不能很好的鉴别出熊胆丸中是否含有龙胆。
[0049](2)采用体积比乙酸乙酯:甲醇:水=13:2:1的乙酸乙酯-甲醇混合水溶液为展开剂，对龙胆的分离效果好，但是对八角莲的分离效果差，无法对八角莲进行有效鉴别，即不能很好的鉴别出熊胆丸中是否含有八角莲，且展开时间需要55min。
[0050]由本对比例可知，当乙酸乙酯-甲醇混合水溶液中乙酸乙酯:甲醇:水的体积比小于8:2:1，虽然展开时间由40min缩短到30min，但是对龙胆的分离效果差，无法对龙胆进行有效鉴别。当乙酸乙酯-甲醇混合水溶液中乙酸乙酯:甲醇:水的体积比大于12:2:1，虽然对龙胆的分离效果好，但是对八角莲的分离效果差，无法对八角莲进行有效鉴别，即不能很好的鉴别出熊胆丸中是否含有八角莲，且展开时间需要55min。因此，本发明所述的以乙酸乙酯-甲醇混合水溶液(8-12:2:1)为展开剂，对龙胆和八角莲的展开效果都好，且展开时间适宜，以较大的优势处于较佳的效果。
[0051 ] 对比例2:
考察柴胡和大叶柴胡的薄层色谱定性鉴别中，展开剂对薄层色谱定性鉴别的影响，其余均同实施例1。
[0052](I)采用体积比乙酸乙酯:乙醇:水=9:2:1的乙酸乙酯-乙醇混合水溶液为展开剂，展开仅需要40min，但是分离效果差，无法对柴胡和大叶柴胡进行有效鉴别。
[0053](2)采用体积比乙酸乙酯:乙醇:水=15:2:1的乙酸乙酯-乙醇混合水溶液为展开剂，分离效果与实施例1?3基本相当，但是展开时间需要65min。
[0054]由本对比例可知，当乙酸乙酯-乙醇混合水溶液中乙酸乙酯:乙醇:水的体积比小于10: 2:1，虽然展开时间由50min缩短到40min，但是分离效果差，无法对柴胡和大叶柴胡进行有效鉴别。当乙酸乙酯-乙醇混合水溶液中乙酸乙酯:乙醇:水的体积比大于14:2:1，分离效果与实施例1?3基本相当，但是展开时间需由50min延长至65min。因此，本发明所述的以乙酸乙酯-乙醇混合水溶液(10-14:2:1)为展开剂，展开效果好，展开时间适宜，以较大的优势处于较佳的效果。
【主权项】
1.一种熊胆丸的检测方法，包括性状检测和薄层色谱定性鉴别，其特征在于，所述的薄层色谱定性鉴别包括对熊胆丸中龙胆和八角莲的定性鉴别、柴胡和大叶柴胡的定性鉴别、栀子的定性鉴别； (1)、性状:本品为胶囊剂，内容物为棕褐色的粉末;气清凉，味苦、微辛； (2)、薄层色谱定性鉴别: 龙胆和八角莲的定性鉴别:分别以龙胆对照药材和八角莲对照药材为对照品，以体积比乙酸乙酯:甲醇:水=8-12: 2:1的乙酸乙酯-甲醇混合水溶液为展开剂，用薄层色谱法鉴别； 柴胡和大叶柴胡的定性鉴别:分别以柴胡对照药材和八角莲对照药材为对照品，以体积比乙酸乙酯:乙醇:水=10-14:2:1的乙酸乙酯-乙醇混合水溶液为展开剂，用薄层色谱法鉴别； 栀子的定性鉴别:以栀子对照药材为对照品，以体积比三氯甲烷:甲醇=3:1的三氯甲烷-甲醇溶液为展开剂，用薄层色谱法鉴别。2.根据权利要求1所述熊胆丸的检测方法，其特征在于，所述(2)中龙胆和八角莲的薄层色谱定性鉴别具体步骤为:取本品内容物，加入甲醇，加热回流，放冷，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液;分别另取龙胆对照药材与八角莲对照药材，按照供试品溶液的制备方法分别制成龙胆对照药材溶液和八角莲对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、龙胆对照品溶液、八角莲对照品溶液，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比乙酸乙酯:甲醇:水=8-12: 2:1的乙酸乙酯-甲醇混合水溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置于紫外光灯下检视;供试品色谱中，在与龙胆对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，在与八角莲对照药材色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。3.根据权利要求2所述熊胆丸的检测方法，其特征在于，所述龙胆和八角莲的薄层色谱定性鉴别中以体积比乙酸乙酯:甲醇:水= 10:2:1的乙酸乙酯-甲醇混合水溶液为展开剂。4.根据权利要求2所述熊胆丸的检测方法，其特征在于，所述龙胆和八角莲的薄层色谱定性鉴别中检视的紫外光波长为254nm。5.根据权利要求1所述熊胆丸的检测方法，其特征在于，所述(2)中柴胡与大叶柴胡的薄层色谱定性鉴别具体步骤为:取本品内容物，加水，搅拌溶解，离心，取上清液，加在聚酰胺柱上，分别用水、20v%乙醇溶液和50v%乙醇溶液洗脱，收集5(^%乙醇溶液洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液;另取柴胡对照药材、大叶柴胡对照药材，分别加水，分别煎煮，滤过，滤液浓缩，取浓缩液加在聚酰胺柱上，分别用水和50v%乙醇溶液洗脱，收集50v%乙醇溶液洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，得到柴胡对照品溶液和大叶柴胡对照品溶液； 照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、柴胡对照品溶液和大叶柴胡对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比乙酸乙酯:乙醇:水= 10-14: 2:1的乙酸乙酯-乙醇混合水溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以对二甲氨基苯甲醛的硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，置于紫外光灯下进行检视;供试品色谱中，在与柴胡对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，在与大叶柴胡对照药材色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。6.根据权利要求5所述熊胆丸的检测方法，其特征在于，所述柴胡与大叶柴胡的薄层色谱定性鉴别中以体积比乙酸乙酯:乙醇:水=12: 2:1的乙酸乙酯-乙醇混合水溶液为展开剂。7.根据权利要求5所述熊胆丸的检测方法，其特征在于，所述柴胡与大叶柴胡的薄层色谱定性鉴别中检视的紫外光波长为365nm。8.根据权利要求1所述熊胆丸的检测方法，其特征在于，所述(2)中栀子的薄层色谱定性鉴别具体步骤为:取本品内容物，加甲醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取栀子对照药材，加甲醇，超声处理，滤过，滤液浓缩，作为栀子对照品溶液;再取栀子苷对照品，加甲醇制成溶液，作为栀子苷对照品溶液;照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比三氯甲烷:甲醇=3:1的三氯甲烷-甲醇溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸-乙醇溶液，加热至斑点显色清晰;供试品色谱中，在与栀子对照药材色谱和栀子苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。9.根据权利要求8所述熊胆丸的检测方法，其特征在于，所述栀子的薄层色谱定性鉴别中栀子苷对照品溶液浓度为2g/L。10.根据权利要求8所述熊胆丸的检测方法，其特征在于，所述栀子的薄层色谱定性鉴别中硫酸-乙醇溶液的浓度为10wt%。
【文档编号】G01N30/90GK105929102SQ201610328299
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年5月18日
【发明人】钟茂团, 黎黎, 温国梁, 何德中, 林剑
【申请人】四川逢春制药有限公司