滋肾降糖丸组分的检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种滋肾降糖丸组分的检测方法，包括：用第一类甲醇溶液配制对照品溶液；用第二类甲醇溶液溶解滋肾降糖丸粉末，制得供试品溶液；采用高效液相色谱法检测所述对照品溶液及供试品溶液，分别获得对照品特征图谱与供试品特征图谱；比对特征图谱，确定滋肾降糖丸的组分。本发明首次采用HPLC法对滋肾降糖丸的特征图谱进行研究，并采用同一测定方法测得该制剂中的5种成分，通过定性和定量的研究，可更全面的监控制剂的内在物质变化，确保产品的质量。
【专利说明】
滋肾降糖丸组分的检测方法
技术领域
[0001]本发明涉及中药组分检测技术领域，尤其是涉及一种滋肾降糖丸组分的检测方法及系统。
【背景技术】
[0002]滋肾降糖丸的功效包括:益气养阴，滋肾壮骨。用于糖尿病及其它并发症、骨质疏松等症。
[0003]作为一种中成药，消费者很关心滋肾降糖丸的质量，其中中药材多为植物的干燥器官，由于复杂的自然环境、社会状况以及我国历史上科技发展不平衡等多种原因，造成了中药材在应用方面的复杂性。同一名称的中药材可能来自不同基源的植物。同一基源的中药材由于产地不同、采收季节和生长年限不同而存在差别。一些中药材，特别是名贵药材，常可见到伪品与正品相混淆。由于以上因素的存在，使得不同来源的同种中药材其化学组成有可能相同，也有可能不同，这就必然影响到中医的临床疗效和中药的实验研究，并影响以其为原料生产出的中成药的化学组成，从而影响其质量和疗效。此外，我国中成药品种繁多，中成药生产过程中各工艺环节的稳定性等多种因素对产品的化学组成也具有重要的影响。从现有的中药内在检测现状来看，还存在很多问题需逐步解决。其中，最突出的问题之一就是中药整体化学特征的表征。
[0004]现今多采用中药特征图谱进行检测，其中中药特征图谱是指中药材经过适当的处理后，采用一定的分析手段和仪器检测得到，能够标识其中各种组分群体特征的共有峰的图谱。它是一种综合的、可量化的鉴别手段，可用于鉴别中药材的真伪，评价中药材质量的均一性和稳定性。中药特征图谱可分为化学(成分)特征图谱和生物特征图谱。
[0005]但长期以来，滋肾降糖丸的检测方法由于缺乏系统的整理和归类，目前的技术手段相对落后，不利于产品质量的监控。因此建立一套有效的滋肾降糖丸的检测方案显得亟需。
【发明内容】
[0006]本发明所要解决的技术问题是:提供一种利用HPLC法检测滋肾降糖丸组分的方案，可实现定性定量检测，更全面监控制剂的内在物质变化，确保产品质量。
[0007]为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为:提供一种滋肾降糖丸组分的检测方法，包括:
[0008]用第一类甲醇溶液配制对照品溶液；
[0009]用第二类甲醇溶液溶解滋肾降糖丸粉末，制得供试品溶液；
[0010]采用高效液相色谱法检测所述对照品溶液及供试品溶液，分别获得对照品特征图谱与供试品特征图谱；
[0011]比对特征图谱，确定滋肾降糖丸的组分。
[0012]本发明的有益效果在于:区别于现有技术，本发明首次采用HPLC法对滋肾降糖丸的特征图谱进行研究，并采用同一测定方法测得该制剂中的5种成分，通过定性和定量的研究，可更全面的监控制剂的内在物质变化，确保产品的质量。
【附图说明】
[0013]图1为本发明方法实施例的流程示意图；
[0014]图2为本发明具体实施例中滋肾降糖丸特征图谱示意图。
【具体实施方式】
[0015]为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图予以说明。
[0016]本发明最关键的构思在于:用HPLC法对滋肾降糖丸的特征图谱进行研究，并测得该制剂成分。
[0017]如图1所示，本发明实施例提供一种滋肾降糖丸组分的检测方法，包括:
[0018]S1:用第一类甲醇溶液配制对照品溶液；
[0019]S2:用第二类甲醇溶液溶解滋肾降糖丸粉末，制得供试品溶液；
[0020]S3:采用高效液相色谱法检测所述对照品溶液及供试品溶液，分别获得对照品特征图谱与供试品特征图谱；
[0021]S4:比对特征图谱，确定滋肾降糖丸的组分。
[0022]本发明提供一种滋肾降糖丸组分的检测方法是目前首次采用HPLC法对滋肾降糖丸的特征图谱进行研究，并采用同一测定方法可针对制剂中的5种成分进行测试，通过定性和定量的研究，可更全面的监控制剂的内在物质变化，确保产品的质量。具体包括如下步骤:
[0023](a)制备对照品溶液:用甲醇溶液配制含三七皂苷Rl、人参皂苷Rgl、人参皂苷Re、淫羊藿苷、人参皂苷Rb I混合对照品溶液；
[0024]应当理解的是，这些物质是滋肾降糖丸中主要药材所含的指标或有效成分，因此选择这些物质，对这些组分进行检测和监控，可更有效反应制剂的质量。
[0025]具体地，步骤(a)中所述的对照品溶液浓度均为0.lmg/ml的三七皂苷Rl、人参皂苷Rgl、人参皂苷Re、淫羊藿苷、人参皂苷Rb I混合对照品溶液。
[0026](b)制备供试品溶液:取滋肾降糖丸粉末，精密称定，用100%甲醇溶液溶解，超声处理，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液;过滤的目的是去除杂质，保护仪器。
[0027]具体地，取滋肾降糖丸粉末0.5-1.5g，精密称定，置具塞50_100ml锥形瓶中，精密加入70 %甲醇20ml，密塞，称定重量，超声处理10-40分钟，放冷，再称定重量，用70 %甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
[0028]在一个具体实施例中，取滋肾降糖丸粉末0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70 %甲醇10ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用70 %甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
[0029 ] 具体地，可精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5-15μ1 (如1微升)进行试验。
[0030](c)采用高效液相色谱法进行检测对照品溶液或供试品溶液，如注入高效液相色谱仪后在DAD检测器(DAD又名PDA,是photo-d1de-detector的简写，即图像-二极管-列阵-检测器，属于紫外检测器的一种，用于高效液相色谱，气相的成分检测)的信号反映，之后通过转换成为特定的色谱图，即滋肾降糖丸特征图谱；
[0031 ]应当说明的是，高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography\HPLC)又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相栗入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。
[0032]其中色谱条件为:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，进行梯度洗脱，检测波长为203nm。十八烷基硅烷键合硅胶(0DS/C18)属于反相柱中的填料，这种填料在反相色谱中发挥着极为重要的作用，它可完成高效液相色谱70?80%的分析任务。色谱柱为Agilent TC-C18(尺寸为250mm*4.6mm*5ym)，以水为流动相A液，乙腈为流动相B液，梯度洗脱:0_12min，81%八；12-6011^11，81%-64%厶;流速1.01111/11^11;检测波长为20311111。
[0033]另外，在正相色谱中，填料是极性的，官能团为一CN氰基、一NH2氨基等。这种方式主要用于分离异构体，极性不同的化合物，特别是用来分离不同类型的化合物。因此，本发明以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。
[0034]选择203nm波长主要针对皂苷类成分，参照《中国药典》选择的。另外，该波长下各色谱峰干扰小且分离度好，因此选择此波长。
[0035]在得到滋肾降糖丸的指纹图谱，图谱上显示有11个特征峰，并有相对的保留时间规定值。如果在生产过程中由于药材原料的质量、生产或贮藏过程等问题导致指纹图谱中不能显示完整的11个特征峰，那么说明滋肾降糖丸的质量存在问题。
[0036]如图2所示，滋肾降糖丸特征图谱包括三七皂苷Rl (峰2)、人参皂苷Rgl (峰3)、人参皂苷Re (峰4)、淫羊藿苷(峰9，参比峰)和人参皂苷Rbl (峰11) 5个已知特征峰(这5个特征峰在对照品溶液中也可检测到，通过比对，可以确定供试品溶液中含有这5种成分)外，还获得峰1、5、6、7、8和10共6个特征峰。
[0037]获得11个共有特征峰，依次标记，选择保留时间为测定值，其中保留时间是被测物质如淫羊藿苷进入高效液相色谱柱后被检测到的时间，用于定位某一成分在色谱图中的位置。分别为:21.411111丨11(峰1)、30.776111丨11(峰2)、34.606111丨11(峰3)、35.395111丨11(峰4)、37.32Omina$5)、44.168mina$6)、45.467mina$7)、46.74Omin0$8)、48.271mina$9，#照峰)、57.565min(峰10)、61.115min(峰11);
[0038]参照峰用于计算“相对保留时间”，即选定的特征峰的保留时间与参照峰的保留时间之比得出特征峰的相对保留时间。峰9为参照峰。
[0039]计算特征峰1-11的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5%之内，即规定值为:0.444(峰I)、0.638(峰2)、0.717(峰3)、0.733(峰4)、0.773(峰5)、0.915(峰6)、
0.942(峰 7)、0.968(峰 8)、1.000(峰 9，参比峰)、1.193(峰 10)、1.266(峰 11)。
[0040]以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
【主权项】
1.一种滋肾降糖丸组分的检测方法，其特征在于，包括: 用第一类甲醇溶液配制对照品溶液； 用第二类甲醇溶液溶解滋肾降糖丸粉末，制得供试品溶液； 采用高效液相色谱法检测所述对照品溶液及供试品溶液，分别获得对照品特征图谱与供试品特征图谱； 比对特征图谱，确定滋肾降糖丸的组分。2.根据权利要求1所述滋肾降糖丸组分的检测方法，其特征在于，所述第一类甲醇溶液为纯甲醇溶液，所述对照品溶液包括三七皂苷Rl、人参皂苷Rgl、人参皂苷Re、淫羊藿苷、人参皂苷Rb I，其浓度为0.lmg/ml。3.根据权利要求1所述滋肾降糖丸组分的检测方法，其特征在于，称定滋肾降糖丸粉末0.5?1.5g，并置具塞50-100ml锥形瓶中，加入浓度70 %的甲醇溶液20ml，密塞，称定重量，超声处理10-40分钟，冷却再称定重量，用浓度70 %的甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。4.根据权利要求1所述滋肾降糖丸组分的检测方法，其特征在于，称定滋肾降糖丸粉末0.1g,置具塞75ml锥形瓶中，加入浓度70%的甲醇溶液20ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，冷却再称定重量，用浓度70 %的甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。5.根据权利要求1所述滋肾降糖丸组分的检测方法，其特征在于，取相同体积的对照品溶液及供试品溶液5?15ul注入高效液相色谱仪中，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，进行梯度洗脱，在DAD检测器检测信号反映，并转换成对应的特征图谱。6.根据权利要求5所述滋肾降糖丸组分的检测方法，其特征在于，取相同体积的对照品溶液及供试品溶液1ul注入高效液相色谱仪中，所述高效液相色谱仪测定的色谱条件为:色谱柱为Agilent TC-C18，尺寸250mm*4.6mm*5ym，以水为流动相A液，乙腈为流动相B液；当流动相A液浓度为81 %时，梯度洗脱O?12min;当流动相A液浓度为64% -81 %时，梯度洗脱12-60min ；流速为1.0ml/min ；检测波长为203nm。7.根据权利要求1所述滋肾降糖丸组分的检测方法，其特征在于，获得对照品特征图谱的特征峰及其保留时间规定值，及供试品特征图谱的特征峰及其保留时间规定值，比对保留时间规定值，确定供试品成分。8.根据权利要求7所述滋肾降糖丸组分的检测方法，其特征在于，对照品特征图谱包括5个特征峰，供试品特征图谱包括11个特征峰，并依次标记； 且相比对照品特征图谱，其中供试品特征图谱的峰2对应三七皂苷Rl、峰3对应人参皂苷Rgl、峰4对应人参皂苷Re、峰9对应淫羊藿苷及峰11对应人参皂苷Rbl。9.根据权利要求8所述滋肾降糖丸组分的检测方法，其特征在于，供试品特征图谱上的11个特征峰选择保留时间为测定值，分别为:峰I为21.41 lmin、峰2为30.776min、峰3为34.606minJ$4S35.395minJ$5S37.320minJ$6S44.168minJ$7S45.467minJ$8S46.740min、峰9为48.271min、峰10为57.565min、峰11为61.115min。10.根据权利要求9所述滋肾降糖丸组分的检测方法，其特征在于，设置其中对应淫羊藿苷的峰9为参照峰;并计算11个特征峰的相对保留时间，其中，相对保留时间在规定值的±5%之内。
【文档编号】G01N30/02GK106053621SQ201610308238
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年5月11日
【发明人】李惠林, 陈剑平, 张尚斌, 余晓丹, 郑平
【申请人】深圳市中医院