专利名称：中成药所含药味的鉴定方法
技术领域：
本发明涉及中药测试方法，具体涉及一种中成药所含药味的鉴定方法。
随着人们生活水平的不断提高，医疗保健事业得以迅速发展，中成药已逐渐被人们所应用。由于中药的质量控制未能科学规范，尤其是中成药中所含药味的鉴定一直是比较困难的问题。因此在较大程度上限制了中成药的应用。
目前，常用于中成药所含药味的鉴定方法是薄层色谱法，中国药典95版一部所收载的中成药，其鉴别项目均采用此法。但是，在鉴定时仅用一个标准化合物作依据，方法比较粗糙。
本发明的目的在于克服现有鉴定方法的不足，探索一种能从中成药中鉴定其所含药味的科学方法。
本发明提供了一种中成药所含药味的鉴定方法。本发明的方法是以色谱相对保留值指纹谱来鉴定的。
“色谱相对保留值指纹谱”系本发明者在1988年首次提出，并用于柴胡属植物的品种区分和鉴别，该论文发表于药学学报(1988年23(11)839～845)。根据指纹谱可鉴定符合药典用药要求的柴胡品种，也指出了有毒的柴胡品种。以后，在1991年又于中国中药杂志发表了这一方法在麝香、檀香等贵重进口药材方面的鉴别应用，1993年又将该法从气相色谱扩展到高效液相色谱，对大黄属植物进行了鉴别鉴定研究，接着又在地榆、红参、牛黄、吴茱萸等中药的鉴别研究中作了进一步的完善。
本发明的基本原理是基于每一味中药有特征的色谱相对保留值。若能在相同色谱条件下的中成药指纹谱中找到该味中药的特征指纹，即可由此作为该味中药的鉴定基础。由于每个中成药样品都可经色谱试验获得其色谱图，该色谱图可作其内在性质的表征和鉴定的依据，但色谱图的可比性很差，本发明通过色谱峰的相对保留值使其数据化，形成数据化的指纹谱，使各样品的指纹谱具有了可比性，也使中成药所含药味的指纹谱鉴定成为可能。
本发明的中成药所含药味的鉴定方法包括下列步骤一.建立指纹谱在相同的色谱条件下，分别进行中成药和待鉴药味的色谱分析实验，然后选定待鉴药味中的特征峰作为内参照峰，分别求取每个色谱峰的相对保留值，以相对保留值及各自对应的峰面积构成色谱相对保留值指纹谱；二.确立特征指纹对样品的色谱图进行数据处理，建立它们的色谱相对保留值指纹谱，从中确立待鉴药味的特征指纹；三.鉴定药味从中成药指纹谱中寻找该药味的特征指纹，据此鉴定该药味的存在与否。
本发明的方法中内参照峰的标定是建立指纹谱的关键，本发明采用外标定位法，并经LC-MS和GC-MS法验证，完全正确可靠。
本发明方法中特征指纹确立时，应注意①药味的特征组分；②含量较高的色谱峰应进入特征指纹，特征指纹的峰面积和应大于药味所有色谱峰面积和的50％；③特征指纹在中成药指纹谱中的检出率应大于50％。
本发明方法准确可靠，有广泛的应用前景。
本发明的成功意味着中成药中所含药味的鉴定将不再成为疑难问题，它对药品的质量起到保证作用，从而确保临床疗效；还可制止中成药的掺伪作假；并能为中成药的出口提供切实可靠的质量标准；为中药走向国际市场创造条件。
本发明除可用于中成药的质量标准外，对于那些复杂组分的样品质量标准也同样适用。
实例1.麝香保心丸中麝香的鉴定首先以相同萃取条件分别制备麝香保心丸和麝香的样品溶液，然后又以相同的色谱条件分别对麝香保心丸和麝香进行气相色谱分析，得到各自的气相色谱数据和谱图。本研究为证实相对保留值的可信性，特借助市质监局计量研究所的GC-MS仪进行实验，因此在以相对保留值作比较依据时，尚可用质谱数据作核对，由此证明相对保留值方法的可靠和可信，同时也证明其稳定性和重复性。
根据色谱相对保留值原理建立各自的指谱指纹谱，见附表一，麝香的指纹谱鉴定表。表一列出了两者各自的指纹谱。首先对麝香的指纹谱进行特征指纹的选择，根据标样和质谱的鉴定，峰号3(tR＝15.272，α＝1.000)的色谱峰是麝香酮，确立它作为基准峰是正确可靠的。同法，在麝香保心丸的指纹谱中确定峰号8(tR＝15.305)的色谱峰是麝香酮，确立它作为基准峰。根据两者的相对保留值(α)进行对比，凡两个α值相差在1％范围内者可以认为两者峰位相同而为同一物质。例如麝香保心丸中α＝1.083与麝香中α＝1.084，两者差值为9.2×10-4，远小于1％。经MS鉴定为十六碳酸。依次进行对比，麝香中有十个峰可在麝香保心丸中找到，其中麝香酮、十六碳酸、十八碳酸、5α-和5β-雄甾-3.17-二酮等已有MS鉴定。另外麝香保心丸中α值为2.699、2.725和麝香中α值为2.705、2.737这两对峰是麝香的特征峰。
麝香中的上述十个峰可认定为麝香的指纹特征，经与麝香保心丸的指纹谱对照，可按此作为麝香鉴定的依据。α值分别为下列各值1.000、1.083、1.183、1.286、1.3891.442、1.669、1.864、2.699、2.725表1麝香保心丸中麝香的指纹谱鉴定表麝香保心丸(1) 麝香
实例2.麝香保心丸中苏合香的鉴定实验条件、实验仪器设备、实验操作步骤等同实例1。在苏合香的鉴定中以Rt＝18.758和Rt＝18.749分别为麝香保心丸和苏合香的对照基准，该两峰经MS和标准品对照，鉴定为桂皮酸苄酯。表2苏合香指纹谱鉴定表，两者指纹谱的对比，在麝香保心丸的指纹谱中，可找到苏合香的特征指纹达二十二个色谱峰，其α值分别为0.756、0.884、0.911、1.000、1.072、1.133、1.145、1.176、1.192、1.196、1.200、1.216、1.227、1.246、1.260、1.266、1.275、1.282、1.293、1.317。在苏合香的指纹谱中95％以上的色谱峰均可在麝香保心丸的指纹谱中找到，说明该鉴定是可信的。表2麝香保心丸中苏合香的指纹谱鉴定表麝香保心丸(2) 苏合香1表示相对保留值与质谱图分析都一致的化合物。2保心丸*20与*21质谱图分析的结构和苏合香*11非常相似，只是在*20的C5位以及*21为左旋有差异。 3表示相对保留值相近。
实例3.麝香保心丸中肉桂的鉴定实验条件、实验操作步骤和实验仪器设备同实例1。在表3肉桂指纹谱鉴定表中，保心丸和肉桂的指纹谱建立均以Rt＝8.813和Rt＝8.787的色谱峰作为对照基准，该两色谱峰经对照品和MS鉴定为桂皮醛。对照保心丸和肉桂两者的指纹谱，在麝香保心丸的指纹谱中可找到十一个肉桂的特征指纹，其α值分别为1.000、1.610、1.879、2.183、2.192、2.230、2.697、2.745、3.243、3.732、4.700。其核对窗口为小于1％，鉴定结果可靠。表3肉桂的指纹谱鉴定表麝香保心丸(3) 肉桂
权利要求
1.一种中成药所含药味的鉴定方法，其特征在于该方法包括下列步骤(1)建立指纹谱在相同的色谱条件下，分别进行中成药和待鉴药味的色谱分析实验，然后选定待鉴药味中的特征峰作为内参照峰，分别求取每个色谱峰的相对保留值，以相对保留值及各自对应的峰面积构成色谱相对保留值指纹谱；(2)确立特征指纹对样品的色谱图进行数据处理，建立它们的色谱相对保留值指纹谱，从中确立待鉴药味的特征指纹；(3)鉴定药味从中成药指纹谱中寻找该药味的特征指纹，据此鉴定该药味的存在与否。
2.根据权利要求1所述的一种中成药所含药味的鉴定方法，其特征在于其中所述的确立特征指纹时应含有药味的特征组分；含量较高的色谱峰应进入特征指纹，特征指纹的峰面积和应大于药味所有色谱峰面积和的50％；特征指纹在中成药指纹谱中的检出率应大于50％。
全文摘要
本发明涉及中药鉴定方法。本发明提供了一种中成药所含药味的鉴定方法。本发明通过从中成药指纹谱中找中药的特征指纹来鉴定是否含有某味中药。本发明方法准确可靠,有广泛应用的前景。
文档编号G06F19/00GK1326163SQ0011629
公开日2001年12月12日 申请日期2000年5月31日 优先权日2000年5月31日
发明者洪筱坤, 王智华 申请人:上海中医药大学