一种从牛胆粉中提取纯化含有鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸的总提取物方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及药物成分提取领域，特别地，设及一种牛胆粉中提取纯化含有碟去氧 胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸的总提取物的方法。
【背景技术】
[0002] 牛胆汁是牛科动物黄牛Bostaurus domesticus Gmelin或水牛Bubalus L.的胆 汁。牛胆汁的药用，始载于汉代的《神农本草经》一书，列为中品，后世本草亦时有论述。本品 味苦性寒，具有清肝明目，利胆通肠，解毒消肿之功效，广泛用于治疗肝热目赤肿痛，小儿惊 风，痴肿疮毒及便秘、消渴等疾病。牛胆粉(干燥胆汁)又为蒙药特色药材，蒙药名为乌和仁- 苏素，具有平息协日、愈伤、解毒、明目之功效。蒙医临床用于协日病、配毒症疗效显著。目前 认为牛胆粉中主要含有胆红素、胆汁酸、胆固醇、无机元素、蛋白及氨基酸等成分。
[0003] 牛胆汁中含有多种胆酸类化学成分，其中包括碟去氧胆酸、熊去氧胆酸及猪去氧 胆酸，但其含量较低。
[0004] 碟去氧胆酸在临床上不仅用溶解胆固醇类结石和纠正饱和胆汁的药物，还具有显 著地平喘、抗炎、镇咳和桂疲等作用。碟去氧胆酸也是昂贵的熊去氧胆酸的合成原料，它们 都是治疗胆道疾病的有效药物。
[0005] 熊去氧胆酸具有细胞膜稳定作用，对肝脏毒性物质具有解毒作用，同时增加肝低 密度脂蛋白的摄取，从而增加肝细胞脂质的输出，同时增加脂肪酸氧化或甘油Ξ脂转化，缓 解肝细胞脂肪变性。
[0006] 猪去氧胆酸具有降血脂、镇疫、桂疲等作用，为人工牛横的重要成分，临床上可用 于治疗高血脂症、气管炎W及由肝胆疾病引起的消化不良，对百日咳菌、白喉杆菌、金黄色 葡萄球菌亦有抑制作用。
[0007] 现有技术中没有从牛胆粉中提取有碟去氧胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸的总提 取物技术工艺报道。
[000引1.本发明只是从牛胆粉中制备碟去氧胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸的总提取物； 主要利用的是大孔树脂；
[0009] 2.运些大孔树脂只在我们的研究中应用过，别人还没有报道；
[0010] 3.大孔树脂的优势主要是富集微量的化合物，在我们的研究中主要是利用树脂的 富集和纯化作用。
【发明内容】
[0011] 本发明的一个目的在于提供一种牛胆粉中提取纯化含有碟去氧胆酸、熊去氧胆 酸、猪去氧胆酸的总提取物的方法。
[0012] 特别地，所述从牛胆粉中提取纯化含有碟去氧胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸的总 提取物的方法是利用大孔树脂有效提取、有效除渣、有效富集、有效纯化的工作原理;利用 物美价廉的不用浓度的乙醇达到最后总提取物的纯化;提纯之后的总提取物可w进行蒙药 制剂剂型的改革研究，具体步骤包括：
[0013] (1)牛胆粉95%乙醇超声提取(超声频率50-80HZ):取一定量牛胆粉加入一定体积 95 %乙醇(物料比例1:2)超声提取3次，每次比，每一次超声提取结束后，提取液上加适量乙 酸乙醋放置30min沉淀，等完全沉淀后用布氏漏斗过滤，沉淀再加95%乙醇继续第二次提 取，W上方法提取Ξ次。最后合并过滤液。
[0014] (2)回收浓缩:回收浓缩滤液，浓缩至没有乙醇味。
[0015] (3)冷冻干燥:浓缩液冷冻干燥，得牛胆粉冻干粉。
[0016] (4)牛胆粉冻干粉40%乙醇超声(超声频率50-80HZ)溶解，备用。
[0017] (5)大孔吸附树脂分离纯化:称取1kg处理树脂于玻璃层析柱中，缓慢加入上述溶 解液，依次用20 %、40 %、60 %、80 %乙醇洗脱，过滤，收集60 %和80 %乙醇洗脱液，浓缩60 % 和80 %乙醇洗脱液，冷冻干燥60 %和80 %乙醇浓缩液。
[001引特别的，本实验中用到了多种大孔树脂，其中包括D101型，D001型、HPD-100型、 HPD-750 型、HPD-722 型、SIP1300 型、X-5 型。
[0019] 特别地，树脂经过预处理:将树脂95%乙醇适量浸泡2地，将浸泡好的树脂装柱子， 先95%乙醇冲洗，然后用纯化水冲洗，冲洗至不出现白色浑浊没有乙醇味为止，然后用5% 盐酸和5 %氨氧化钢冲柱子，各冲5个柱体积，最后5~6柱体积纯化水冲洗至中性备用。
[0020] 附图概要说明
[0021 ]附图1给出了一种本发明蒙药复方的具体提取纯化分离流程图。
[0022] 附图2显示了本发明60%和80%牛胆粉冻干粉通过化C鉴别含有碟去氧胆酸、熊去 氧胆酸和猪去氧胆酸的薄层图。用碟去氧胆酸、熊去氧胆酸和猪去氧胆酸标准品分别对照 60%和80%牛胆粉冻干粉中含有碟去氧胆酸、熊去氧胆酸和猪去氧胆酸。图2薄层鉴定的结 果显示60%和80%牛胆粉冻干粉中含有与碟去氧胆酸、熊去氧胆酸和猪去氧胆酸对照品相 同的点（相同的Rf值)且相同的颜色反应。
[0023] 薄层鉴定具体实施方法：
[0024] 展开剂：甲苯-冰醋酸-水（19.5:10:0.3)的比例配制成展开剂，并加一滴甲酸。
[0025] 显色剂：10%硫酸乙醇溶液显色剂:遵药典量取2.85ml的硫酸溶液，用乙醇稀释到 50ml制得。
【具体实施方式】 [00%] 实施例1
[0027] 称取600g牛胆粉，放入Ξ角瓶中，加入1.化的95%乙醇，封盖，放入超声波中提取， 超声波溫度30°C，时间30min，每次提取化，提取3次，每次超声提取结束后，提取液上加适量 乙酸乙醋放置30min沉淀，等提取液沉淀后过滤，最后合并过滤液，回收浓缩，冷冻干燥得 496g牛胆粉备用。
[00%] 496g牛胆粉冻干粉加适量40%乙醇超声溶解，将层析柱里处理好的D101树脂1kg， 缓慢加入40 %乙醇牛胆粉溶液，吸附解析洗脱，收集60 %和80 %乙醇洗脱液，过滤，浓缩，冷 冻干燥得产品。60 %乙醇洗脱液冻干粉29.897g，80 %乙醇洗脱液冻干粉21.182g。
[0029] 60 %和80 %牛胆粉冻干粉通过化C鉴别含有碟去氧胆酸、熊去氧胆酸和猪去氧胆 酸，其中碟去氧胆酸、熊去氧胆酸和猪去氧胆酸富集在60%牛胆粉冻干粉中。
[0030] 实施例2
[0031 ]对60 %和80 %牛胆粉冻干粉进行药效学研究，进一步证实蒙药制剂或蒙药处方 中，治疗胆石症、高脂血症、消化不良等症状的药理作用，其中W60%乙醇部位牛胆粉冻干 粉进行药效学研究为例。
[0032] (1)对胆汁分泌的影响
[0033] 采用胆道插管法，取体重为180-200g雄性大鼠 16只，随机分为二组，即空白对照组 和给药组，各8只雄性大鼠，空白组给予灌胃给生理盐水簇甲基纤维素钢混悬剂，给药组灌 胃lOOmg/kg的60%乙醇部位牛胆粉冻干粉，药后30分钟，用20%乌拉坦麻醉，手术、插胆管， 收集二小时的胆汁分泌量。
[0034] 实验结果说明60%乙醇部位牛胆粉冻干粉较对照组有显著的利胆作用，能明显增 加胆汁的分泌量，实验结果见(表1)。
[0035] (表1)60%乙醇部位牛胆粉冻干粉对大鼠胆汁分泌的影响
[0036]
[0038] (2)对血清胆固醇的影响
[0039] 采用高铁一硫酸显色法，取体重18-22g小鼠 16只，随机分为二组，即空白对照组和 给药组，各8只小鼠，空白组给予灌胃给生理盐水簇甲基纤维素钢混悬剂，给药组灌胃 300mg/kg的60%乙醇部位牛胆粉冻干粉，连续给药4天。于最后一次给药后5小时，摘除眼球 取血，制备血清后，测定其胆固醇浓度。
[0040] 结果表明，给药组与对照组之间有显著的差异，说明60%乙醇部位牛胆粉冻干粉 对血清胆固醇有明显降低作用。实验结果见(表2)
[0041 ](表2)60%乙醇部位牛胆粉冻干粉对小鼠血清胆固醇浓度的影响
[0042]
【主权项】
1. 一种牛胆粉中提取纯化含有鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸的总提取物的方 法，其特征在于包括步骤： (1) 牛胆粉95 %乙醇超声提取(超声频率50-80HZ):取一定量牛胆粉加入一定体积95 % 乙醇(物料比例1:2)超声提取3次，每次lh，每一次超声提取结束后，提取液上加适量乙酸乙 酯放置30min沉淀，等完全沉淀后用布氏漏斗过滤，沉淀再加95%乙醇继续第二次提取，以 上方法提取二次。最后合并过滤液。 (2) 回收浓缩:回收浓缩滤液，浓缩至没有乙醇味。 (3) 冷冻干燥:浓缩液冷冻干燥，得牛胆粉冻干粉。 (4) 牛胆粉冻干粉40 %乙醇超声(超声频率50-80HZ)溶解，备用。 (5) 大孔吸附树脂分离纯化:称取lkg处理树脂于玻璃层析柱中，缓慢加入上述溶解液， 依次用20 %、40 %、60 %、80 %乙醇洗脱，过滤，收集60 %和80 %乙醇洗脱液，浓缩60 %和 80 %乙醇洗脱液，冷冻干燥60 %和80 %乙醇浓缩液。2. 根据权利要求1的方法，其中处理树脂的方法为:将树脂95%乙醇适量浸泡24h，将浸 泡好的树脂装柱子，先95%乙醇冲洗，然后用纯化水冲洗，冲洗至不出现白色浑浊没有乙醇 味为止，然后用5 %盐酸和5 %氢氧化钠冲柱子，各冲5个柱体积，最后5~6柱体积纯化水冲 洗至中性备用。3. 根据权利要求1或2的方法，其中大孔树脂，其中包括D101型，D001型、HPD-100型、 HPD-750 型、HPD-722 型、SIP1300 型或 X-5 型。4. 根据权利要求1-3任一的方法制备的含有鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸的总 提取物。5. 根据权利要求4的总提取物在用于治疗胆石症、高脂血症或消化不良症状蒙药制剂 中的应用。6. 根据权利要求4的总提取物制成的蒙药制剂，其特征在于剂型包括滴丸剂、软胶囊、 胶囊剂、颗粒剂、注射剂、片剂、巴布剂、软膏剂、凝胶剂、透皮控释贴剂、喷雾剂。
【专利摘要】本发明公开了一种牛胆粉中提取纯化含有鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸的总提取物的方法，其提取纯化方法主要包含：取一定量的牛胆膏粉，用95％的乙醇浸泡(牛胆膏∶乙醇＝1∶2)，在超声波提取器中提取；提取液中加入乙酸乙酯放置30min沉淀，过滤，浓缩，冷冻干燥备用。称取一定量处理过的大孔树脂于玻璃层析柱中，将牛胆粉提取物冻干粉用40％乙醇溶解，然后缓慢加入溶解液于析柱中，洗脱过滤，浓缩，冷冻干燥得产品。采用超声提取牛胆粉提取率高，提取时间较短，工艺操作简便。本发明采用了大孔树脂法分离纯化牛胆粉提取物，该方法分离、纯化、富集的作用好，方便鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸的提取纯化。
【IPC分类】A61P1/14, A61P3/06, A61P1/16, A61K35/413
【公开号】CN105596373
【申请号】CN201510845226
【发明人】毕力格, 李汉青, 金亮, 蔚璐
【申请人】内蒙古自治区蒙医药研究所
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2015年11月27日