小球藻提取物在花椰菜种子萌发中应用及其制备方法
【技术领域】
[0001 ]本发明涉及小球藻提取物在农业技术领域的应用，具体涉及小球藻提取物在花椰 菜种子萌发中应用及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 小球藻（Ch 1 ore 1 la Iryreno idosa)隶属于绿藻门 Chlorphy ta、绿球藻目 〇11〇1'〇6〇6〇3168、卵囊藻科0〇〇5^〖3〇636、小球藻属〇11〇^11&，为海洋常见单细胞藻类，具 有重要经济价值和巨大的应用和开发潜力。小球藻天然含丰富的蛋白质、脂质、食用纤维、 生物素、纤维素、不饱和脂肪酸、生物活性多糖、核酸、维生素、微量元素、矿物质、叶酸与叶 绿素。这些特殊的有效成分具有防治消化性溃疡、抗肿瘤、增强免疫、抗辐射、抗病原微生 物、防治贫血、降血脂和抗动脉粥样硬化等保健和药理作用。其干粉的蛋白质含量在50%以 上，是优良的单细胞饲料蛋白源，在饲料中添加能提高肉猪、肉鸡和蛋鸡的生产性能，应用 于水产饲料能提高鱼类生长速度。小球藻提取物以500-1000倍稀释，喷施于蔬菜、果树等 叶面，具有增强植物的光合作用、促使根部生长旺盛、提高对养分的吸收能力以及提高对细 菌的抵抗力的效果。因此，近些年对小球藻的关注度也越来越高。从小球藻的培养、应用等 各个方面都深入研究。专利CN 102586116 B公开了"一种普通小球藻及其培养方法和应 用"，该发明培养方法把污水处理和生产生物能源与其他副产品（如，蛋白质、化妆品原料及 动物饲料等)相结合，降低生产成本，达到废物资源的综合利用，实现节能减排的绿色生产。 专利CN 103519035 B公开了"一种小球藻发酵型果冻的制备方法"该发明本发明以小球藻 为原料，利用其本身具有的高蛋白和天然色素，无需添加香精及色素，制得的果冻具有天然 的绿色，发酵乳的清香，及酸甜适宜的口感，同时又具有很高的营养价值。根据相关数据得 知，近几年来，我国小球藻的研究热点在小球藻的生物培养、生物柴油以及在保健品、食品 方面的研究，在农业技术领域的研究却寥寥无几。
[0003] 为了解决上述现有技术的不足之处，本发明的首要目的是提供一种易培养、易提 取的小球藻提取物。该发明提高了花椰菜种子的发芽率、缩短了种子萌发周期。
[0004] 本发明的另一个目的在于提供上述小球藻提取物的制备方法。
[0005] 本发明的再一个目的在于提供上述小球藻提取物在花椰菜种子萌发中应用。
[0006] 本发明的上述目的是通过如下技术方案实现：
[0007] 1、配制葡萄糖液体培养基于120°(：、11^&，条件下高压灭菌1.51 1，冷却后接入小球 藻藻种，置于培养箱中光照培养，培养温度25-30°C，培养时间3d后按1:1比例扩培至试管 中，生长至深绿时进一步扩培至l〇〇ml锥形瓶中；
[0008] 2、小球藻提取物的制备：取生长状态良好的小球藻液30mL，密度为2.0 X 107CFU/ 1111，摇勾，离心51]1；[11(25001'/1]1；[11)，离心完毕后沉淀为藻泥。向小球藻泥中加入95%乙醇制成 悬浊液，加入纤维素酶和果胶酶(比例为1: l)2-6ml，酶解24h，酶解温度25°C。酶解之后进行 再次离心，时间lOmin，转速是4000r/min。取上清液，减压蒸馏除去乙醇溶剂得小球藻提取 物；
[0009] 3、花椰菜种子的处理与培养:取大小一致，颗粒饱满的花椰菜种子，用2%双氧水 消毒2遍，蒸馏水冲洗3次，然后均匀置于铺有滤纸的玻璃培养皿中，加入配制成4%浓度的 小球藻提取液至种子完全浸泡，放入保温箱于25 °C恒温静置24h，后置于室温自然光照培养 发芽。
[0010]所述的葡萄糖液体培养基为:食品工业废水l〇〇ml、葡萄糖10.0g、微量元素。
[0011] 所述的微量元素为FeC6H5〇 · 5H20 3.9g、NaEDTA 4.35g、MnCI · 4H20 2.188g、 ZnS04*7H20 0.0278g、CoCl*6H20 0.0687g、CuS〇4*5H2〇 0.0102g、H3B03 0.08gNa2Mo〇4 2.0g〇
[0012] 所述的纤维素酶与果胶酶活性之比为1. 〇万单位:2.0万单位。
[0013] 经过小球藻提取液的浸泡处理，花椰菜种子发芽率高于95%，发芽周期缩短2到3 天。
[0014] 小球藻提取物促进种子萌发作用机理为小球藻提取物含有氨基酸、多糖、蛋白质、 维生素等功能性成分，补充了种子萌发过程所需要的营养成分，活化种子细胞，促进种子细 胞分化与生长，从而促使种子萌发。
[0015] 本发明具有以下有益效果：
[0016] 1、本发明采用工业废水作为小球藻培养基，为小球藻提供各种丰富的氮磷元素的 同时达到净化污水的效果，为实现工业绿色减排生产提供依据。
[0017] 2、由于小球藻提取液中富含各种功能性营养成分，为花椰菜种子萌发提供所需的 绿色纯天然各种营养物质，缩短种子发芽周期，提高了种子发芽率。
【具体实施方式】
[0018] 实施例1
[0019] 1、配制葡萄糖液体培养基于120°(：、11^&，条件下高压灭菌1.51 1，冷却后接入小球 藻藻种，置于培养箱中光照培养，培养温度25°C，培养时间3d后按1:1比例扩培至试管中，生 长至深绿时进一步扩培至l〇〇ml锥形瓶中；
[0020] 2、小球藻提取物的制备：取生长状态良好的小球藻液30mL，密度为2.0 X 107CFU/ 1111，摇勾，离心51]1；[11(25001'/1]1；[11)，离心完毕后沉淀为藻泥。向小球藻泥中加入95%乙醇制成 悬浊液，加入纤维素酶和果胶酶(比例为1:1 )4ml，酶解24h，酶解温度25°C。酶解之后进行再 次离心，时间lOmin，转速是4000r/min。取上清液，减压蒸馏除去乙醇溶剂得小球藻提取物；
[0021] 3、花椰菜种子的处理与培养:选取大小一致，颗粒饱满的100粒花椰菜种子，用2% 双氧水消毒2次，蒸馏水冲洗3次，然后均匀置于铺有滤纸的玻璃培养皿中，加入配制成4% 浓度的小球藻提取液至种子完全浸泡，放入保温箱于25 °C恒温静置24h，后置于室温自然光 照培养发芽。
[0022] 经测定花椰菜种子发芽率为96%，发芽周期为4天。
[0023] 实施例2
[0024] 1、配制葡萄糖液体培养基于120°(：、11^&，条件下高压灭菌1.511，冷却后接入小球 藻藻种，置于培养箱中光照培养，培养温度28°C，培养时间3d后按1:1比例扩培至试管中，生 长至深绿时进一步扩培至l〇〇ml锥形瓶中；
[0025] 2、小球藻提取物的制备：取生长状态良好的小球藻液30mL，密度为2.0 X 107CFU/ 1111，摇勾，离心51]1；[11(25001'/1]1；[11)，离心完毕后沉淀为藻泥。向小球藻泥中加入95%乙醇制成 悬浊液，加入纤维素酶和果胶酶(比例为l:l)6ml，酶解24h，酶解温度25°C。酶解之后进行再 次离心，时间lOmin，转速是4000r/min。取上清液，减压蒸馏除去乙醇溶剂得小球藻提取物； [0026] 3、花椰菜种子的处理与培养:选取大小一致，颗粒饱满的150粒花椰菜种子，用2% 双氧水消毒2次，蒸馏水冲洗3次，然后均匀置于铺有滤纸的玻璃培养皿中，加入配制成4% 浓度的小球藻提取液至种子完全浸泡，放入保温箱于25 °C恒温静置24h，后置于室温自然光 照培养发芽。
[0027]经测定花椰菜种子发芽率为98%，发芽周期为5天。
[0028] 对比例1
[0029] 选取大小一致，颗粒饱满的100粒花椰菜种子，用2%双氧水消毒2次，蒸馏水冲洗3 次，然后均匀置于铺有滤纸的玻璃培养皿中，加入普通种子培养液至种子完全浸泡，放入保 温箱于25 °C恒温静置24h，后置于室温自然光照培养发芽。
[0030] 对比例2
[0031] 选取大小一致，颗粒饱满的150粒花椰菜种子，用2%双氧水消毒2次，蒸馏水冲洗3 次，然后均匀置于铺有滤纸的玻璃培养皿中，加入普通种子培养液至种子完全浸泡，放入保 温箱于25 °C恒温静置24h，后置于室温自然光照培养发芽。
[0032]所述的普通种子培养液为:硝酸钾3g，硝酸钙5g硫酸镁3g，磷酸铵2g;硫酸钾lg，磷 酸二氢钟lg、乙二铵四乙酸二钠 l〇〇mg，硫酸亚铁75mg;硼酸30mg，硫酸猛20mg，硫酸锌5mg， 硫酸铜lmg，钼酸铵2mg，蒸馏水100mL。
[0033] 花椰菜种子发芽率、发芽势的测定方法如下：
[0034] 发芽率=(发芽结束发芽种子数/播种种子数）X 100%
[0035] 发芽势=[第2天发芽种子数/播种种子数]X 100%;
[0036] 实施例1、对比例1中花椰菜种子发芽率如下表：
[0037]
[0038] 实施例1、对比例1中花椰菜种子发芽势如下表：
[0039]
[0040] 实施例2、对比例2中花椰菜种子发芽率如下表：
[0041]
[0042] ~实施例2、对比例2中花椰菜种子发芽势如下表:^' '
[0043]
【主权项】
1. 小球藻提取物在花椰菜种子萌发中应用及其制备方法，其特征在于包括以下步骤： 1) 、配制葡萄糖液体培养基于120°c、lkpa，条件下高压灭菌1.5h，冷却后接入小球藻藻 种，置于培养箱中光照培养，培养温度25-30°C，培养时间3d后按1:1比例扩培至试管中，生 长至深绿时进一步扩培至l〇〇ml锥形瓶中； 2) 、小球藻提取物的制备:取生长状态良好的小球藻液30mL，密度为2.0 X 107CFU/ml，摇 匀，离心5min(2500r/min)，离心完毕后沉淀为藻泥。向小球藻泥中加入95%乙醇制成悬浊 液，加入纤维素酶和果胶酶（比例为1:1) 2-6ml，酶解24h，酶解温度25 °C。酶解之后进行再次 离心，时间lOmin，转速是4000r/min。取上清液，减压蒸馏除去乙醇溶剂得小球藻提取物； 3) 、花椰菜种子的处理与培养:取大小一致，颗粒饱满的花椰菜种子，用2%双氧水消毒 2遍，蒸馏水冲洗3次，然后均匀置于铺有滤纸的玻璃培养皿中，加入配制成4%浓度的小球 藻提取液至种子完全浸泡，放入保温箱于25°C恒温静置24h，后置于室温自然光照培养发 芽。2. 根据权利要求1所述的小球藻提取物在花椰菜种子萌发中应用及其制备方法其特征 在于:葡萄糖液体培养基为:食品工业废水l〇〇ml、葡萄糖10.0 g、微量元素。3. 根据权利要求2所述的小球藻提取物在花椰菜种子萌发中应用及其制备方法其特征 在于：微量元素为FeC6H5〇 · 5H20 3.9g、NaEDTA 4.35g、MnCI · 4H20 2.188g、ZnS〇4· 7H20 0.0278g、CoCl*6H20 0.0687g、CuS〇4*5H20 0.0102g、H3B03 0.08g Na2Mo〇4 2.0g。4. 根据权利要求1所述的小球藻提取物在花椰菜种子萌发中应用及其制备方法其特征 在于:步骤(2)中纤维素酶与果胶酶活性之比为1.0万单位:2.0万单位。
【专利摘要】本发明公开了小球藻提取物在花椰菜种子萌发中应用及其制备方法，具体包括：小球藻提取物制备、花椰菜种子的处理与培养。本发明采用工业废水作为小球藻培养基，为小球藻提供各种丰富的氮磷元素的同时达到净化污水的效果，为实现工业绿色减排生产提供依据。再者由于小球藻提取液中富含各种功能性营养成分，为花椰菜种子萌发提供所需的绿色纯天然各种营养物质，缩短种子发芽周期，提高种子发芽率。
【IPC分类】A01C1/00, A01G31/00, C05F11/10
【公开号】CN105601357
【申请号】CN201510657894
【发明人】支秀芳
【申请人】支秀芳
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2015年10月12日