浒苔多糖在制备畜禽免疫增强剂中的用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及浒苔多糖在制备畜禽免疫增强剂中的用途，属于兽用疫苗免疫增强剂
技术领域。
【背景技术】
[0002] 免疫增强剂（；[1111]11111(^0丨6111^31：01'):通过不同方式，达到增强机体免疫力的一类免 疫治疗药物。临床上常用于治疗与免疫功能低下有关的疾病及免疫缺陷病。
[0003] 申请公布号CN104800275A，发明名称：畜禽用中药多糖免疫增强剂，中药多糖免疫 增强剂是由黄芪、党参、茯苓、香菇制备;黄芪、党参、茯苓、香菇的重量份配比比例为：1:1: 1:1。加工方法:将黄芪、党参、茯苓、香菇粉碎成粉末，按重量份配比混合均匀，经过超声细 胞粉碎提取，然后通过乙醇溶液进行醇沉处理，之后经过洗涤、烘干后获得棕黄色粉末即为 中药多糖免疫增强剂，最后将棕黄色粉末分装入库。改发明可显著改善畜禽的体液免疫反 应，呈现免疫增强作用；明显提高畜禽的成活率，而且还可以显著降低料肉比；能对抗病毒 对畜禽生长发育的影响，对病毒伤害的畜禽内脏有修复作用;在畜禽体内均能促进对淋巴 细胞的转化，增强非特异性细胞免疫的生物学活性。但是配方复杂，成本高。
[0004] 消1苔(Enteromorpha)俗称苔条、海苔，是绿藻植物石药科中的水生藻类植物。消1苔 作为海域的天然海藻，产量极大，浒苔给人们印象最深的不是它的药用和营养价值，而是对 海水的污染，大量浒苔漂浮聚集到岸边，阻塞航道，而且大量浒苔生长会对海洋环境造成生 态危害，是成本低廉的绿色植物。浒苔多糖是浒苔的关键活性成分，大量提取浒苔多糖，是 变废为宝利国利民的事情。目前已经证实多种中药多糖具有增强免疫的功效，但针对浒苔 多糖作为免疫增强剂在畜禽方面的研究国内外鲜有报道。
【发明内容】
[0005] 本发明提供了浒苔多糖在制备畜禽免疫增强剂中的用途，提供了一种新的畜禽免 疫增强剂，不但可以提高畜禽疫苗免疫原性，而且浒苔多糖提取成本低，属于废物利用。
[0006] 为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：
[0007] 本发明提供了浒苔多糖在制备畜禽免疫增强剂中的用途。
[0008] 进一步，本发明的一种优选方案:所述的浒苔多糖的剂型为注射剂。
[0009] 进一步，本发明的一种优选方案:所述的浒苔多糖单独使用或者和其他疫苗一起 使用。
[0010] 进一步，本发明的一种优选方案:所述的消1苔多糖由以下步骤制得：
[0011] (1)新鲜浒苔，清洗干净，晾干；
[0012] (2)将浒苔研磨至粉末，按照料液比100g: 300-500ml，100°C煮沸2-3h，重复4次； [0013] (3)合并滤液，加入3-4倍量95 %乙醇，4°C过夜，4000r/min，离心30-35min;
[0014] (4)取沉淀，溶解于超纯水中，沉淀与超纯水比例为1 g: 80-120ml;
[0015] (5)sevage法除蛋白，取上清，重复3-4次；
[0016] (6)加入 3-4 倍量 95 % 乙醇，4°C过夜，4000r/min，离心 30-35min;
[0017] (7)取沉淀，沉淀加10倍量无水乙醇，浸泡30min后弃去液体;加入10倍量丙酮浸泡 30min后弃去液体;加入10倍量乙醚浸泡30min后弃去液体除脂，得浒苔多糖，冷冻保持；
[0018] (8)取浒苔多糖溶解于超纯水中，过滤除菌，即得。
[0019] 本发明的有益效果：
[0020] 本发明解决浒苔污染环境问题，是变废为宝利国利民的事情；而且可以减少畜禽 传染病的发生，生产绿色安全的畜禽产品。
[0021] 本发明的浒苔多糖得提取方法简单，最大限度了保护浒苔多糖的活性，所提取的 浒苔多糖活性高、产品纯度高。
【具体实施方式】
[0022] 下面结合实施例对本发明的【具体实施方式】进行描述，以便更好的理解本发明。 [0023] 实施例1
[0024]浒苔多糖注射剂的制备:包括以下步骤：
[0025] (1)新鲜浒苔，清洗干净，晾干；
[0026] (2)将浒苔研磨至粉末，按照料液比100g: 300ml，加超纯水，100 °C煮沸3h，重复4 次；
[0027] (3)合并滤液，加入3倍量95%乙醇，4°C过夜，4000r/min，离心30min;
[0028] (4)取沉淀，溶解于超纯水中，沉淀与超纯水比例为lg:80ml;
[0029] (5)sevage法除蛋白，取上清，重复4次；
[0030] (6)加入 4 倍量 95 % 乙醇，4Γ过夜，4000r/min，离心 35min;
[0031] (7)取沉淀，沉淀加加10倍量无水乙醇，浸泡30min后弃去液体;加入10倍量丙酮浸 泡30min后弃去液体;加入10倍量乙醚浸泡30min后弃去液体除脂，得浒苔多糖，苯酚-硫酸 法测的浒苔多糖含量为62%，冷冻保存。
[0032] (8)取浒苔多糖溶解于超纯水中，过滤除菌，即得。
[0033] 实施例2
[0034] 浒苔多糖注射剂的制备:包括以下步骤：
[0035] (1)新鲜浒苔，清洗干净，晾干；
[0036] (2)将浒苔研磨至粉末，按照料液比100g: 400ml，加超纯水，100 °C煮沸2h，重复4 次；
[0037] (3)合并滤液，加入3倍量95%乙醇，4°C过夜，4000r/min，离心35min;
[0038] (4)取沉淀，溶解于超纯水中，沉淀与超纯水比例为lg: 100ml;
[0039] (5)sevage法除蛋白，取上清，重复3次；
[0040] (6)加入 4 倍量 95 % 乙醇，4°C过夜，4000r/min，离心 35min;
[00411 (7)取沉淀，沉淀加加10倍量无水乙醇，浸泡30min后弃去液体;加入10倍量丙酮浸 泡30min后弃去液体;加入10倍量乙醚浸泡30min后弃去液体除脂，得浒苔多糖，苯酚-硫酸 法测的浒苔多糖含量为63%，冷冻保存；
[0042] (8)取浒苔多糖溶解于超纯水中，过滤除菌，即得。
[0043] 实施例3
[0044]浒苔多糖注射剂的制备:包括以下步骤：
[0045] (1)新鲜浒苔，清洗干净，晾干；
[0046] (2)将浒苔研磨至粉末，按照料液比100g: 500ml，加超纯水，100 °C煮沸2.5h，重复4 次；
[0047] (3)合并滤液，加入4倍量95%乙醇，4°C过夜，4000r/min，离心30min;
[0048] (4)取沉淀，溶解于超纯水中，沉淀与超纯水比例为lg: 120ml;
[0049] (5)sevage法除蛋白，取上清，重复3次；
[0050] (6)加入 3 倍量 95 % 乙醇，4°C过夜，4000r/min，离心 30min;
[00511 (7)取沉淀，加10倍量无水乙醇，浸泡30min后弃去液体；加入10倍量丙酮浸泡 30min后弃去液体;加入10倍量乙醚浸泡30min后弃去液体除脂，得浒苔多糖，苯酚-硫酸法 测的浒苔多糖含量为65%，冷冻保存；
[0052] (8)取浒苔多糖溶解于超纯水中，过滤除菌，即得。
[0053] 免疫性实验
[0054] 1 材料
[0055] 1.1试验动物1日龄白羽肉公鸡，由山东畜牧兽医职业学院动物饲养房提供。
[0056] 1.2免疫增强剂制备方法选取实施例1所制备的浒苔多糖注射剂。
[0057] 1 .3新城疫LaSota弱毒疫苗，购自齐鲁动物保健品有限公司，生产批号： 150252014；
[0058]新城疫标准抗原和阳性血清，由山东畜牧兽医职业学院防检系微生物与传染病试 验室提供。
[0059] 1.4新城疫HI抗体测定:采用国标，用微量法，红细胞的工作浓度为1 %。
[0060] 2 方法
[0061 ] 2.1试验设计与分组
[0062] 1日龄白羽肉公鸡养至14日龄(平均母源抗体效价为4.21og2)，随机分为6组，1、2、 3、4、5、6组，每组30只。1、2、3组为实验组，4组为疫苗对照组，5组为空白对照组，6组为多糖 对照组。1组每只鸡注射0 . lg/kg浒苔多糖，2组每只鸡注射0.2g/kg浒苔多糖，3组每只鸡注 射0.3g/kg浒苔多糖，6组每只鸡注射0.2g/kg浒苔多糖作为多糖对照组。1、2、3、4组每只鸡 颈部皮下注射新城疫LaSota弱毒疫苗，1羽份/只，5组对照组(Control)注射等量生理盐水， 6组不接种疫苗。
[0063] 2.2鸡新城疫HI抗体滴度的测定
[0064] 于免疫后3、7、11、14、21翼下静脉采血0.5mL，3000r/min离心5min分离血清，用微 量血凝抑制法测定鸡新城疫HI抗体滴度。（国标）
[0065] 2.3数据处理
[0066] 利用SPSSStatistiCsl9.0统计分析软件进行数据分析，多重比较用LSD法进行，试 验数据用用平均值土标准差并进行显著性比较。
[0067] 3.结果
[0068] 3.1浒苔多糖对新城疫抗体滴度的影响见表1。
[0069] 同时注射浒苔多糖和疫苗的试验组1、2、3组产生抗体的速度要比仅仅注射疫苗的 4组对照组快，在免疫后第14d就能达到高水平的抗体。1、2、3试验组的抗体滴度均高于4组 对照组，同时1、2、3试验组在免疫后3、7、11、14、21(1的同期抗体水平显著高于4对照组0〈 0.05);空白组5组抗体水平逐渐降低，注射多糖没注射疫苗实验组6组抗体水平在3、7、11、 14d时维持原有抗体水平，21d后逐渐降低。免疫后第7dl、2、3试验组的抗体滴度显著高于4 对照组，免疫后第3d试验组2组的抗体水平显著高于试验组1组和3组(P〈0.05)，实验组3组 抗体水平显著高于实验组1组(P〈〇.05)。免疫14d所有组抗体滴度都达到最高峰值，免疫后 21d所有组的抗体滴度都开始降低，试验组仍维持高水平的抗体。
[0070] 表1 HI抗体滴度的影响log2 「00711
[0072] 注：同列数据肩标字母不同表示差异显著(P〈0.05)，字母相同表示差异不显著(P> 0.05)〇
[0073] 以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员 来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为 本发明的保护范围。
【主权项】
1. 浒苔多糖在制备畜禽免疫增强剂中的用途。2. 根据权利要求1所述的浒苔多糖在制备畜禽免疫增强剂中的用途，其特征在于:所述 的浒苔多糖的剂型为注射剂。3. 根据权利要求1所述的浒苔多糖在制备畜禽免疫增强剂中的用途，其特征在于:所述 的浒苔多糖单独使用或者和其他疫苗一起使用。4. 根据权利要求1-3任一项所述的浒苔多糖在制备畜禽免疫增强剂中的用途，其特征 在于:所述的浒苔多糖由以下步骤制得： (1) 新鲜浒苔，清洗干净，晾干； (2) 将浒苔研磨至粉末，按照料液比100g: 300-500ml，加超纯水，100 °C煮沸2-3h，重复4 次； (3) 合并滤液，加入3-4倍量95 %乙醇，4 °C过夜，4000r/min，离心30-35min; (4) 取沉淀，溶解于超纯水中，沉淀与超纯水比例为1 g: 80-120ml; (5) sevage法除蛋白，取上清，重复3-4次； (6) 加入 3-4 倍量 95 % 乙醇，4 °C过夜，4000r/min，离心 30-35min; (7) 取沉淀，沉淀加无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤除脂，得浒苔多糖，冷冻保持； (8) 取浒苔多糖溶解于超纯水中，过滤除菌，即得浒苔多糖注射剂。
【专利摘要】本发明涉及浒苔多糖在制备畜禽免疫增强剂中的用途，所述的浒苔多糖由以下步骤制得：(1)新鲜浒苔，清洗干净，晾干；(2)将浒苔研磨至粉末，100℃煮沸2-3h，重复4次；(3)合并滤液，加入乙醇，4℃过夜，4000r/min，离心；(4)取沉淀，溶解于超纯水中；(5)sevage法除蛋白；(6)加入3-4倍量95％乙醇，4℃过夜，4000r/min，离心30-35min；(7)取沉淀，除脂，得浒苔多糖，冷冻保持；(8)取浒苔多糖溶解于超纯水中，过滤除菌，即得。本发明解决浒苔污染环境问题，是变废为宝利国利民的事情；而且可以减少畜禽传染病的发生，生产绿色安全的畜禽产品。
【IPC分类】A61P37/04, C08B37/00, A61K36/05
【公开号】CN105646725
【申请号】
【发明人】孙秋艳, 张广斌, 李舫, 李汝春, 朱明恩, 沈美艳
【申请人】山东畜牧兽医职业学院
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2016年1月22日